Ensaio de vitro da adesão bacteriana em mamíferos Células Epiteliais
Summary
Este protocolo é um ensaio de adesão bacteriana simples que consiste na contagem do número de unidades formadoras de colônia de bactérias que são aderidos em células em cultura. O ensaio é robusto, independente da adesina estudado, e inúmeras variações são usadas na maioria dos laboratórios que trabalham com patogênese bacteriana.
Abstract
Para causar infecções, as bactérias precisam colonizar seu hospedeiro. Patógenos bacterianos expressar várias moléculas ou estruturas capazes de promover a ligação às células hospedeiras 1. Estas adesinas confiar em interações com os receptores da célula hospedeira superfície ou proteínas solúveis agindo como uma ponte entre bactérias e hospedeiro. Adesão é um primeiro passo crítico antes da invasão e / ou secreção de toxinas, por isso, é um evento-chave a ser estudado na patogênese bacteriana. Além disso, as bactérias aderiram muitas vezes induzem exquisitely aperfeiçoá-lo respostas celulares, os estudos que deram origem ao campo da 2 'celular microbiologia. Ensaios robusta para adesão bacteriana em células hospedeiras e sua invasão, portanto, têm um papel fundamental em estudos de patogenia de bactérias e têm sido muito utilizados em muitos laboratórios pioneira 3,4. Estes ensaios estão agora praticado pela maioria dos laboratórios que trabalham com patogênese bacteriana.
Aqui, descrevemos um teste de aderência normal ilustrando a contribuição de uma adesina específica. Usamos a cepa de Escherichia coli 2787 5, uma cepa patogênica humana expressando o autotransporter Adhesin Envolvidos na adesão difusa (AIDA). Como controle, utilizamos uma estirpe mutante sem o gene Aida, 2787Δ aida (F. e M. Berthiaume Mourez, não publicado), e uma cepa de laboratório comercial de E. coli, C600 (New England Biolabs). As bactérias são deixados para aderir às células do comumente usado HEp-2 linha celular humana epiteliais. Este ensaio tem sido menos extensivamente descrito anteriormente 6.
Protocol
Discussion
Este protocolo descreve um ensaio de adesão padrão de bactérias que podem ser modificados para estudar a invasão (por exemplo, utilizando gentamicina ensaio de proteção 3). A contagem de unidades formadoras de colônia permite quantificar, em comparação com abordagens contando com técnicas de visualização padrão sob um microscópio, como coloração Giemsa. Este último só dá uma visão qualitativa de adesão, mas muitas vezes é um complemento útil, pois pode diferenciar vários padrões de ad…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Trabalho nos laboratórios dos autores é suportado por concessões do Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada, os Institutos de Pesquisa em Saúde do Canadá, eo Canadá Research programa presidentes. JL é apoiado por uma bolsa de estudos do Groupe d'Étude des Protéines Membranaires (GEPROM) através do financiamento do Fonds de Recherche en Santé du Québec.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
Referências
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