In-vitro-Assay der bakteriellen Adhäsion auf Mammalian Epithelzellen
Summary
Dieses Protokoll ist eine einfache bakterielle Adhäsion Assay aus der Zählung die Zahl der bakteriellen Kolonie bildende Einheiten, die auf kultivierten Zellen eingehalten werden. Der Test ist robust, studierte unabhängig von der Adhäsin und zahlreiche Variationen sind in den meisten Labors arbeiten bakterielle Pathogenese.
Abstract
Um Infektionen verursachen, müssen Bakterien besiedeln die Gastgeber. Bakterielle Krankheitserreger Ausdruck verschiedener Moleküle oder Strukturen in der Lage, um die Befestigung zu fördern, um Zellen 1 Host. Diese Adhäsine setzen auf Interaktion mit dem Host Rezeptoren auf der Zelloberfläche oder lösliche Proteine, die als eine Brücke zwischen Bakterien und Wirt. Die Haftung ist ein entscheidender erster Schritt vor der Invasion und / oder Sekretion von Toxinen, daher ist es eine der wichtigsten Veranstaltungen in bakterielle Pathogenese untersucht werden. Darüber hinaus haften Bakterien oft exquisit induzieren Feinabstimmung zellulären Reaktionen, die Studien, die entbunden haben auf dem Gebiet der "zellulären Mikrobiologie '2. Robust-Assays für die bakterielle Adhäsion an Wirtszellen und ihre Invasion spielen daher eine Schlüsselrolle in bakterielle Pathogenese Studien und seit langem in vielen Labors Pionier 3,4 verwendet worden. Diese Assays sind mittlerweile von den meisten Labors arbeiten bakterielle Pathogenese praktiziert.
Hier beschreiben wir eine Standard-Einhaltung Assay illustrieren den Beitrag eines spezifischen Adhäsin. Wir nutzen die Escherichia coli-Stamm 2787 5, eine humanpathogene Stamm, der Autotransporter Adhesin in Diffuse Adherence (AIDA) beteiligt. Zur Kontrolle verwenden wir eine Mutante fehlt die Aida-Gen, 2787Δ Aida (F. Berthiaume und M. Mourez, unveröffentlicht), und ein kommerzielles Labor-Stamm von E. coli, C600 (New England Biolabs). Die Bakterien werden nach links, um die Zellen aus dem häufig verwendeten HEp-2 menschlichen epithelialen Zell-Linie zu halten. Dieser Assay wurde weniger intensiv vor 6 beschrieben.
Protocol
Discussion
Dieses Protokoll beschreibt eine Standard-bakteriellen Adhärenz-Assay, modifiziert Invasion Studie (zB mit Gentamicin Protection Assay 3) werden kann. Die Zählung der koloniebildenden Einheiten ermöglicht die Quantifizierung durch Vergleich mit Ansätzen unter Berufung auf Standard-Visualisierungs-Techniken unter einem Mikroskop, wie Giemsa. Letztere gibt nur einen qualitativen Blick Haftung wird aber oft eine sinnvolle Ergänzung, da es verschiedene Muster der Haftung kann differenzieren und geben mechani…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Arbeit in den Laboratorien der Autoren wird durch Zuschüsse aus dem Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada, der kanadischen Institutes of Health Research, und die Canada Research Chairs-Programm unterstützt. JL wird durch ein Stipendium der Groupe d'Etude des protéines Membranaires (GEPROM) durch Mittel aus dem Fonds de Recherche en Santé du Québec unterstützt.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
Referências
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