Summary
Dieses Protokoll zeigt Schritt für Schritt, wie der erste Backenzahn des Unterkiefers in der Maus extrahiert wird. Es bietet eine alternative Methode für Forscher, die sich auf die Heilung und Regeneration von Kieferknochen konzentrieren.
Abstract
In dieser Arbeit wird die Entwicklung eines molaren Extraktionsmodells im murinen Unterkiefer vorgestellt, um ein praktikables Modell für die Untersuchung der alveolären Knochenregeneration und der intramembranösen Ossifikation bereitzustellen. C57/J6-Mäuse wurden verwendet, um den ersten Backenzahn des Unterkiefers zu extrahieren, um dieses Modell zu etablieren. Sie wurden 1 Woche bzw. 4 Wochen nach der Operation euthanasiert und die beidseitigen Mandibeln entnommen. Anschließend wurden eine serielle stereoskopische Ernte, eine histologische Beurteilung und eine Immunfluoreszenzfärbung durchgeführt, um den Erfolg der Operation nachzuweisen. Unmittelbar nach der Operation zeigten die stereoskopischen Bilder eine leere Extraktionsalveole. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung (H&E) nach 1 Woche und die Masson-Färbung nach 4 Wochen nach der Operation zeigten, dass der Bereich der ursprünglichen Wurzel teilweise bzw. vollständig mit Knochentrabekeln gefüllt war. Die Immunfluoreszenzfärbung zeigte, dass die Sp7-Expression im Vergleich zur Homöostaseseite 1 Woche postoperativ zunahm, was auf eine starke Osteogenese in der Alveolargrube hindeutet. Alle diese Ergebnisse zeigten ein praktikables Modell für die Heilung der Zahnextraktionsalveole bei Mäusen. Kommende Studien, die die Mechanismen der Heilung von Kieferknochendefekten oder -pfannen aufdecken, könnten diese Methode übernehmen.
Introduction
Die Heilung der Alveole nach einer Zahnextraktion ist ein häufiges klinisches Szenario, das bei unerwünschter Heilung zu unerwünschten Komplikationen wie Alveolenblutungen, trockener Alveole oder sogar Kieferosteomyelitis führen kann 1,2,3. Diese Komorbiditäten können die Lebensqualität der Patienten beeinträchtigen und, schlimmer noch, die prothetische Rehabilitation aufgrund des massiven Knochenschwunds erheblich erschweren4. Obwohl die Heilungsstadien der Alveole aufgeklärt wurden, sind sie nicht ausreichend, um die klinische Versorgung nach einer Zahnextraktionsoperation zu leiten, wenn sie auf verschiedene Prognoseherausforderungen stoßen4.
Es wurden mehrere Studien auf der Grundlage von Tiermodellen durchgeführt, um ein besseres Verständnis der zugrunde liegenden Mechanismen im Heilungsprozess der Alveole zu erlangen und die oben genannten Situationen abzuwenden. Sp7 ist ein Hauptregulator bei der Differenzierung von Osteoblasten und spielt eine wichtige Rolle bei der Entwicklung des Skeletts, der Knochenhämostase und der Knochenregeneration 5,6. Rationale Alveolenheilungsmodelle könnten die Redundanz von Sp7 posttraumatisch in der Knochenregeneration aufzeigen. Darüber hinaus umfasst im Unterschied zur Heilung von Röhrenknochenbrüchen nur ein einziger osteogener Prozess, die intramembranöse Ossifikation, den Heilungsprozess der Extraktionsalveole7. Dies macht das Tierzahnextraktionsmodell optimal für die Untersuchung implantatbasierter Therapien, da die Implantat-Osseointegration der gleichen osteogenen Regel8 gehorcht.
Jahrzehntelang wurde das Zahnextraktionsmodell bei Ratten, Kaninchen und Hunden durchgeführt, da diese Arten große Zähne haben, die bequem zu operieren sind 9,10,11. Angesichts der florierenden Nachfrage nach genetischer Modifikation und als anpassungsfähigerer genetischer Hintergrund für den Menschen werden Mäuse jedoch zunehmend verwendet, um ein Zahnextraktionsmodell zu etablieren. Von da an konnten die Forscher die Rolle einer bestimmten Zellpopulation im Heilungsprozess der Alveole anhand genommodifizierter Mäuse entschlüsseln, anstatt nur Phänotypen zu beobachten12. Unter den Maus-Zahnextraktionsalveolenmodellen haben frühere Studien die Etablierung und den Heilungsprozess von murinen Oberkieferzahn- und Schneidezahnextraktionsalveolengezeigt 13,14,15,16. Das Heilungsmuster der Prognose und die detektiven und beobachtenden Zeitpunkte können sich jedoch je nach Protokoll unterscheiden. Dies appelliert an ein universelles Kriterium für Wissenschaftler, um ein Modell für die Heilung von Mausfä�ollen zu etablieren.
Ziel dieser Studie war es, ein praktikables Modell für die Heilung der Mausalveole für die oben genannten Probleme zu entwickeln. Unterkiefermolaren bei Mäusen haben im Vergleich zu Oberkiefermolaren und Schneidezähnen unterschiedliche morphologische Merkmale, die einzigartige Vor- und Nachteile mit sich bringen. Da die Modelle, die sich auf den murinen Unterkiefer konzentrieren, derzeit vakuumbasiert sind, wurde mit diesem Protokoll versucht, eine gelungene Methode zur Extraktion des ersten Unterkieferbackenzahns bei Mäusen bereitzustellen. Wir hoffen, dass dieses Protokoll Grundlagenforscher mit neuen Ideen aufklären wird, um die zugrunde liegenden Mechanismen der Alveolenheilung aufzudecken und eine klinische Behandlung anzuzeigen.
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Protocol
Alle Tierverfahren in dieser Studie wurden von der Ethikkommission der West China School of Stomatology der Universität Sichuan geprüft und genehmigt (WCHSIRB-D-2017-041). Für die vorliegende Studie wurden adulte C57BL/6-Mäuse verwendet, die aus einer kommerziellen Quelle stammen (siehe Materialtabelle).
1. Präoperative Vorbereitung
- Vorbereitung des Instruments
- Bereiten Sie verschiedene Nadeln von Einwegspritzen (26G, 25G, 23G; siehe Materialtabelle) vor, die als Aufzüge verwendet werden können. Biegen Sie den Nadelkopf um ca. 20°-40° ein, wie in Abbildung 1 gezeigt.
- Bereiten Sie eine gezahnte Augenpinzette als Pinzette vor. Achten Sie darauf, dass es der Größe der Backenzähne der Mäuse entspricht und die Backenzähne fest greifen kann. Die ideale Pinzettengröße ist in Abbildung 1A, B3 dargestellt.
- Besorgen Sie sich ein Gummiband (das von einem medizinischen Latexhandschuh abgerissen werden kann), das als Mundöffner verwendet werden kann, ein Schaumstoffbrett oder eine Korkplatte als chirurgische Plattform, eine Stirnlampe, um den Operationsbereich zu beleuchten, und ein Heizkissen für die postoperative Wiederbelebung. Zerreißen Sie einen trockenen Wattebausch in kleine Stücke und legen Sie ihn auf die Operationsstelle, wenn während des Eingriffs Blutungen auftreten.
- Vorbereitung der Anästhesie
- Die Maus kann mit jedem geeigneten Anästhesieprotokoll betäubt werden, das eine Vollnarkose erreicht, die durch die "Zehenkneifmethode" bestätigt wird. Tragen Sie nach der Narkose tierärztliche Salbe auf die Augen der Maus auf.
HINWEIS: Bevorzugtes Vollnarkoseprotokoll könnte sein: Induktion und Aufrechterhaltung mit Xylazin (10 mg/kg) und Ketamin (100 mg/kg) intraperitoneal (IP);
Für diese Studie wurden Isofluran und 1 % Pentobarbital-Natrium (50 mg/kg, IP) für die Anästhesieeinleitung und -erhaltung mit zusätzlichen Dosen nach Bedarf verwendet.
- Die Maus kann mit jedem geeigneten Anästhesieprotokoll betäubt werden, das eine Vollnarkose erreicht, die durch die "Zehenkneifmethode" bestätigt wird. Tragen Sie nach der Narkose tierärztliche Salbe auf die Augen der Maus auf.
- Desinfektions- und Sterilisationsvorbereitung
- Desinfizieren Sie die Arbeitsbühne und den Open-Air-Overhead mit einem Sprühgerät mit 75 % Ethanol. Vor jedem Eingriff mit der Maus wird die Verwendung eines neuen Satzes Einwegnadeln empfohlen.
Anmerkungen: Die gezahnte Pinzette ist wiederverwendbar und kann mit jeder bevorzugten Methode wie Dampfsterilisation sterilisiert werden.
- Desinfizieren Sie die Arbeitsbühne und den Open-Air-Overhead mit einem Sprühgerät mit 75 % Ethanol. Vor jedem Eingriff mit der Maus wird die Verwendung eines neuen Satzes Einwegnadeln empfohlen.
2. Chirurgischer Ablauf
- Fixierung der Maus und ihres Unterkiefers
- Binden Sie die Maus in Rückenlage mit Klebeband an eine chirurgische Plattform. Stecken Sie zwei 26-G-Nadeln in einer Linie mit der Orbita-Ohrebene und zwei weitere 26-G-Nadeln bequem unterhalb des Unterkiefers.
- Legen Sie das Gummiband um die Nadeln und kreuzen Sie die Schneidezähne, um den Mund offen zu halten. Ziehen Sie die Zunge leicht heraus und fixieren Sie sie unter dem Gummiband gegenüber der chirurgischen Seite, um zu verhindern, dass sie das Sichtfeld behindert (Abbildung 1C).
- Beseitigung des distalen Widerstands
- Halten Sie den Backenzahn mit einer Pinzette mesial, drücken Sie eine 23-G-Nadel in den bukkalen Alveolarknochen der distalen Wurzel und machen Sie ein Intervall.
HINWEIS: Dieser Schritt muss mit großer Vorsicht unternommen werden, da eine zu tief eingebettete Nadel wahrscheinlich die Wurzel bricht. - Wechseln Sie dann zu einer 25-G-Nadel , um das Intervall weiter auszudehnen, und bewegen Sie sich vorsichtig in Richtung des periapikalen Bereichs, während Sie die Nadel langsam vorwärts und lingual (mit der anatomischen Position der Maus) drehen, um die Wurzel aus der Alveolargrube zu drücken.
- Halten Sie den Backenzahn mit einer Pinzette mesial, drücken Sie eine 23-G-Nadel in den bukkalen Alveolarknochen der distalen Wurzel und machen Sie ein Intervall.
- Beseitigung des mesialen Widerstands
- Wenn genügend Platz vorhanden ist, führen Sie eine 23-G-Nadel in die Wurzelgabel ein und heben Sie den Backenzahn okklusal an. Nachdem Sie den Backenzahn fest gehalten haben, nehmen Sie eine weitere 23-G-Nadel und drücken Sie sie in die linguale mesiale Parodontalmembran, um ein Intervall zu schaffen.
- Dann mit einer 25-G-Nadel ersetzen und langsam nach vorne und bukkal drehen. Wenn einige darunter liegende Hindernisse die Luxation des Backenzahns behindern, verwenden Sie eine 26-G-Nadel, um in die Wurzelspitze einzudringen, und wiederholen Sie die Operationen.
- Abschließende Extraktion
- Ziehen Sie den Zahn heraus und achten Sie beim Ziehen darauf, dass die Krone hoch über die Okklusionsebene hinausragt und zwei intakte Wurzeln deutlich zu sehen sind.
HINWEIS: Die Luxation (Luxation) des Zahns gilt als der schmerzhafteste und belastendste Moment des Eingriffs. Vor der Luxation des Zahnes sollte die Narkosetiefe mit dem Zehenquetschtest neu beurteilt und gegebenenfalls eine moderate Dosis eines Anästhetikums verabreicht werden.
- Ziehen Sie den Zahn heraus und achten Sie beim Ziehen darauf, dass die Krone hoch über die Okklusionsebene hinausragt und zwei intakte Wurzeln deutlich zu sehen sind.
- Nachsorge
- Tragen Sie nach dem Ziehen des Zahns trockene Watte auf, um die Blutung zu stoppen, positionieren Sie die Zunge neu, verabreichen Sie Carprofen (5 mg/kg) subkutan und legen Sie die Maus auf ein Heizkissen mit konstanter Temperatur, bis Sie sich von der Narkose erholt haben.
3. Bildgebung des Unterkiefers der Maus und der Extraktionsalveole
- Vorbereitung der Proben
- Euthanasieren Sie die Maus durch Zervixluxation. Verwenden Sie eine Augenschere, um die Skelettmuskeln zu durchtrennen, die am Unterkiefer und am Jochbogen befestigt sind. Schneiden Sie von der Kehle entlang der Unterkante des Unterkiefers bis zum aufsteigenden Ast und dann bis zur Rückseite des Kondylus, ziehen Sie dann den Unterkiefer nach unten und schneiden Sie entlang der Mittellinie des unteren Schneidezähnels. Auf diese Weise werden die beiden getrennten Mandibeln entnommen.
- Führen Sie die Fixierung, Demineralisierung und Dehydrierung gemäß dem Standardverfahren17 durch. Beim Einbetten17 ist darauf zu achten, dass die Okklusionsebene parallel zum Rand der Kassette verläuft (siehe Materialtabelle). Fixieren Sie den Unterkiefer an der Unterseite der Kassette, wobei die Unterkante gespannt ist (Abbildung 2).
HINWEIS: Dieses Protokoll bietet die sagittale Ebene des Unterkieferbereichs.
- Fixieren der Probe auf dem Mikrotom
- Regulieren Sie die Probenklemme im Mikrotom so, dass der Kondylus und die Kronenseite um 5°-20° mehr hervortreten, um ein integriertes Bild der Kronenpulpa gleichzeitig mit der Wurzelpulpa zu erhalten (Abbildung 2).
- Vorbereiten der Schnitte
HINWEIS: Der Kondylus ist immer die erste anatomische Struktur, die geschnitten wird. Wenn es verblasst, kann der Backenzahnbereich in mehrere Scheiben geschnitten werden.- Verschieben Sie den Mikrotombereich auf 5 μm, sammeln Sie alle acht Schichten und suchen Sie in der letzten Schicht nach Dentin. Wenn das Kronendentin zunächst ohne apikales Dentin der Wurzel erscheint, stellen Sie die Probenklemme so ein, dass der Wurzelbereich hervorsteht und umgekehrt.
- Sammeln der Abschnitte
Anmerkungen: Der Schnittwinkel ist so lange geeignet, bis das Dentin sowohl im Kronen- als auch im apikalen Bereich gleichmäßig erreicht ist.- Schneiden Sie in diese Richtung und beobachten Sie die Scheiben unter dem Mikroskop, bis das Zahnmark sowohl in der Krone als auch in den Wurzeln erscheint. Sammeln Sie die Schnitte, wenn eine undeutliche Kontur von Backenzähnen auf der Oberfläche der Paraffinprobe17 erscheint.
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Representative Results
Um die praktische Anwendung dieser Methode zu verdeutlichen, wurde der rechte erste Backenzahn des Unterkiefers von zwei gesunden C57BL/6-Mäusen (3 Monate alt, beide weiblich) extrahiert und 1 Woche bzw. 4 Wochen lang beobachtet. Die unbeschädigten linken Mandibeln wurden als gesunde Kontrollen verwendet. Abbildung 1A zeigt die spezifischen Merkmale der chirurgischen Apparatur, einschließlich 26-23 G-Nadeln und einer gezahnten Augenpinzette. Die 26 g Nadel wird punktgenau entnommen und gebogen. Die 25 G Nadel ist punktgenau um ca. 25° gebogen. Die 23-G-Nadeln sind der Dreh- und Angelpunkt für die Operation und werden punktuell um ca. 25° bzw. 35° gebogen (Abbildung 1B1,B2). Die Pinzette hat einen 1 mm langen Zahn, der sich der Form der Mausmolaren anpasst (Abbildung 1B3). Abbildung 1C zeigt den Zustand der Maus vor der Operation. Die wichtigsten Punkte sind die Position der vier Stifte um den Kopf und die Befestigung der Zunge unter dem Gummiband auf der linken Seite.
Abbildung 3A zeigt die Position und Morphologie des ersten Molaren des rechten Unterkiefers. Abbildung 3B zeigt das Zahnfach, das nach der Extraktion sofort mit einem Gerinnsel gefüllt ist. Nach 1 Woche und 2 Wochen wurden die Mäuse eingeschläfert, und die Mandibeln wurden demineralisiert, in Paraffin17 eingebettet und in Scheiben geschnitten. Abbildung 4A zeigt den Heilungsprozess der Alveole nach 1 Woche. Es bildeten sich einige schwammartige Trabekelknochen, aber das Gerinnsel blieb. Im Heilungsprozess nach 2 Wochen (Abbildung 4B) war die Alveole vollständig mit Schwammknochen gefüllt, so dass die Regeneration in etwa abgeschlossen war. Auch die Immunfluoreszenzfärbung (IF) bestätigte die Ergebnisse der histopathologischen Färbung. In Abbildung 5 wurde das Sp7 in den Knochenmarkszellen stark exprimiert, insbesondere am Rand, der knochenbildenden Front. Im Homöostasezustand waren die Trabekelknochen konsistent und konfluierend, mit Knochenmarkszellblöcken, die wie Inseln verstreut waren. 1 Woche nach der Operation füllten jedoch zahlreiche Sp7-exprimierende Zellen die Extraktionsalveole, wobei neu gebildeter trabekulärer Knochen verstreut war. 4 Wochen nach der Operation kehrte sich der Zustand um und verwandelte sich wieder in weitgehend verschmolzenen Trabekelknochen, und die Aktivität der Sp7-exprimierenden Zellen sank auf ein Niveau, das sich dem Homöostasezustand näherte.
Abbildung 1: Die Objektbilder von chirurgischen Apparaturen und operierten Mäusen . (A) Die chirurgischen Apparaturen bestanden hauptsächlich aus 26-, 25- und 23-G-Nadeln und einer gezahnten Pinzette. (B) Die Nadeln wurden in einem Nadelwinkel von 20°-40° gebogen (B1,2). Der Zahn der Pinzette muss ca. 1 mm groß sein (B3). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 2: Das Ablaufdiagramm des Verfahrens von der Zahnextraktion bis zur Durchtrennung. Dieses Bild zeigt einen schematischen Ablauf von der Zahnextraktion bis zum Schnitt. Der erste Backenzahn des rechten Unterkiefers wurde gemäß dem Protokoll extrahiert, dann wurde die Maus euthanasiert und der Unterkiefer entnommen. Nach der Ernte wurde der Unterkiefer 24 Stunden lang in 4 % POM eingeweicht und dann erneut in 10 % EDTA eingeweicht. Die Flüssigkeit wurde 14 Tage lang täglich erneuert. Anschließend wurden die Proben dehydriert und nach einem universellen Protokoll in Paraffin eingebettet. Die bukkale oder linguale Seite muss nach unten zeigen, da die Schnitte der Sagittalebene durchtrennt werden sollen. Schließlich müssen bei der Fixierung der Probe auf der Probenklemme die Kondylus- und Kronenseite 5°-20° vorgewölbt sein. Abkürzungen: POM = Paraformaldehyd; EDTA = Ethylendiamintetraessigsäure. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 3: Stereoskopische Aufnahmen des ersten Molaren des Unterkiefers der Maus und der Extraktionsalveole. (A) Stereoskopische Aufnahme des ersten Molaren des rechten Unterkiefers, gekennzeichnet durch den gelben Pfeil. (B) Die Extraktionsalveole des ersten rechten Unterkiefermolaren nach der Operation, gekennzeichnet durch den gelben Pfeil. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 4: H&E-Färbung. H&E-Färbung der Extraktionsalveole nach (A) 1 Woche und (B) 4 Wochen postoperativ. Die gelben Pfeile zeigen den zweiten Molaren des Unterkiefers in der Nähe der Einheilung der Extraktionsalveole des ersten Molaren an. Die gestrichelte Rechtecklinie zeigt den heilenden ersten Molarenextraktionsbereich an. Maßstabsbalken: 500 μm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 5: Detektion von Sp7 mittels IF-Färbung. Dieses Bild zeigt die Verteilung der Sp7-Expression in den Knochenmarkszellen des Unterkiefers der Maus und dem umgebenden trabekulären Knochen im Homöostasezustand (gesunde Kontrolle) 1 Woche bzw. 4 Wochen nach der Operation. Die weiß gestrichelte Linie konturierte die geschätzte Schuppe des Trabekelknochens. Die gelben Pfeile zeigten die typischen Sp7-exprimierenden Zellen an. Maßstabsbalken: 50 μm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
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Discussion
Das Modell der Heilung der Mausalveole ist eine wichtige Methode, um die zugrunde liegenden Mechanismen der Knochenheilung und -regeneration zu entschlüsseln und letztendlich klinische Herausforderungen zu lösen. Bestehende Studien haben die Möglichkeit des Schneidezahnextraktionsmodells und des Oberkiefermolarenextraktionsmodells gezeigt, während Studien nicht das Unterkiefermodell des ersten Molaren verwendet haben13,17,18. Schneidezähne sind jedoch für das Leben von Nagetieren von entscheidender Bedeutung, und ihre Beeinträchtigung kann tödlich sein. Da der Knochen im Oberkiefer spongiöser ist als der Unterkiefer, kann es außerdem zu Unterschieden in den zugrunde liegenden Mechanismen während des Heilungsprozesses kommen. Daher ist es notwendig, ein praktikables Modell für die Extraktion der ersten Molaren des Unterkiefers zu erstellen.
Die wichtigste Überlegung bei der Zahnextraktion ist die Vermeidung von Wurzelbrüchen19. Die Backenzähne der Maus sind klein und verletzlich, und die Restwurzeln im Unterkiefer können nicht extrahiert werden. In diesem Protokoll besteht jedoch das Risiko des Wurzelbruchs während der gesamten Operation. Daher ist es wichtig, den Backenzahn fest zu halten und die Kraft rigoros zu kontrollieren. Um genau zu sein, muss man bei der Beseitigung des distalen Widerstands darauf achten, die Krone nicht zu zerknittern; Bei der Beseitigung des mesialen Widerstands muss man vorsichtig sein, damit die Nadel nicht von der Wurzelgabel austritt. Bei der Verwendung von Nadeln zum Rendern von Intervallen ist es wichtig zu beachten, dass die Intervalle zwischen der Wurzel und dem Alveolarfortsatz liegen sollen, daher sollte man nicht viel Rotationskraft aufwenden, da dies zu einem hohen Risiko des Wurzelbruchs führen kann.
Die Extraktion des ersten Unterkiefers der Maus ist mühsam und erfordert ausreichendes Training, um sie zu beherrschen. Während der Operation können Notfälle auftreten, einschließlich, aber nicht beschränkt auf die folgenden: (1) Zahnextraktionsinstrumente neigen aufgrund der Beweglichkeit des Unterkiefers und der Zunge dazu, zu verrutschen und Weichteile zu stechen, was zu leichten bis schweren Blutungen führen kann. In diesem Fall kann man einen sauberen, trockenen Wattebausch in den Mund legen, das Gummiband lösen und es eine Weile spontan schließen lassen. Eine Kompression zur Blutstillung wird nicht empfohlen, da dies zu größeren Schnittwunden und Blutungen führen kann. (2) Operateure werden oft mit einer binären Wahl zwischen Alveolarknochenplattenreservierung oder Molarenwurzelreservierung konfrontiert, da die ersten Molaren fest mit dem Unterkiefer verbunden sind. Um diese Bindungskraft zu verringern, könnte der Bediener die linguale oder bukkale Knochenplatte brechen. Andernfalls führt eine heftige Rotationskraft in der Buchse dazu, dass die Wurzel(n) gebrochen werden. Ob man sich für den Erhalt der Knochenplatte entscheidet, hängt vom Forschungsziel ab. (3) Die Extraktion des ersten Backenzahns des Unterkiefers kann traumatischer sein als die des ersten Backenzahns des Oberkiefers oder des Schneidezahns. Wir empfehlen, genau zu beobachten, bis die Maus nach der Operation aufwacht. (4) Die mesiale Wurzel des zweiten Backenzahns des Unterkiefers ist aufgrund des begrenzten Operationsraums im bukkalen Bereich anfällig; Manchmal kann sogar die Krone des zweiten Backenzahns zerstört werden. Da das Fehlen des zweiten Molaren keinen Einfluss auf die Beobachtung der Heilung der Extraktionsalveole des ersten Molaren hat, kann dieser Unfall ignoriert werden. (5) Überwachen Sie die Anästhesietiefe der Maus während der Zahnextraktion genau, da dies sowohl für Menschen als auch für Nagetiere ein schmerzhafter Eingriff ist. Verabreichen Sie Anästhetika nach Bedarf, um eine chirurgische Anästhesieebene aufrechtzuerhalten, bis die Extraktion abgeschlossen ist. Darüber hinaus kann ein längerer Druck des Gummibandes zu Sauerstoffmangel in der Zunge führen, die durch blasse Membranen gekennzeichnet ist. In solchen Fällen muss der Betrieb sofort gestoppt und die Instrumente entfernt werden, damit sich die Maus erholen kann.
Alles in allem können ungeschulte Bediener den Mäusen unbeabsichtigt unbeabsichtigte Verletzungen zufügen, wie in Punkt 1 aufgeführt. Um die Sicherheit und das Wohlergehen aller Labortiere zu gewährleisten, wird nachdrücklich empfohlen, dass ausgiebig an murinen Kadavern geübt wird, bevor diese Fähigkeit beherrscht und Live-Verfahren an echten Mäusen durchgeführt werden.
Obwohl dieses Protokoll eine alternative Methode für Forscher darstellt, die sich auf die Heilung und Regeneration von Kieferknochen konzentrieren, hat es mehrere Nachteile. (1) Der Unterkiefer kann nicht fixiert werden und hat eine breite Flexibilität. Infolgedessen ist es schwierig, einen stabil wirkenden Punkt auf dem Alveolarknochen zu halten, was zu einigen Notfällen führt. (2) Erwachsene männliche Mäuse haben verstärkte Unterkieferknochen, so dass es schwierig sein kann, den mesialen Widerstand zu beseitigen. (3) Dieses Protokoll gilt nicht für die Extraktion des ersten Molaren im linken Unterkiefer.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass, obwohl dieses Protokoll die Details der Extraktion des ersten Molaren des murinen Unterkiefers demonstriert hat, die Ärzte noch viel Übung und Vorsicht benötigen, um eine erfolgreiche Operation durchzuführen.
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Disclosures
Alle Originaldaten und Bilder sind in diesem Artikel enthalten. Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht.
Acknowledgments
Diese Arbeit wird von der National Natural Science Foundation of China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) und 82100982 (F.L.) sowie vom Sichuan Province Science and Technology Program 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.) unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
| C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
| DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
| Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
| Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
| Microtome | Leica | RM2235 | |
| Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
| Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
| Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |
References
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