准备从大鼠脾细胞T细胞生长因子

Summary

我们描述的T细胞生长因子在体外扩增抗原特异性大鼠T淋巴细胞线的准备。

Abstract

抗原特异性T细胞株或文化克隆的维修需要轮抗原诱导激活细胞^扩张 1,2阶段分开。白细胞介素2除了在扩张阶段的文化传媒，是必要措施，防止细胞死亡，并足以维持短期的T细胞系，但已被证明能增加^Th1细胞极化3。 T细胞生长因子（TCGF），其中包含混合的细胞因子白细胞介素2的更换是更有效地保持长期的T细胞系在^体外培养3比白细胞介素2。此外，TCGF可以很容易地在实验室中大量的准备和重组白细胞介素2比便宜得多。

在这里，我们展示如何准备从大鼠脾细胞培养上清TCGF。在此过程中，我们收获脾脏从幼稚刘易斯安乐死大鼠胸腺和血液采集。我们准备从脾单细胞悬液，析渗透压冲击的红血细胞，而种子在培养基中的脾。与非选择性地激活所有大鼠T淋巴细胞，诱导细胞因子的产生，有丝分裂原刀豆蛋白A的细胞受到刺激。文化supernantant收集48小时后andexcess伴刀豆球蛋白A是必然的α甲基mannoside，以防止它激活T细胞，TCGF将增加线路。 TCGF是无菌过滤，分装，储存于-20 ° C

Protocol

以Lewis大鼠脾脏（160 – 200G之间的老鼠是最好的）。在培养皿菜含有PBS +抗生素（PBS – PS），使用细胞过滤器Dilacerate冰。放入50毫升管。填写用PBS – PS。 自旋为10分钟，在4 ° C至沉淀细胞。 清洗细胞两次。 悬浮颗粒在NH 4氯0.15米（5毫升每脾）。混合3分钟就冰吸管轻轻地，不断溶解红细胞。填充介质管。 自旋为10分钟，在4 ° C至沉淀细胞。 清洗细胞两次。 </…

Discussion

我们准备从Lewis大鼠脾细胞TCGF，因为我们经常从天真这株收获血清和thymi Lewis大鼠T细胞系在体外刺激大鼠安乐死。这TCGF，可以被用来促进从其他的大鼠株T细胞系的生长和生存。 TCGF也可准备从其他菌株的大鼠。

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
PBS, 1x, sterile	Reagent	Gibco / Invitrogen	14040-182
Penicillin / Streptomycin 100x	Reagent	Sigma	P0781	Add 5 ml of 100x solution to 500 ml PBS to prepare PBS-PS
Cell strainer, 70 um diameter	Tool	Fisher	08-771-2
Ammonium Chloride (NH4Cl)	Reagent	Sigma	A0171	Prepare a 0.15 M solution in sterile distilled water, keep cold
RPMI 1640	Reagent	Gibco / Invitrogen	21870-092
Fetal Bovine Serum (FCS, FBS)	Reagent	Gibco / Invitrogen	16140-071	Heat-inactivated
Penicillin / Streptomycin / L-Glutamine	Reagent	Cambrex / Biowhittaker	17-718R	PSG
RPMI vitamins, 100x	Reagent	Sigma	R7256
Sodium pyruvate, 100x	Reagent	Sigma	S8636
Non-essential amino acids, 100x	Reagent	Sigma
Beta-mercaptoethanol	Reagent	Sigma	M7522
alpha methyl mannoside	Reagent	Sigma	M6882
Concanavalin A	Reagent	Sigma	M6882

To prepare complete culture medium add the following to a 500 ml bottle of RPMI 1640 and sterile-filter: 10% FCS; 1 bottle of PSG; 5 ml RPMI vitamins; 5 ml sodium pyruvate; 5 ml non-essential amino acids; 50 uM beta-mercaptoethanol; 2 ug/ml Concanavalin A.