एक प्रोटोकॉल का आकृति परिवर्तन करने के लिए<em> क्लॉस्ट्रिडियम डिफ़िज़ील</em> एंटीबायोटिक उपचार के जवाब में
Summary
Antibiotic efficacy is most commonly determined by conducting killing kinetic studies and measuring colony forming units (CFUs). By integrating scanning electron microscopy (SEM) with these standard methods, we can distinguish the pharmacological effects of treatment between different antibiotics.
Abstract
अनैरोबिक जीवाणुओं के प्रति निर्देशित नई दवा के विकास के साथ एंटीबायोटिक कार्रवाई का आकलन कठिन और तकनीकी रूप से मांग है। संभव एमओए में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए, एंटीबायोटिक एक्सपोज़र से जुडी हुई आकृति परिवर्तनों को स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) का उपयोग करके देखा जा सकता है। पारंपरिक मार घटता से एसईएम इमेजिंग को एकीकृत करना दवा की कार्रवाई में हमारी अंतर्दृष्टि को सुधार सकता है और दवा विकास प्रक्रिया को आगे बढ़ा सकता है। इस आधार का परीक्षण करने के लिए, ज्ञात लेकिन अलग-अलग एमओए (वैनोकॉइसिन और मेट्रोनिडाजाइल) के साथ ड्रग्स और एसईएम अध्ययनों को मार डालो। सी। स्फेसिइल कोशिकाएं (आर 20291) 48 घंटे तक एंटीबायोटिक के साथ या बिना उपस्थित थे। 48 घंटे के अंतराल के दौरान, एंटीबायोटिक प्रभावकारिता निर्धारित करने और एसईएम पर इमेजिंग के लिए कई समय बिंदुओं पर कोशिकाओं को एकत्र किया गया। पिछली रिपोर्ट, वैनकॉमिसिन और मेट्रोनिडाजोल के साथ संगत 24 घंटे के उपचार के बाद बृहदान्त्र संबंधी गतिविधि में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई गई थी, जिसे कॉलोनी-फॉर्मिंग यूनिट (सीएफयू) द्वारा मापा गया थाटिंग। एसईएम इमेजिंग का प्रयोग करके हमने निर्धारित किया है कि मेट्रोनिडाजोल के नियंत्रण और वैनकॉमिसिन की तुलना में सेल लंबाई (> प्रत्येक एंटीबायोटिक के लिए सेल लंबाई में 50% की कमी; पी <0.05) पर महत्वपूर्ण प्रभाव था। जबकि दवा के उपचार के प्ररूप प्रतिकृति इस तरीके से पहले प्रलेखित नहीं किए गए हैं, वे दवा के एमओए से इमेजिंग और मापन की बहुमुखी प्रतिभा और विश्वसनीयता और अन्य प्रयोगात्मक यौगिकों के लिए इस तकनीक के आवेदन का प्रदर्शन करने के अनुरूप हैं।
Introduction
क्लॉस्ट्रिडियम डिसिफेइल एक ग्राम पॉजिटिव है, बीजाणु बनाने वाला जीवाणु है, जो यूएस में सालाना लगभग 500,000 संक्रमणों का कारण बनता है और इसे केंद्र के रोग नियंत्रण और रोकथाम (सीडीसी) के लिए खतरे का स्तर तत्काल रोगजन्य माना जाता है, जो उच्चतम स्तर का जोखिम है। 1 पिछले दशक में सी। डीफिसिले के खिलाफ गतिविधि के साथ एंटीमाइकॉयलियल्स में काफी दवा का विकास हुआ है । 2 , 3 इन विट्रो अध्ययन में दवा के विकास की प्रक्रिया का एक आवश्यक घटक है। 4 परंपरागत रूप से, इन विट्रो संवेदनशीलता और समय मारने के अध्ययनों में भविष्य के पशु को प्रमाणित करने के लिए और विवो अध्ययन में अन्य के लिए उपयोग किया जाता है।
जबकि इन विधियों ने मारने की कार्रवाई के मूल्यांकन के लिए एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है, लेकिन वे औषधीय उपचार के लिए कोशिकाओं के फेनोटाइपिक प्रतिक्रिया पर कब्जा नहीं करते हैं। स्टैंडर के साथ स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) को शामिल करकेमौत के गतिज अध्ययन, एंटीबायोटिक प्रत्यक्ष प्रभाव का अधिक संपूर्ण लक्षण वर्णन संभव है। 5 , 6 , 7 यहां, हम एक ऐसी विधि प्रस्तुत करते हैं जहां एसईएम को एंटीबायोटिक उपचार की प्रभावकारीता को प्रोफाइल करने के साधन के रूप में उपयोग किया जाता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान अध्ययन का लक्ष्य सी। विघटनकारी को अलग करने और एंटीबायोटिक की औषधीय क्रियाओं के अधिक संपूर्ण लक्षण वर्णन के लिए स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) का उपयोग कर एंटीबायोटिक संवेदनश?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments have been supported by research grants from Merck and Co. and Summit, PLC.
Materials
| cotton gauze | Caring | PRM21408C | |
| NaCl | Macron | 7532 | |
| 50mL tubes | Falcon | 352098 | |
| Brain Heart Infusion (BHI) | Criterion | C5141 | |
| L-cysteine | Alfa Aesar | A10389 | |
| yeast extract | Criterion | C741 | |
| sodium taurocholate | Alfa Aesar | A18346 | |
| anaerobic chamber | Coy | vinyl anaerobic chamber | |
| cycloserinecefoxitin fructose agar (CCFA) plates | Anaerobe systems | AS-213 | |
| blood agar plates | Hardy diagnostics | A-10 | |
| latex agglutination reagent | Oxoid | DR1107A | C. diff test kit |
| microcentrifuge tubes | Eppendorf | 222363204 | |
| PBS | Gibco | 10010-031 | |
| 4% paraformaldehyde | Fisher Scientific | 50-259-98 | |
| microscope slides | J. Melvin freed brand | 7525M | 75x25mm |
| flow hood | Labconco | Class II type A2 | biosafety cabinet |
| desk sputtering machine | Denton Vacuum | Desk II | |
| tape | Plastic Core | 05072-AB | SPI Double Sided Adhesive Carbon Tape |
| gold | Denton Vacuum | TAR001-0158 | 2.375” Diameter x .002” Thick Gold foil |
| scanning electron microscope | FEI | XL-30 |
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