यह पेपर इस्केमिया-reperfusion (I / R) मॉडलिंग का वर्णन करता है एक 3-दिवसीय चिक भ्रूण में एक रीढ़ की हड्डी की सुई अनुकूलित हुक का उपयोग करके आई / आर विकास और उपचार को बेहतर ढंग से समझने के लिए। यह मॉडल सरल, त्वरित और सस्ता है।
Ischemia और reperfusion (I / R) विकार, जैसे मायोकार्डियल रोधगलन, स्ट्रोक और परिधीय संवहनी रोग, बीमारी और मृत्यु के कुछ प्रमुख कारण हैं। कई इन विट्रो और इन विवो मॉडल वर्तमान में बीमारी या क्षतिग्रस्त ऊतकों में आई / आर तंत्र का अध्ययन करने के लिए उपलब्ध हैं। हालांकि, आज तक, ओवो आई / आर मॉडल में कोई रिपोर्ट नहीं किया गया है, जो आई / आर तंत्र और तेजी से दवा स्क्रीनिंग की बेहतर समझ के लिए अनुमति देगा। यह पेपर आई / आर मॉडलिंग का वर्णन करता है जो आई / आर विकास और उपचार तंत्र को समझने के लिए 3-दिवसीय चूजे के भ्रूण में एक रीढ़ की हड्डी की सुई अनुकूलित हुक का उपयोग करता है। हमारे मॉडल का उपयोग डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के स्तर पर विसंगतियों की जांच करने के लिए किया जा सकता है। यह विधि सरल, त्वरित और सस्ती है। वर्तमान मॉडल का उपयोग स्वतंत्र रूप से या मौजूदा इन विट्रो और विवो आई / आर मॉडल के साथ संयोजन के रूप में किया जा सकता है।
Ischemia-reperfusion ऊतक की चोट को दिल के दौरे, इस्केमिक स्ट्रोक, आघात, और परिधीय संवहनी रोग 1,2,3,4,5 सहित कई विकृतियों से जोड़ा गया है। यह मुख्य रूप से रोग की प्रगति की व्यापक समझ की कमी और एक प्रभावी शोध मॉडल की कमी के कारण है। इस्केमिक चोट तब होती है जब ऊतक के एक विशिष्ट क्षेत्र में रक्त की आपूर्ति काट दी जाती है। नतीजतन, इस्केमिक ऊतक अंततः नेक्रोटाइज़ करता है, हालांकि दर ऊतक के आधार पर भिन्न होती है। इसलिए, रक्त की आपूर्ति को बहाल करने से क्षति को कम करने में मदद मिल सकती है। हालांकि, यह देखा गया है, कुछ मामलों में, कि reperfusion अकेले ischemia की तुलना में अधिक ऊतक क्षति का कारण बनता है6,7,8 करता है. इसलिए, ischemia-reperfusion के आणविक और सेलुलर तंत्र को समझना एक प्रभावी चिकित्सीय हस्तक्षेप विकसित करने के लिए आवश्यक है। वर्तमान में, आई / आर चोटों के लिए कोई प्रभावी उपचार ज्ञात नहीं है। इस असमानता ने मौजूदा समस्या 9,10,11,12,13 को संबोधित करने के लिए इन विट्रो से लेकर इन विवो मॉडल तक नए प्रयोगात्मक मॉडल के निर्माण को प्रेरित किया है।
चिक भ्रूण (गैलस गैलस डोमेस्टिकस) व्यापक रूप से अनुसंधान में उपयोग किया जाता है क्योंकि उनकी पहुंच में आसानी, नैतिक स्वीकार्यता, अपेक्षाकृत बड़े आकार (अन्य भ्रूणों की तुलना में), कम लागत और तेजी से विकास 14। हमने विकास के 72 ज पर एक चूजे के भ्रूण का उपयोग किया ताकि रीढ़ की हड्डी की सुई की सहायता से सही विटेलिन धमनी को रोककर और जारी करके ओवो आई / आर में एक बनाया जा सके। हमने इसे हुक-I/ R ischemia-reperfusion मॉडल (चित्रा 1) का नाम दिया। इस अध्ययन में उपयोग किया गया मॉडल ऑक्सीडेटिव और भड़काऊ मार्गों सहित सभी डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं का सटीक रूप से अनुकरण करने में सक्षम है, जो अक्सर आई / आर क्षति 15,16,17 से जुड़े होते हैं।
ischemia-reperfusion अनुसंधान का लक्ष्य चिकित्सीय रणनीतियों है कि सेल मौत को रोकने और वसूली को बढ़ावा देने के लिए 29,30 बनाने के लिए है। आई / आर अनुसंधान में वर्तमान बाधाओं को दूर करने के लिए, हमने ?…
The authors have nothing to disclose.
हम हरि शंकर को वीडियोग्राफी और संपादन के दौरान उनकी महत्वपूर्ण जानकारी के लिए, श्री बाकर हुसैन को वॉयस-ओवर के लिए, श्री असगर रिजवी को वीडियो संपादन के लिए, श्री मोहम्मद हैदर को वीडियो शूट के लिए, श्री मोहम्मद दानिश सिद्दीकी को प्रयोगों के दौरान सहायता के लिए आभार व्यक्त करना चाहते हैं।
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |