到哺乳动物的上皮细胞在体外细菌粘附的含量
Summary
此协议是一个简单的细菌粘附实验，计数菌落形成单位，坚持到培养细胞的数量。该检测是可靠的，独立的黏附研究，并有众多的变化在大多数实验室中使用细菌发病机制的工作。
Abstract
导致细菌感染，细菌必须去占领他们的主人。细菌病原体表达的不同的分子或结构，能够促进宿主细胞的附件1。这些粘附依靠与宿主细胞表面的受体或可溶性蛋白质充当细菌和主机之间的桥梁的相互作用。附着力是关键的第一步之前，入侵和/或分泌的毒素，因此，它是在细菌的发病机制研究的一个重要事件。此外，坚持细菌往往诱发精美微调的细胞反应，其中已生育的“细胞微生物学”2领域的研究。因此，乐百氏细菌粘附在宿主细胞和它们的入侵检测细菌的发病机制研究中发挥关键作用，并一直在许多先驱实验室 3,4 。这些检测现在实行的大多数细菌的发病工作实验室。
在这里，我们描述了一个标准的遵守实验说明了一个具体黏附的贡献。我们利用大肠杆菌 2787 5，人类致病株表达autotransporter弥漫遵守（AIDA）的黏附。作为对照，我们使用了一个突变株缺乏2787Δ 阿依达 （F. Berthiaume和M. Mourez，未发表）， 阿依达的基因，和E.商业实验室应变大肠杆菌 ，C600（New England Biolabs公司）。这种细菌是留给坚持从常用的HEP – 2人类上皮细胞株的细胞。此实验已经越来越广泛地描述前 6 。
Protocol
Discussion
本协议描述了一个标准的细菌黏附实验研究入侵（如使用庆大霉素保护法 3）可以修改。菌落形成单位计数允许量化，如姬姆萨染色，在显微镜下，依靠标准的可视化技术的方法相比。后者只给出了一个定性的附着力，但往往是一个有益的补充，因为它可以区分各种图案的附着力和mechanistical 见解 9 。例如，一个姬姆萨染色进行接种10 7 cfu的2787，如图2所示，表明整个细胞?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
在作者的实验室的工作是由自然科学和工程研究理事会，加拿大，加拿大卫生研究院的研究所，加拿大研究教席计划的拨款支持。 JL支持通过全宗RECHERCHE EN桑特魁北克的资金由集团的练习曲DES Protéines Membranaires（GEPROM）的奖学金。
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
Referências
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