Хлорида железа индуцированной собак сонной артерии тромбоза: Большой животных модель сосудистых повреждений
Summary
Здесь мы представляем изменения, необходимые для хорошо изученных и часто используемых малых животных хлорное индуцированной (3FeCl) сонной артерии травмы модели для использования в модели крупных животных сосудистых повреждений. Результирующая модель может использоваться для доклинических суда оценки как профилактических, так и тромболитической фармакологических и механических вмешательств.
Abstract
Окклюзионные артериальный тромбоз, ведущих к церебрального ишемического инсульта и инфаркта миокарда способствует ~ 13 миллионов смертей каждый год во всем мире. Здесь мы перевели модель сосудистых повреждений от мелких животных на крупных животных (собак), с незначительными изменениями, которые могут быть использованы для доклинических скрининг профилактического и тромболитической агентов. В дополнение к хирургические методы измененный Протокол описывает шаг за шагом методы для оценки сонной артерии канализации, ангиография, подробные инструкции для обработки мозга и сонной артерии для гистологического анализа для проверки сонной артерии канализация и кровоизлияние в мозг и конкретные параметры для завершения оценки течению тромбоэмболических событий, используя магнитно-резонансной томографии (МРТ). Кроме того обсуждаются конкретные процедурные изменения от ранее устоявшихся малые животной модели, необходимо перевести на крупных животных (собак) сосудистых повреждений.
Introduction
Терапия инсульта во многом моделируется после лечения болезни коронарной артерии, главным образом потому, что вмешательство в сердечно-сосудистых заболеваний также откликнулись наркотиков терапии и эндоваскулярных вмешательств1. Однако, эти процедуры не успешно переведены к ишемии миокарда. Трудности с текущей лечение инсульта, что рекомбинантных активатор плазминогена ткани (rTPA) не может быть отменено, и что администрация несет значительный 6,4% риск геморрагических преобразования2,3, 4. полученный заболеваемости и смертности, ограничивает его использование для малых, часто недостижимой окна5. Кроме того часто после первоначального тромболизис, вспять первоначальное улучшение неврологической происходят рестеноза и окклюзии. В резюме пациентов, которые страдают ишемических цереброваскулярных оскорбления существует узкое временное окно распоряжаться rTPA, что исключает подавляющее большинство (~ 90%).
Роль внутривенного антитромбоцитарной терапии показал обещание в лечении ишемического инсульта с реканализации улучшение судна, выживание и результат2. К сожалению эти препараты имеют предсказуемые побочный эффект внутри черепной и экстра черепной кровоизлияния, главным образом потому, что нет никакой возможности адекватно вспять или контролировать их деятельность2. Во время эффективного предотвращения агрегации тромбоцитов риск кровоизлияния и неспособности прекратить их деятельность помешали их использования в рутине ухода за пациентов, перенесших инсульт. Таким образом, существует необходимость, мощной антитромботической наркотиков, которые действуют самостоятельно или в комбинации, чтобы предотвратить и лизируют сгустки еще имеют профиль безопасности, что позволит использовать в закрытых, низкий объем пространства например мозга, где плохо переносится кровоизлияния.
Понимание механизма артериальный тромбоз и ре стеноза и оценке Тромболитиков и лекарств, которые препятствуют ре стеноза, требует больших и малых животных моделей как часть развития доклинических наркотиков. Хлорида железа индуцированной сосудистых повреждений является широко используется способ быстро и точно вызвать образование тромбов в открытых сосудах мышки, крыски, морские свинки и кролики6,,78, 9 , 10 , 11 , 12. Эти меньше видов предлагают несколько преимуществ, включая простоту генетических манипуляций, недорогой покупки животных и низкий, суточные расходы на жилье. К сожалению небольшие эксперименты на животных отменяет несколько крови ничьих во время операции доступа реактивность тромбоцитов, анализ газа крови и воспалительной реакции. Что еще более важно крупных животных гораздо более тесно имитировать человека тромбоцитов физиологии6,13. FeCl3 сонной артерии травмы модель играет доминирующую роль в изучении патофизиологии тромбоза, в проверке Роман анти коагулянта и анти-тромбоцитарный лекарств и в открытие потенциальных Тромболитиков6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12. предыдущие модели мышей, крыс, морских свинок и кроликов обеспечивают простоту и гибкость для генетической манипуляции, но переводимых доклинических моделей имеют решающее значение для пациента дозирования и токсичность исследования потенциальных терапевтических средств6 ,13. Хотя были разработаны несколько моделей тромботических расстройств у мышей, большие животные модели тромбоза, которые применимы к заболевания периферических сосудов, инсульт и инфаркт миокарда являются несколько и далеко. Первые модели тромбозы в обезьян, собак и свиней сосредоточена на стеноз, применение hemostats и позднее цилиндры для судов, часто, что приводит к циклической потока сокращений14,,1516. Вместо окклюзионной тромба на сайте эндотелиального повреждения как модель хлорное тромб в этих моделях привели к циклических тромбоза, дистальная эмболизации и вернуться к нормальной крови поток. В сравнении хлориду модель изменения здесь в больших животных, результаты в окклюзионной тромба на месте травмы стабилизировалась и проверены ангиографии до тромболитической лечения. Условии, что следователь имеет достаточно средств для каждого diem и покупку клыки и адекватного хирургического опыта, мы подробно здесь больших собак модель сосудистых повреждений, чтобы позволить лаборатории для изучения тромбоза используя хирургические, обработки изображений и гистологические методы.
Protocol
Representative Results
Discussion
FeCl3 искусственных сосудистых повреждений модель широко используется для изучения тромбоза в мелких домашних животных и легко переводить на крупных животных, доклинические модель с множеством преимуществ. Незначительные изменения для адаптации протокол в собак допускается исп?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить центр когнитивной и поведенческой мозга изображений в университете штата Огайо за их финансовую и научную поддержку для разработки и выполнения собак магнитно-резонансной томографии.
Materials
| 1/8” umbilical tape | Jorgensen Laboratories Inc., | #J0025UA | for ferric chloride application |
| 4% paraformaldehyde in PBS | Alfa Aesar | AAJ61899AP | |
| 10% neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5701 | |
| 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4) | Sigma Aldrich | T8877 | |
| ADP/Collagen cartridges | Siemens Diagnostics | B417021A | |
| 4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer | Becton Dickinson | BD 369714 | |
| 4.5 ml lithium heparin vacutainer | Becton Dickinson | BD 368056 | |
| EDTA K3 vacutainers | Becton Dickinson | BD455036 | |
| Doppler flow probe | Transonic Systems Inc | MA2.5PSL | |
| Hematoxylin 560 | Surgipath | 3801570 | |
| Eosin | Surgipath | 3801602 | |
| LabChart Software | ADInstruments Inc. | ||
| Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet | Siemen's Diagnostics | ||
| Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe) | NovaPlus | 402525D | |
| HUG-U-VAC positioning system | DRE Veterinary | 1320 |
Referências
- Adams, H. P. Stroke: a vascular pathology with inadequate management. Journal of Hypertension Supplement. 21 (5), S3-S7 (2003).
- Lansberg, M. G., Bluhmki, E., Thijs, V. N. Efficacy and safety of tissue plasminogen activator 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke: a metaanalysis. Stroke. 40 (7), 2438-2441 (2009).
- Nagel, S., et al. Therapy of acute basilar artery occlusion: intraarterial thrombolysis alone vs bridging therapy. Stroke. 40 (1), 140-146 (2009).
- Ciccone, A., Motto, C., Abraha, I., Cozzolino, F., Santilli, I. Glycoprotein IIb-IIIa inhibitors for acute ischaemic stroke. The Cochrane database of systematic reviews. 3 (3), (2014).
- The National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue Plasminogen Activator for Acute Ischemic Stroke. New England Journal of Medicine. 333 (24), 1581-1588 (1995).
- Leadley, R., Chia, L., Rebellob, S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Bodary, P. F., Eitzman, D. T. Animal Models of Thrombosis. Current Opinion In Hematology. 16 (5), 342-346 (2009).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circulation Research. 100 (7), 979-991 (2007).
- Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. Journal of Visualized Experiments. (100), e52838 (2015).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thrombosis Research. 60 (4), 269-280 (1990).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biology. 1 (1), 50-55 (2013).
- Vilahur, G., Padro, T., Badimon, L. Atherosclerosis and Thrombosis: Insights from Large Animal Models. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 1-12 (2011).
- Coller, B. S., Folts, J. D., Smith, S. R., Scudder, L. E., Jordan, R. Abolition of in vivo Platelet Thrombus Formation in Primates with Monoclonal Antibodies to the Platelet GPIIb/IIIa Receptor. Correlation with Bleeding Time, Platelet Aggregation, and Blockade of GPIIb/IIIa Receptors. Circulation. 80 (6), 1766-1774 (1989).
- Folts, J. An in vivo Model of Experimental Arterial Stenosis, Intimal Damage, and Periodic Thrombosis. Circulation. 83 (6 Suppl), (1991).
- Yasuda, T., et al. A canine model of coronary artery thrombosis with superimposed high grade stenosis for the investigation of rethrombosis after thrombolysis. Journal of the American College of Cardiology. 13 (6), 1409-1414 (1989).
- Schob, S., et al. Correlation Between Aquaporin 4 Expression and Different DWI Parameters in Grade I Meningioma. Molecular Imaging and Biology : MIB : the Official Publication of the Academy of Molecular Imaging. 19 (1), 138-142 (2017).
- Schob, S., et al. Diffusion-Weighted Imaging Using a Readout-Segmented, Multishot EPI Sequence at 3 T Distinguishes between Morphologically Differentiated and Undifferentiated Subtypes of Thyroid Carcinoma-A Preliminary Study. Translational Oncology. 9 (5), 403-410 (2016).
- Schob, S., et al. Diffusion-Weighted MRI Reflects Proliferative Activity in Primary CNS Lymphoma. Public Library of Science One. 11 (8), e0161386 (2016).
