Avançado de imagem do pulmão Homing linfócitos humanos em um Experimental em modelo Vivo de inflamação alérgica baseada em microscopia de luz-folha

Anja Schulz-Kuhnt; Sebastian Zundler; Anika Grüneboom; Clemens Neufert; Stefan Wirtz; Markus  F. Neurath; Imke Atreya

doi:10.3791/59043

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Artigo de método

Avançado de imagem do pulmão Homing linfócitos humanos em um Experimental em modelo Vivo de inflamação alérgica baseada em microscopia de luz-folha

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DOI:

10.3791/59043

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16 de abril de 2019

Anja Schulz-Kuhnt¹ , Sebastian Zundler¹ , Anika Grüneboom² , Clemens Neufert¹ , Stefan Wirtz¹ , Markus F. Neurath¹ , Imke Atreya¹

¹Department of Medicine 1, University Hospital of Erlangen, ²Department of Medicine 3, University Hospital of Erlangen

Neste artigo

Resumo

O protocolo introduzido aqui permite a caracterização da capacidade pulmonar localizador de linfócitos humanos primários sob condições inflamatórias em vivo. Infiltração pulmonar de enviaram transferidas células imunes humanas em um modelo do rato da inflamação alérgica pode ser fotografada e quantificada por microscopia de fluorescência de luz-folha de tecido pulmonar quimicamente limpo.

Resumo

Esmagadora de acumulação de tecido de células do sistema imunológico altamente ativadas representa uma marca registrada de várias doenças inflamatórias crônicas e emergiu como um alvo terapêutico atraente no manejo clínico dos pacientes afetados. Para otimizar ainda mais as estratégias destinadas a terapêutico regulamento de infiltração de tecido patologicamente desequilibrada de células do sistema imunológico pró-inflamatórias, será de grande importância para atingir melhorou introspecções em doenças e órgão-específicas Localização de propriedades de linfócitos periféricos. O protocolo experimental descrito aqui permite monitorar o acúmulo de pulmão de linfócitos humanos fluorescente etiquetados e enviaram transferidos no contexto de inflamação pulmonar induzida por papaína. Em contraste com ensaios in vitro padrão frequentemente utilizados para a análise da migração de células imunes e quimiotaxia, a configuração em vivo agora introduzida leva em conta os aspectos de pulmão específicas de organização do tecido e a influência do complexo inflamatório cenário que ocorrem no organismo vivo murino. Além disso, imagem microscópica tridimensional transversal fluorescência de luz-folha só não fornece dados quantitativos sobre a infiltração de células do sistema imunológico, mas também descreve o padrão de localização da célula imune dentro do pulmão inflamado. Em geral, somos capazes de introduzir uma técnica inovadora de alto valor para a investigação imunológica no campo das doenças pulmonar inflamatória crônica, que pode ser facilmente aplicado, seguindo o protocolo passo a passo fornecido.

Introdução

Desordens inflamatórias clássicos do pulmão, como alérgica asma e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), são conhecidos para ser conduzido por um maior recrutamento de linfócitos ativados no tecido pulmonar¹^,². Linfócito-lançado citocinas (por exemplo, IL-4, IL-5, IL-9, IL-13, IFN-γ e TNF-α) promover quimiotaxia de células do sistema imunológico inatas e adaptativas, induzir a remodelação das vias respiratórias fibrótica ou danificar diretamente o de parênquima pulmonar². Até agora, os mecanismos subjacentes responsáveis para o acúmulo patológico de linfócitos no tecido pulmonar não....