Cystometric en externe urethrale sluitspier metingen in wakker ratten met geïmplanteerde katheter en elektroden waardoor voor herhaalde metingen
Summary
Dit protocol beschrijft eerst de chirurgische procedure de permanente innesteling van een urineblaas katheter gecombineerd met externe urethrale sluitspier elektroden, en de tweede, de waardering van de functie van de urineblaas en de externe urethrale sphincter in geïmplanteerde wakker dieren.
Abstract
Lagere urinewegen functie is voornamelijk beoordeeld door middel van cystometric blaas functie analyse bij knaagdieren. Conventionele cystometries worden gewoonlijk uitgevoerd als terminal analyse onder urethaan verdoving. Het is algemeen bekend dat de verdovende drugs functie van de blaas kunnen beïnvloeden. Vandaar, is het doel van deze techniek is metingen uit te voeren cystometric van de urineblaas en de externe urethrale sluitspier in licht ingetogen wakker ratten. Voor dit doel, is een blaas catheter ingeplant in de blaas koepel. Vervolgens twee elektroden bilaterale aan de externe urethrale sluitspier zijn geïmplanteerd en een elektrode grond is om een niet-reagerende skeletspieren ingehecht. De blaas catheter en de drie elektroden zijn ten slotte tunnelverbinding subcutaan aan de nek regio en op een kabelboom aangebracht. Met deze techniek, kan de lagere urinewegen worden gemeten op meerdere tijdstippen in hetzelfde dier te beoordelen van de lagere urinewegen functie. De belangrijkste toepassing van deze techniek is de opvolging van gelijktijdige urineblaas en externe urethrale sluitspier functie bij wakker gezonde ratten en na de inductie van een ziekte of letsel. Bovendien kan latere lagere urinewegen controle worden uitgevoerd tijdens de evaluatie van de ziekte/letsel en controleren van de doeltreffendheid van de behandeling.
Introduction
Voor het analyseren van urine opslag en vernietigen van functie en dysfunctie, hebben de meeste studies knaagdier modellen gebruikt. Door middel van opeenvolgende activering van reflexen, wordt micturition geproduceerd. De coördinatie van deze reflexen is essentieel voor efficiënt leren1. Cystometric opname technieken bieden waardevolle hulpmiddelen voor het analyseren van de functie van de urineblaas onder haar neuraal controle1.
Meeste conventionele cystometries bij ratten zijn gedaan als een enkele, definitieve analyse in anesthesie, voornamelijk urethaan2, en uitsluitend richten op de urineblaas. Echter in bepaalde pathologieën als neurogene lagere urinewegen disfunctie (NLUTD) is niet alleen de urineblaas, maar ook de uitgang van de blaas, de externe urethrale sfincter, disfunctioneel3,4. Dit bemoeilijkt NLUTD follow-up, als alleen de blaas wordt onderzocht in een enkele cystometric meting. Om betrouwbare resultaten die vergelijkbaar met mensen zijn, is het essentieel voor het nauwkeurig meten van zowel de urineblaas en de functie externe urethrale sluitspier en zijn interacties2. Bovendien is het cruciaal voor functionele analyses uitvoeren bij wakker ratten als verdoving is het zeer waarschijnlijk te wijzigen van de blaas functie2,5,6. Een goede cystometric opnemen in wakker dieren is de basis voor de identificatie van blaas functie en storing7.
Het kleine dierlijke cystometry station gebruikt (bijvoorbeeldCatamount cystometry station (CCS)) is een eenheid cystometric-analyses uitvoeren in kleine wakker dieren8. Door middel van een permanente blaas katheter en geïmplanteerde externe urethrale sluitspier elektroden, kunnen herhaalde metingen over een langere tijd perioden2worden uitgevoerd. Het CCS biedt dus een waardevol instrument voor niet-neurogene en NLUTD evaluaties in het knaagdier model, waarin de pathomechanisms tijdens de follow-up van de korte – of middellange termijn veranderen kan. Daarnaast bevat deze methode een artefact verminderde cystometric-analyse met behulp van een afdekking te voeren metingen van de blaas bij wakker ratten.
In deze paper beschrijven we de chirurgische benadering om het implantaat permanent een blaas catheter en externe urethrale sluitspier elektroden, samen met de cystometric metingen bij wakker ratten.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dit protocol beschrijft de chirurgische procedure van een permanente katheter en urethrale sluitspier elektroden implantatie en de opname van techniek in wakker, licht ingetogen ratten met inbegrip van zowel de gelijktijdige analyse van de urineblaas cystometric en externe urethrale sluitspier.
Kritische stappen tijdens de operatie zijn de zorgvuldige inplanting van de blaas catheter, lekkage en uitgebreide manipulatie te voorkomen. Bovendien is een nauwkeurige implantatie van de elektroden op…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs hebben niet alle bevestigingen.
Materials
| Polyethylene tubing PE 50 | Becton Dickinson | 427411 | Catheter |
| Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c) | Ethicon | EH7403H | Suture |
| Teflon coated steel wire | Cooner wire | AS631 | Electrode material |
| Silver wire 0.250 mm | World Precision Instruments | AGW1030 | Electrode material |
| Rotilabo – PVC tube | Carl Roth | 97241 | Harness |
| Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c) | Ethicon | V4940H | Suture |
| Quick Connect Single Harness | SAI Infusion Technologies | QCH-23CW | Harness |
| Shrinking tubes | ChiliTec | 17894 | Electrode soldering |
| Soldering wire Pb60 Sn40 | Stannol | LD0029 | Electrode soldering |
| Fluxing agent 157 | Castolin Eutectin | 157 0150 | Electrode soldering |
| Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Solder ST Thru-Hole Box | Preci-dip | 801-87-050-10-001101 | Electrode soldering |
| Conn Socket Strip SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box | Preci-dip | 890-18-003-10-001101 | Electrode soldering |
| Rat Cystometry Package (contains pump, scale, pressure transducer, hardware for cystometric analysis) | Catamount Research and Development Inc. | CAT-CYT-R | |
| Differential amplifier with active headstage | AD instruments | DP-311 | EMG amplifier |
| Restrainer Medium size for rats 200-300 g | emka Technologies | HLD-RM | |
| Uro Dyn Software | Zürich of University | MTA-based | |
| Female rats (Strain Lewis) 12 weeks of age | Charles River, Sulzfeld, Germany | animals |
Referências
- Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. Rodent models for urodynamic investigation. Neurourol Urodyn. 30, 636-646 (2011).
- Schneider, M. P., et al. A novel urodynamic model for lower urinary tract assessment in awake rats. BJU Int. 115, 8-15 (2015).
- Cruz, C. D., Cruz, F. Spinal cord injury and bladder dysfunction: new ideas about an old problem. Scientific World Journal. 11, 214-234 (2011).
- de Groat, W. C., Yoshimura, N. Plasticity in reflex pathways to the lower urinary tract following spinal cord injury. Exp Neurol. 235, 123-132 (2012).
- Matsuura, S., Downie, J. W. Effect of anesthetics on reflex micturition in the chronic cannula-implanted rat. Neurourol Urodyn. 19, 87-99 (2000).
- Cannon, T. W., Damaser, M. S. Effects of anesthesia on cystometry and leak point pressure of the female rat. Life Sci. 69, 1193-1202 (2001).
- Patra, P. B., Thorneloe, K. S. Enhanced sensitivity to afferent stimulation and impact of overactive bladder therapies in the conscious, spontaneously hypertensive rat. J Pharmacol Exp Ther. 338, 392-399 (2011).
- Herrera, G. M., Meredith, A. L. Diurnal variation in urodynamics of rat. PloS One. 5, e12298 (2010).
- Chang, H. Y., Havton, L. A. Differential effects of urethane and isoflurane on external urethral sphincter electromyography and cystometry in rats. Am J Physiol Renal Physiol. 295, F1248-F1253 (2008).
- Yaksh, T. L., Durant, P. A., Brent, C. R. Micturition in rats: a chronic model for study of bladder function and effect of anesthetics. Am J Physiol. 251, R1177-R1185 (1986).
