Thrombose de l’artère carotide Canine induite par le chlorure ferrique : Un grand modèle Animal de lésion vasculaire
Summary
Nous présentons ici les modifications nécessaires pour un bien caractérisé et couramment utilisé petit induite par le chlorure ferrique (FeCl3) artère carotide blessure modèle animal pour une utilisation dans un modèle de grandes lésions vasculaires chez les animaux. Le modèle résultant peut être utilisé pour une évaluation du procès préclinique d’interventions pharmacologiques et mécaniques, prophylactiques et thrombolytiques.
Abstract
La thrombose artérielle occlusive menant à l’accident vasculaire cérébral ischémique cérébral et d’infarctus du myocarde contribue à 13 millions de décès chaque année dans le monde. Ici, nous avons traduit un modèle de lésion vasculaire d’un petit animal en un grand animal (canine), avec de légères modifications qui peuvent être utilisées pour le dépistage pré-clinique des agents prophylactiques et thrombolytiques. Outre les méthodes chirurgicales, mis à jour le protocole décrit les méthodes pas à pas pour évaluer la canalisation de l’artère carotide en angiographie, des instructions détaillées pour traiter le cerveau et l’artère carotide pour analyse histologique vérifier la carotide canalisation et une hémorragie cérébrale et les paramètres spécifiques à effectuer une évaluation des événements thrombo-emboliques en aval en utilisant la résonance magnétique imagerie (IRM). En outre, des changements de procédure spécifiques du modèle animal petit déjà bien établi nécessaire pour traduire une lésion vasculaire gros animal (canine) sont discutées.
Introduction
Traitement des accidents vasculaires cérébraux s’inspire en grande partie traitement de la maladie coronarienne, principalement parce que les interventions dans les maladies cardiovasculaires ont bien répondu aux drogues thérapie et endovasculaires interventions1. Ces traitements, cependant, n’ont pas correctement traduits d’infarctus cérébral. Les difficultés avec le traitement actuel de la course ne sont que la recombinaison activateur tissulaire du plasminogène (rTPA) ne peut pas être inversée, et qu’administration comporte un risque important de 6,4 % de conversion hémorragique2,3, 4. la mortalité et la morbidité qui limite son utilisation à une petite fenêtre souvent inaccessible5. Aussi, la resténose et occlusion se produisent souvent après thrombolyse initiale, inversant amélioration neurologique initiale. En résumé, il y a une étroite fenêtre temporelle pour administrer le rTPA qui exclut la grande majorité (environ 90 %) des patients qui souffrent des insultes cérébro-vasculaires ischémiques.
Le rôle du traitement antiplaquettaire intraveineuse s’est montré prometteur dans le traitement de l’AVC ischémique avec reperméabilisation du vaisseau améliorée, la survie et résultat2. Malheureusement, ces médicaments ont un effet secondaire prévisible d’hémorragie intracrânienne et extracrânienne, en grande partie car il n’existe aucun moyen de bien inverser ou contrôler leur activité2. Bien qu’efficace en empêchant l’agrégation des plaquettes, le risque d’hémorragie et de l’incapacité d’inverser leur activité ont empêché leur utilisation dans la routine de soins des patients d’AVC. Il est donc nécessaire, pour des médicaments antithrombotiques puissants qui agissent seuls ou en combinaison, pour prévenir et lyser les caillots tout en ayant un profil d’innocuité qui permettra l’utilisation dans un espace fermé, faible volume, comme le cerveau, où l’hémorragie est mal tolérée.
Comprendre le mécanisme de la thrombose artérielle et de la resténose et l’évaluation de thrombolytiques et médicaments qui préviennent la resténose, requiert des modèles animaux petits et grands dans le cadre du développement du médicament préclinique. Lésion vasculaire induite par le chlorure ferrique est une technique largement utilisée pour la rapidité et de précision induisent la formation de caillots dans les vaisseaux sanguins exposés des souris, rats, cobayes et lapins6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12. ces petites espèces offrent plusieurs avantages dont la facilité de manipulation génétique, achat animaux peu coûteux et faible coûts de logement par jour. Malheureusement, l’expérimentation animale petite nie plusieurs tirages de sang pendant la chirurgie pour la réactivité des plaquettes sanguines accès, analyse des gaz sanguins et la réponse inflammatoire. Plus important encore, les grands animaux imitent beaucoup plus étroitement plaquettes humaines physiologie6,13. Le modèle de blessure de l’artère carotide FeCl3 a joué un rôle prédominant dans l’étude de la physiopathologie de la thrombose, la validation des nouveaux médicaments antiplaquettaires et les anticoagulants et à la découverte de potentiels agents thrombolytiques6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12. précédent modèles chez les souris, rats, cobayes, lapins ont fourni la facilité et la flexibilité de la manipulation génétique, et traduisibles modèles précliniques sont essentiels pour les études de dosage et de la toxicité des agents thérapeutiques potentiels6 ,,13. Bien que plusieurs modèles de maladies thrombotiques ont été développés chez les souris, grands modèles animaux de la thrombose qui se rapportent à la maladie vasculaire périphérique, accident vasculaire cérébral et infarctus du myocarde sont rares et de loin. Les premiers modèles de thrombose dans les singes, les chiens et les porcs ont porté sur la sténose, appliquant une pince hémostatique et cylindres plus tard aux bâtiments, entraînant généralement flux cyclique des réductions14,15,16. Au lieu d’un thrombus occlusif sur le site de la lésions endothéliales comme dans le modèle de chlorure ferrique, le thrombus dans ces modèles a donné lieu à des thromboses cycliques, embolisation distale et revenir à la circulation sanguine normale. En comparaison, le modèle de chlorure ferrique modifié ici dans un grand animal, traduit par un thrombus occlusif sur le site de la lésion et est stabilisé et vérifié par angiographie avant un traitement thrombolytique. Sous réserve que l’enquêteur a un grand fonds pour par diem et achat de canines et de l’expertise chirurgicale adéquate, nous détaillons ici un grand modèle canin de lésion vasculaire pour permettre des laboratoires étudier la thrombose utilisant chirurgicaux, d’imagerie et histologiques techniques.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le modèle de lésion vasculaire induite par FeCl3 est largement utilisé pour étudier la thrombose chez de petits animaux et est facile à traduire en un grand modèle animal, préclinique avec une multitude d’avantages. De légères modifications pour adapter le protocole en une canine permettent l’utilisation de ces deux IRM pour évaluer les volumes d’accident vasculaire cérébral et l’hémorragie après une intervention pharmacologique et une angiographie pour évaluer la canalisation du navire …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier le centre de Cognitive and Behavioral Brain Imaging à la Ohio State University pour leur appui financier et scientifique à l’élaboration de l’imagerie par résonance magnétique canine.
Materials
| 1/8” umbilical tape | Jorgensen Laboratories Inc., | #J0025UA | for ferric chloride application |
| 4% paraformaldehyde in PBS | Alfa Aesar | AAJ61899AP | |
| 10% neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5701 | |
| 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4) | Sigma Aldrich | T8877 | |
| ADP/Collagen cartridges | Siemens Diagnostics | B417021A | |
| 4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer | Becton Dickinson | BD 369714 | |
| 4.5 ml lithium heparin vacutainer | Becton Dickinson | BD 368056 | |
| EDTA K3 vacutainers | Becton Dickinson | BD455036 | |
| Doppler flow probe | Transonic Systems Inc | MA2.5PSL | |
| Hematoxylin 560 | Surgipath | 3801570 | |
| Eosin | Surgipath | 3801602 | |
| LabChart Software | ADInstruments Inc. | ||
| Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet | Siemen's Diagnostics | ||
| Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe) | NovaPlus | 402525D | |
| HUG-U-VAC positioning system | DRE Veterinary | 1320 |
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