ラットの脾細胞からT細胞増殖因子の準備
Summary
我々は、抗原特異的ラットTリンパ球のラインのin vitroでの拡大のために使用されるT細胞増殖因子の調製を記載。
Abstract
培養中の抗原特異的T細胞株やクローンのメンテナンスは、細胞の膨張の1,2の段階で区切られた抗原誘発活性化のラウンドが必要です。拡張フェーズ中に培地にインターロイキン2の添加は細胞死を防止するために必要と短期的なT細胞株を維持するのに十分ですが、Th1の偏光3を高めることが示されている。サイトカインの組み合わせを含むT細胞増殖因子（TCGF）によるインターロイキン2の交換は、in vitro 3に、長期的なT細胞株を維持するためにインターロイキン2よりも効果的です。また、TCGFは、簡単に実験室で大量に用意し、組換えインターロイキン2よりもはるかに安価であることができる。
ここで、我々はラット脾細胞培養上清からTCGFを準備する方法を示します。この手順では、我々は胸腺と血液採取のために安楽死させナイーブLewisラットから脾臓を採取する。我々は、脾臓からの単細胞懸濁液を準備し、浸透圧ショックにより赤血球をlyze、およびシード培地に脾細胞。細胞は、コンカナバリンA、非選択的にサイトカインの産生を誘導する、すべてのラットのTリンパ球を活性化することをマイトジェンで刺激されています。文化supernantantがandexcessコンカナバリン48時間後に収集されるTCGFが追加されるT細胞株を活性化するからそれを防ぐために、アルファメチルマンノシドにバインドされています。 TCGFは、分注し、滅菌濾過し、-20℃で保存
Protocol
Discussion
我々は定期的に血清とthymusの複数形は、in vitroでルイスラットT細胞株を刺激するために収穫するために、この株からナイーブなラットを安楽死させるので、我々は、ルイスラットの脾細胞からTCGFを準備。このTCGFは、他のラット系統からのT細胞系の増殖と生存を促進するために使用することができます。 TCGFは、ラットの他の株から調製することができる。
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14040-182 | |
| Penicillin / Streptomycin 100x | Reagent | Sigma | P0781 | Add 5 ml of 100x solution to 500 ml PBS to prepare PBS-PS |
| Cell strainer, 70 um diameter | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Ammonium Chloride (NH4Cl) | Reagent | Sigma | A0171 | Prepare a 0.15 M solution in sterile distilled water, keep cold |
| RPMI 1640 | Reagent | Gibco / Invitrogen | 21870-092 | |
| Fetal Bovine Serum (FCS, FBS) | Reagent | Gibco / Invitrogen | 16140-071 | Heat-inactivated |
| Penicillin / Streptomycin / L-Glutamine | Reagent | Cambrex / Biowhittaker | 17-718R | PSG |
| RPMI vitamins, 100x | Reagent | Sigma | R7256 | |
| Sodium pyruvate, 100x | Reagent | Sigma | S8636 | |
| Non-essential amino acids, 100x | Reagent | Sigma | ||
| Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M7522 | |
| alpha methyl mannoside | Reagent | Sigma | M6882 | |
| Concanavalin A | Reagent | Sigma | M6882 |
Referências
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 166, 936-944 (2001).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).
- Mor, F., Cohen, I. R. Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2. J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).
