Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları
Summary
Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.
Abstract
Vasküler yetmezlik ve normal retina perfüzyon değişiklikler için çeşitli görme tehdit oküler hastalıklar, Diyabetik retinopati, hipertansif retinopati ve muhtemelen glokom gibi patogenezinde önemli faktörler arasındadır. Bu nedenle, retina mikrovasküler hazırlıklar önemli fizyolojik ve farmakolojik araştırmalar temel patofizyolojik mekanizmaları betimlemek ve hastalıklar için tasarım terapiler için araçlardır. Oftalmik araştırma fare modellerinde geniş kullanılmasına rağmen retinal vasküler reaktivite çalışmaları bu tür azdır. Bu retina kan damarları olan küçük boyutu sayesinde zorlu yalıtım yordamlar büyük sebebi bu tutarsızlık ~ ≤ 30 µm luminal çapındadır. Fare retina vasoactivity-fizyolojik koşullar altında ex vivo çalışmalar sağlar bir yalıtım ve hazırlama tekniği kurduk bu retina yüzdeki fonksiyonel çalışmalar için doğrudan yalıtım sorunu aşmak için . Her ne kadar mevcut deneysel hazırlıklar özellikle fare retina arteriyoller sevk edecektir, bu metodoloji kolayca yüzdeki için sıçanlarından emir istihdam edilebilir.
Introduction
Retina perfüzyon bozukluğu diabetik retinopati, hipertansif retinopati ve glokom1,2,3gibi çeşitli oküler hastalıkların patogenezinde karıştığı olmuştur. Böylece, retinanın vasküler reaktivite ölçme amaçlı çalışmalar bu hastalıklar Patofizyoloji anlamak önemlidir ve yeni tedavi geliştirmek için yaklaşımlar.
Fare genom gen manipülasyon olasılığı nedeniyle, fare kardiyovasküler sistem4çalışmaları için yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli haline gelmiştir. Ancak, retina kan damarları (≤ 30 µm) küçük boyutu nedeniyle, fare retinanın vasküler reaktivite ölçümü zordur. Örneğin, in vivo ölçüm için stereomicroscopic teknikleri onların optik çözünürlük sınırlı olduğunu ve bu nedenle tam olarak çapı veya kan akışı ile donatılmış ≤ 30 µm çapı az küçük kan değişiklikleri algılamak için yalnızca izin ver Floresan boyalar veya uyarlamalı optik tarama ışık Ophthalmoscope5,6kullanarak confocal mikroskop gibi ek sofistike aygıtlar. Ayrıca, yerel tanımlama amaçlı vivo içinde ölçümleri yorumlanması mekanizmaları retina kan damarlarında Anesteziyoloji, şaşırmış sinyal sistemik kan basıncı ve etkisi retrobulbar kan damarlarının değiştirir.
Bu nedenle, yüksek optik çözünürlük ex vivoile fare retina kan damarlarının yanıtları ölçmek için bir yöntem geliştirdi. Burada sunulan teknik retinal arteriyoller üzerinden iletilen ışık mikroskobu görselleştirme sağlar. Fareler de kullanılabilir, bu yöntem gen teknolojisi oküler vasküler araştırma hedefleme avantajları erişim sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Vasküler fare retina yanıt-e doğru ölçü retina damarları küçük boyutu nedeniyle meydan okuyor. Sunulan tekniği ile retina arteriyoller tarafından iletilen ışık mikroskobu görüntülenir. İzole retina yarı saydam olduğundan bu mümkündür. Teknik yüksek optik çözünürlük avantajdır. Hesaplanan Uzaysal çözünürlük 11 px/µm var. Ancak, beyaz ışık kullanır bu optik sistemi için gerçek çözünürlüğünü Abbe kırınım sınırına göre açıkladı 200 ve 300 nm arasındadır. Fare ret…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser hibe Ernst und Berta Grimmke Stiftung ve Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft (köpek) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Steel Scissors | Carl Roth GmbH | 3576.1 | 1x 140 mm |
| Eye Scissors | Geuder | G-19390 | 1x straight, 10.5 cm |
| Precision tweezers, straight with fine tips | Carl Roth GmbH | LH68.1 | 2x type 4 |
| Precision tweezers, straight with extra fine tips | Carl Roth GmbH | LH53.1 | 2x type 5 |
| Vannas capsulotomy scissors | Geuder | 19760 | 1x straight, 77 mm |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91501-09 | 1x curved, |
| Barraquer Needle Holder | Geuder | G-17500 | 1x curved, 120 mm |
| Needle | Becton, Dickinson and Company | 305128 | 1x 30 G |
| Glass Capillaries (for producing micropipettes) | Drummond Scientific Company | 9-000-1211 | 1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter) |
| Nylon Suture | Alcon | 198001 | 1x 10-0 |
| Nunclon cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | 1x 35 mm diameter |
| Nunclon cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 172931 | 1x 100 mm diameter |
| Discofix C | Braun | 16500C | 10 cm |
| Histoacryl adhesive | B. Braun Surgical, S.A. | 1050052 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Pericyclic pump (CYCLO II) | Carl Roth GmbH | EP76.1 | 1x |
| Vertical Pipette Puller Model 700C | David Kopf Instruments | 1x | |
| Microscope (Vanox-T AH-2) | Olympus | 1x | |
| Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA | Olympus | 1x | |
| Digital camera (TK-C1381) | JVC | 1x | |
| Perfusion chamber | self-made | 1x | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drugs and Solutions | |||
| Ethanol | Carl Roth GmbH | K928.4 | |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Carl Roth GmbH | 5239.1 | |
| Kalium chloride (KCl) | Carl Roth GmbH | 6781.1 | |
| Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | Carl Roth GmbH | 3904.2 | |
| Magnesium sulphate (MgSO4) | Carl Roth GmbH | 261.2 | |
| Sodium chloride (NaCl) | Carl Roth GmbH | 9265.2 | |
| Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3) | Carl Roth GmbH | 0965.3 | |
| α-(D)-(+)- Glucose monohydrate | Carl Roth GmbH | 6780.1 | |
| 9,11-dideoxy-9α,11α-methanoepoxy prostaglandin F2α (U-46619) | Cayman Chemical | 16450 | |
| Acetylcholine chloride | Sigma-Aldrich | A6625-25G |
Referências
- Toda, N., Nakanishi-Toda, M. Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy. Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).
- Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy. Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).
- Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma. Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).
- Faraci, F. M., Sigmund, C. D. Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight. Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).
- Kornfield, T. E., Newman, E. A. Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells. eNeuro. 2 (2), (2015).
- Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye. Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).
- Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).
- Gericke, A., et al. Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).
- Gericke, A., et al. Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).
- Bohmer, T., et al. The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium. Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).
