Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

מודל לחץ תבוסה חברתית עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכרים ונקבות

Published: March 15, 2024 doi: 10.3791/66455
Automatic Translation
1, 1, 2, 2, 2,3,4,5
1Integrated Program in Neuroscience, McGill University, 2Douglas Mental Health University Institute, McGill University, 3Department of Psychiatry, McGill University, 4Department of Neurology and Neurosurgery, Faculty of Medicine, McGill University, 5Ludmer Centre for Neuroinformatics & Mental Health, McGill University

Summary

פיתחנו מודל לחץ חברתי מואץ עבור עכברי C57BL/6 מתבגרים, הפועל הן אצל זכרים והן אצל נקבות ומאפשר חשיפה במהלך תקופות התבגרות בדידות. חשיפה למודל זה גורמת להימנעות חברתית, אך רק בתת-קבוצה של עכברים זכרים ונקבות מובסים.

Abstract

מצוקה חברתית בגיל ההתבגרות נפוצה ויכולה להשפיע לרעה על מסלולי בריאות הנפש. מידול לחץ חברתי אצל מכרסמים מתבגרים זכרים ונקבות נחוץ כדי להבין את השפעותיו על התפתחות המוח המתמשכת ועל התוצאות ההתנהגותיות. פרדיגמת הלחץ החברתי הכרוני (CSDS) נמצאת בשימוש נרחב כדי למדל לחץ חברתי בעכברים זכרים בוגרים C57BL/6 על ידי מינוף ההתנהגות התוקפנית המוצגת על ידי מכרסם זכר בוגר לפולש הפולש לטריטוריה שלו. יתרון של פרדיגמה זו הוא שהיא מאפשרת לסווג עכברים מובסים לקבוצות עמידות ורגישות בהתבסס על ההבדלים האישיים שלהם בהתנהגות החברתית 24 שעות לאחר מפגש התבוסה האחרון. יישום מודל זה בעכברי C57BL/6 מתבגרים היה מאתגר מכיוון שעכברים בוגרים או מתבגרים אינם תוקפים בדרך כלל עכברים זכרים או נקבות בגיל ההתבגרות המוקדמות ומכיוון שגיל ההתבגרות הוא פרק זמן קצר, הכולל חלונות זמן דיסקרטיים של פגיעות. מגבלה זו התגברה על ידי התאמת גרסה מואצת של CSDS לשימוש עבור עכברים זכרים ונקבות מתבגרים. פרדיגמת מתח זו בת 4 ימים עם 2 מפגשי תקיפה פיזית ביום משתמשת בבוגר זכר C57BL/6 כדי לכוון את עכבר CD-1 לתוקפנות כך שהוא תוקף בקלות את העכבר המתבגר הזכר או הנקבה. מודל זה נקרא לחץ תבוסה חברתית מואצת (AcSD) עבור עכברים מתבגרים. חשיפה של מתבגרים ל- AcSD גורמת להימנעות חברתית 24 שעות מאוחר יותר הן אצל זכרים והן אצל נקבות, אך רק בתת-קבוצה של עכברים מובסים. פגיעות זו מתרחשת למרות שמספר ההתקפות עקבי בין הפעלות בין קבוצות עמידות ורגישות. מודל AcSD קצר מספיק כדי לאפשר חשיפה בתקופות דיסקרטיות בתוך גיל ההתבגרות, מאפשר הפרדה של עכברים על פי נוכחות או היעדר התנהגות של הימנעות חברתית, והוא המודל הראשון הזמין לחקר לחץ תבוסה חברתית אצל עכברות מתבגרות C57BL/6.

Introduction

פרדיגמת הלחץ של התבוסה החברתית הכרונית נמצאת בשימוש נרחב כדי למדל לחץ חברתי במכרסמים בוגרים לאחר יום הלידה (PND) >65 מכרסמים זכרים. פרדיגמה זו מבוססת על ההתנהגות התוקפנית הטבעית של מכרסם זכר בוגר כאשר פולש פולש לטריטוריה שלו. מודל זה משמש במגוון מיני מכרסמים, כולל חולדות, אוגרים ועכברים 1,2,3,4,5,6,7,8,9, והוא מורכב משילוב של תוקפנות פיזית ולחץ פסיכולוגי הנמשך כ-10 ימים, במהלכם מכרסם פולש מתנסה בכמה דקות של תוקפנות פיזית מהמכרסם התושב. שני המכרסמים נשארים בכלוב הביתי של הדייר, מופרדים על ידי מחיצה המאפשרת מגע חושי אך לא פיזי7. בניסויי עכברים, העכברים התושבים/התוקפנים הנפוצים ביותר הם מגדלים בדימוס עכברי CD-1 שוויצריים, המראים התנהגות טריטוריאלית חזקה נגד עכברים פולשים 6,7. עבור העכברים הפולשים, הזן המאופיין ביותר הוא הזן C57BL/6 2,4,5. העכבר המובס נחשף לתוקפן חדש מדי יום כדי למנוע התרגלות לתוקפן. עכברי ביקורת שוכנים עם קונפרט שונה בכל יום. 24 שעות לאחר מפגש התבוסה האחרון, עכברי ניסוי נבדקים במבחן אינטראקציה חברתית (SIT) שבו הם יכולים לחקור שדה פתוח בהיעדר (ללא מטרה), או נוכחות של עכבר CD-1 חדשני (מטרה). עכברי בקרה מבלים זמן רב יותר באזור האינטראקציה עם המטרה לעומת החלק שאינו מטרה של המשימה. עכברים מובסים מסווגים כרגישים (יחס<1) או גמישים (יחס>1) על פי יחס אינטראקציה חברתית (הזמן שבילה באזור האינטראקציה עם התוקפן בהווה/זמן שבילה באזור האינטראקציה עם התוקפן נעדר). הליך זה מספק כלי שימושי לחקר הבדלים אינדיבידואליים בתגובה ללחץ.

עד לשנים האחרונות, מודל הלחץ החברתי הכרוני שימש בעיקר בעכברים זכרים בוגרים מכיוון שהיררכיות הדומיננטיות הגברית המודגשת כוללות לחימה נגד זכרים אך לא נגד נקבות 6,7. יתר על כן, מכרסמים זכרים בדרך כלל אינם תוקפים נקבות; במקום זאת, הם עוסקים בהתנהגויות הזדווגות10. למרות מכשולים אלה, פותחו אסטרטגיות שונות כדי להתאים את פרדיגמת הלחץ של התבוסה החברתית הכרונית עבור נקבות עכברים בוגרות. לדוגמה, מודל העכבר הקליפורני לתבוסה חברתית מבוסס על תוקפנות טבעית של מין מונוגמי זה משני המינים בעת הגנה על הטריטוריה שלהם 9,11. גישות אחרות מתמקדות בגרימת התנהגות תוקפנית של עכברי CD-1 על ידי גירוי ההיפותלמוס הוונטרומדיאלי שלהם להתנהגות תוקפנית עקבית 10,12, או על ידי מריחת שתן זכרי בעכברות הבוגרות הניסיוניות כדי לקבל התקפות מתוקפי CD-113. תוקפנות מוגברת ועקבית זו של עכברי CD-1 היא קריטית עבור עכבר הפולש הניסיוני להראות סימנים התנהגותיים ברורים של כפיפות כלפי התקפות חוזרות ונשנות על ידי התוקפן במהלך האינטראקציה6.

התאמת מודל התבוסה החברתית הכרונית לשימוש בעכברי C57BL/6 מתבגרים
גיל ההתבגרות הוא תקופה המאופיינת בהתבגרות פסיכו-סוציאלית משמעותית, המתרחשת במקביל לשינויים בארכיטקטורה המיקרו והמאקרו של המוח, במיוחד בקליפת המוח הקדם-מצחית. הן בבני אדם והן במכרסמים, אין הסכמה לגבי תחילתה וסיומה הספציפיים של תקופת ההתבגרות14,15. יתר על כן, ישנם חלונות קריטיים של פגיעות בגיל ההתבגרות לשיבוש כתוצאה מחוויה של התפתחות מוחית וקוגניטיבית מתמשכת 16,17,18,19. גיל ההתבגרות וההתבגרות מתרחשים בו זמנית, אך מונחים אלה אינם נרדפים. ההתבגרות המינית מסמלת את תחילת ההתבגרות המינית, ואילו גיל ההתבגרות מייצג שלב רחב יותר המאופיין במעבר הדרגתי ממצב נעורים להשגת עצמאות20 . קבוצות שונות הציעו כי גיל ההתבגרות בעכברים משתרע מגמילה (PND 21) ועד בגרות (PND 60)21. בפרט, ניתן להתייחס לגיל ההתבגרות המוקדם כאל השבוע הראשון והשני שלאחר הגמילה (PND 21-34) ואמצע גיל ההתבגרות כתקופת PND 35-48. טווחים אלה כוללים תקופות התפתחות דיסקרטיות הנוגעות למשל להתפתחות מערכת הדופמין 22,23,24, פגיעות להשפעות תרופתיות על התפתחות רשתות נוירונים 17,25,26,27, ומאפיינים התנהגותיים מובהקים 16,20,28,29,30 .

התנהגות לחימה מעכבר תושב נדרשת לפרוטוקול התבוסה החברתית. עם זאת, בדומה לנקבות עכברים, זכרים בדרך כלל אינם עוסקים באינטראקציות אגרסיביות עם עכברים מתבגרים מוקדמים, אולי משום שהם אינם תופסים אותם כאיום. רוב המחקרים שבדקו את ההשפעות של תבוסה חברתית כרונית בעכברי C57BL/6 בגיל ההתבגרות בוצעו במהלך תקופת אמצע גיל ההתבגרות 31,32,33,34,35; אחרים אינם מציינים את יום החשיפה שלאחר הלידה36,37, או מאריכים את ימי התבוסה לבגרות המוקדמת38 או אינם מאפשרים מגע חושי39; מחקרים אחרים על עכברים מתבגרים משתמשים בזנים שונים40,41. המאפיינים של מחקרים אלה המשתמשים בסטרס כרוני של תבוסה חברתית בעכברים זכרים מתבגרים מסוכמים בטבלה 1.

קבוצת המחקר שלנו מעוניינת להתמקד בחלונות חשיפה ספציפיים של מתבגרים, כולל גיל ההתבגרות המוקדם, בעכברי C57BL/6. בגלל משך הזמן הקצר של תקופות ההתבגרות השונות, תוכננה גרסה שונה של הגרסה המואצת של פרדיגמת הלחץ התבוסה החברתית הכרונית42. מודל זה נקרא לחץ תבוסה חברתית מואצת (AcSD) עבור עכברים מתבגרים. עבודות קודמות מראות כי קיימים הבדלים משמעותיים בין המינים ברגישות ללחץ חברתי בגיל ההתבגרות בחולדות 8,26,43,44,45, כמו גם בהשפעות המזיקות של לחץ חברתי על מסלולי בריאות הנפש בבני אדם 46,47,48,49,50,51,52, 53,54,55,56. מודל AcSD עובד ביעילות גם עבור עכברות מתבגרות, ומאפשר להן לחקור השלכות פוטנציאליות ספציפיות למין, כמו גם לחקור את הבסיס הנוירוביולוגי.

טבלה 1: מחקרים המשתמשים בפרדיגמות לחץ של תבוסה חברתית בעכברים זכרים מתבגרים. זן ומינים: עכבר קליפורניה: Peromyscus californicus. C57BL/6: Mus musculus black 6 inbred mouse strain. C57BL/6J: M. musculus שחור 6 מודל עכבר מוטבע שסופק על ידי מעבדות ג'קסון. CD-1: M. musculus מזן עכבר לבקנים שוויצרי. ICR: M. musculus Institute of Cancer Research גבר על זן עכברים לבקנים. OF1: M. musculus Oncins France 1 זן עכבר לבקנים.
קיצורים: wk = שבוע; PND = יום לאחר הלידה; res = גמיש; sus = רגיש; unsus = לא רגיש. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הליכי הניסוי בוצעו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרו על ידי אוניברסיטת מקגיל וועדת הטיפול בבעלי חיים של בית החולים דאגלס (מספר אישור ניסויים בבעלי חיים: 2005-5084). כל העכברים שוכנו בחדר מושבה מבוקר טמפרטורה ולחות (21-22 מעלות צלזיוס; 60%) ובמחזור אור-חושך של 12 שעות (אור דולק בשעה 8:00 שעות) במרכז נוירופנוטיפ של המכון האוניברסיטאי לבריאות הנפש דאגלס. לעכברים הייתה גישה למזון ומים לאורך כל הניסויים. עכברים חולקו באופן אקראי לכל תנאי ניסוי. חיות ניסוי התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). טבלה 2 מסכמת את מאפייני בעל החיים עבור כל שלב ניסוי. בסך הכל, 489 עכברי C57BL/6J מתבגרים (259 זכרים; 230 נקבות) שימשו ב-20 קבוצות ניסוי.

טבלה 2: נבדקים בבעלי חיים עבור כל שלב ניסוי. †אם בעלי חיים אלה אינם פצועים קשה, ניתן לעשות בהם שימוש חוזר לצורך הקדמה. ‡אם בעלי חיים אלה אינם פצועים קשה, ניתן לעשות בהם שימוש חוזר להכנה במהלך AcSD, §מרכז נוירופנוטיפ של המכון האוניברסיטאי לבריאות הנפש דאגלס. לניסויים עם זכרים, #לניסויים עם נקבות, אם התבוסה מעורבת, השתמשו בנקבות לפריימינג. ††אין להשתמש עבור AcSD. קיצורים: AcSD = מתח תבוסה חברתית מואצת; PND = יום לאחר הלידה אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

1. התאקלמות

הערה: שלב זה אמור להימשך שבוע אחד לפחות.

  1. רכשו עכברי CD-1 זכרים שפרשו לגמלאות (ראו טבלת חומרים) מעל גיל 4 חודשים וכמות כפולה מזו של עכברי C57BL/6J מתבגרים (כלומר, אם 10 עכברים יהיו חשופים ללחץ, רכשו 20 עכברי CD-1).
    הערה: מומלץ לרכוש כמות זו של עכברי CD-1 מכיוון שרק חלק קטן מעכברי CD-1 מראים התנהגות תוקפנית כלפי עכברים מתבגרים.
  2. תנו לעכברי CD-1 להתרגל למתקן החדש בכלוב הביתי שלהם עם מזון ומים למשך שבוע לפני ההקרנה והפריימינג.
  3. השתמש ב- C57BL/6 ב- PND >65 (מבוגרים) וב- PND 25 ± 3 (מתבגרים) (טבלה 2) עבור מפגשי ההקרנה והפריימינג. רכוש 4 עכברי C57BL/6 בכל גיל ליום של פריימינג (כלומר, במשך 3 ימים של פריימינג, רכוש 12 PND >65 ו- 12 PND 25 ± 3) כדי להפחית את הסיכון לפציעות מכיוון שבעלי חיים אלה יועסקו שוב ושוב בתהליך סינון ופריימינג.

2. הקרנת CD-1 ופריימינג

הערה: משך שלב זה הוא 3 ימים של הקרנה (יום אחד עבור נקבות עכברים) ו 3-4 ימים של פריימינג (זה יכול לעלות עבור עכברות נקבות בהתאם להתנהגות התוקפנית של עכברי CD-1).

  1. השתמש בהגדרה המבצעית של התקפה כדי לרשום את ההתקפות של CD-1 כמתואר להלן.
    1. התקפה אחת מוגדרת כאשר עכבר CD-1 נושך את עכבר C57BL/6J, ועכבר C57BL/6J מתרחק בתגובה לנשיכה. נשיכה מוגדרת כאשר עכבר CD-1 מניח את שיניו על חלק כלשהו בגוף העכבר C57BL/6J. התרחקות מוגדרת כמצב שבו עכבר C57BL/6J מזיז את שתי כפותיו האחוריות מהמיקום שבו היו לפני שה-CD-1 הפעיל אותו.
    2. ודא שיש הבדל של לפחות ~2 שניות בין התקפות נפרדות. אם מתרחשת יותר מנשיכה אחת בהפרש של <2 שניות, יש לספור כהתקף אחד.
    3. אם עכבר CD-1 נושך יותר מפעם אחת ברציפות ללא הפסקה (<~ 2 שניות זה מזה), הפריד בעדינות בין בעלי חיים באמצעות סרגל פלסטיק. אם עכבר CD-1 נושך ולא מרפה, הפרידו בעדינות בין בעלי החיים. אם עכבר C57BL/6J נלכד בפינה או מוצמד על ידי עכבר CD-1 ואינו יכול לזוז משם בתגובה לנשיכה, הפרד בעדינות בין בעלי חיים באמצעות סרגל. ספרו את כל אלה כהתקפה אחת (עד הפרדה).
  2. ההקרנה
    1. השתמשו בכפפות לבדיקת ניטרילים לכל טיפול בבעלי חיים והימנעו משימוש בבושם או ניחוחות.
    2. בצע את היוםהראשון של ההקרנה רק עם עכברים זכרים בוגרים C57BL/6 כפולשים (PND >65) בכלוב הביתי של עכברי CD-1. תמיד לסנן את עכברי CD-1 לפני ניסוי חדש.
    3. הצג עכבר זכר בוגר C57BL/6 PND >65 בכלוב הביתי של עכבר זכר CD-1 למשך 3 דקות. רשום את ההשהיה לתוקפנות הראשונה וכמה תוקפנות מבוצעות (ראה טבלה משלימה 1).
    4. מיום ה-2ועד היום האחרון של ההקרנה, הציגו זכר בוגר C57BL/6 PND>65 למשך דקה אחת (מוגבל ל-30 שניות אם ה-CD-1 אגרסיבי מאוד) ולאחר מכן החליפו אותו ב-C57BL/6 PND 25 ± 3 למשך 5 דקות.
      הערה: חשוב לבצע את הבדיקה עם עכברים מתבגרים מכיוון שלא כל העכברים התוקפים את העכבר הזכר C57BL/6 הבוגר יתקפו את העכבר המתבגר C57BL/6. למעשה, עכברי CD-1 התוקפים עכברים מתבגרים לא תמיד יתקפו זכרי C57BL/6 בוגרים.
    5. אם הניסוי נועד לתוקפנות כלפי נקבות עכברים, בצעו את הסינון והפריימינג עם נקבות עכברים מתבגרות, גם אם עכברי הניסוי כוללים את שני המינים.
    6. רשום את ההשהיה לתוקפנות הראשונה, את מספר ההתקפות ואת הפצעים שקיבלו כל עכברי C57BL/6 (ראה טבלה משלימה 2).
    7. רשום כל סוג של אינטראקציה: מרדף, התנהגויות גוברות, רחרוח, טיפוח או נשיכה. הירשם אם CD-1 אינו מתקרב לעכברי C57BL/6 מתבגרים; אם אופן פעולה זה חוזר על עצמו במשך יומיים, אל תכלול את CD-1 ב- Priming.
    8. עבור שלב הפריימינג, בחר את כל עכברי CD-1 המציגים התנהגויות כגון מרדף, התנהגויות הרכבה, רחרוח, מעקב, טיפוח או נשיכה של C57BL/6 המתבגר.
    9. שמור את עכברי CD-1 שלא נבחרו והשתמש בהם למבחן האינטראקציה החברתית (SIT).
      הערה: התנהגות טריטוריאלית עולה עם הזמן; לכן, עכברי CD-1 שלא נבחרו עלולים להיות תוקפניים כלפי עכברים מתבגרים בניסוי הבא.
  3. התנהגות תוקפנית של CD-1
    1. אחסנו את עכברי ה-CD-1 שנבחרו להכנה בכלוב הביתי שלהם עד היום האחרון של הפריימינג.
    2. הציגו עכבר זכר בוגר מסוג C57BL/6J PND >65 למשך 30 שניות לכלוב הביתי CD-1 ולאחר מכן החליפו אותו בעכבר C57BL/6 PND 25 ± 3 מתבגרים למשך 5 דקות.
    3. רשום את ההשהיה לתוקפנות הראשונה, את מספר ההתקפות וכל אינטראקציה (ראה טבלה משלימה 3).
    4. בצע את ההכנה 2 פעמים ביום במשך 3-4 ימים באותו זמן התבוסות מתוכננות (9:00 בבוקר ו 2:00 אחר הצהריים).
      הערה: לא כל עכברי CD-1 יתקפו את העכברים המתבגרים במהלך הימים הראשונים, במיוחד אם הפריימינג הוא כלפי נקבות עכברים. מספר הימים להכנה יכול לעלות או לרדת בהתאם להתנהגות התוקפנית המוצגת על ידי עכברי CD-1.
    5. כדי להפחית את מספר ימי ההקדמה, עשו שימוש חוזר בעכברי CD-1 שעברו ניסוי תבוסה חברתית קודם עם עכברים זכרים. אם עכברי CD-1 אינם מראים תוקפנות מוגברת, האריכו את ימי ההכנה עד שיגיעו לקריטריונים.
    6. קצר את ימי ההכנה אם עכברי CD-1 מראים התנהגות תוקפנית קיצונית (עכברי C57BL/6 מראים פציעה מוגזמת) כדי למנוע פציעות חמורות במהלך תבוסה חברתית.
    7. עבור השלב הבא של הניסוי, בחר את עכברי CD-1 שתוקפים את העכברים המתבגרים לפחות 10x (זכרים) או 5x (נקבות) במשך יומיים רצופים.

3. פרוטוקול AcSD

הערה: שלב זה מורכב מ-3 ימי התרגלות ו-4 ימי חשיפה ל-AcSD.

  1. התרגלות
    1. הכינו את כלובי החולדות לתבוסה חברתית (איור 1A-F). חלקו את כלובי החולדות לשני תאים באמצעות מחיצות מתאימות מזכוכית אקרילית (איור 1B,D; ראו טבלת חומרים).
    2. הוסיפו מצעי עץ קשים משני צידי הכלוב, הוסיפו ריבוע כותנה לכל צד כחומר מצע (איור 1D). ודא שראש החוט מאובטח באמצעות תפסי קלסרים (איור 1E). ודאו שכלוב החולדות מכוסה במכסה הכיסוי ללא כותנת המגן (איור 1F).
    3. הניחו עכבר CD-1 לכל כלוב בצד אחד של הכלוב. הניחו תג בצד החיצוני של הכלוב לזיהוי קל של כל עכבר.
    4. אחסן את עכברי CD-1 שנבחרו במנגנון התבוסה החברתית (איור 1F) יומיים או שלושה לפני הפעלת פרוטוקול AcSD (כדי לשפר את ההתנהגות הטריטוריאלית של CD-1).
    5. לבצע פגישה ראשונית 1 יום לפני הניסוי; זה חשוב כדי לשמור על תוקפנות עקבית.
  2. מפגשי תבוסה
    1. בצעו 2 מפגשים ביום (מפגש ראשון: 9:00, מפגש שני: 14:00) במשך 4 ימים, 8 מפגשים בסך הכל. קבע לוח זמנים כדי להבטיח שהתוקפן יהיה שונה עבור כל מפגש (ראה טבלה משלימה 4 וטבלה משלימה 5).
    2. שקול את העכבר המתבגר C57BL/6 לפני הצגתו לצד CD-1 של הכלוב. הכנס עכבר C57BL/6 זכר בוגר >65 למשך 30 שניות לצד CD-1 של כלוב התבוסה ולאחר מכן החלף אותו בעכבר C57BL/6 PND 24-28 מתבגר לפרק תבוסה ארוך של 10 דקות או 10 התקפות לכל היותר בכל הפעלה.
    3. הפרידו את החיות לאחר כל התקפה בעזרת סרגל פלסטיק. לאחר כל מפגש של תבוסה, לבדוק פציעות, ולטפל בהם עם קרם לשיכוך כאבים. רשום את מספר הפציעות.
    4. הניחו את עכבר C57BL/6J המתבגר בתא החופשי ליד תוקפן לא מוכר עד לפגישה הבאה. חזור על ההליך עם תוקפן אחר בכל פגישה.
    5. התחל את הפגישה עם עכברי הניסוי והתוקפן שלא היו מזווגים בפגישה הקודמת. עקוב אחר הפציעות של עכברים זכרים בוגרים C57BL/6J המשמשים לפריימינג (ראה טבלה משלימה 6).
  3. עקוב אחר ההמלצות הבאות עבור רווחת בעלי חיים ונקודות קצה הומאניות.
    1. בצע את נוהל ההפעלה הסטנדרטי של ועדת הבדיקה המוסדית המתאימה לתבוסות חברתיות והבטח הערכה וטרינרית מתמדת.
    2. עקוב אחר בריאותם של עכברים במהלך המחקר כדי למנוע סבל ומוות של בעלי חיים.
    3. ודא שהמחיצה המחוררת מוגדרת כראוי כדי למנוע מעבר עכברים לתא השני.
    4. יש להודיע לצוות הווטרינרי כאשר לבעל חיים יש פצע לצורך מעקב מתאים ולמרוח קרם לשיכוך כאבים מדי יום עד להחלמה מוחלטת של הפצע.
    5. אם הפציעה מחמירה (הפצעים גדלים), הגבילו את ההתקפים ל-5 בפגישה הבאה כדי לאפשר התאוששות. בדוק אם יש פציעות חמורות. פציעות חמורות מוגדרות כפציעות בהיקף של > 1 ס"מ.
    6. להסיר ולהרדים באופן מיידי בעלי חיים תוך הפחתה של 15%-20% ממשקלם ממשקל גופם ההתחלתי; פעילות מוטורית מופחתת/מופחתת וטיפוח לקוי; עכברים עם פצעים > 1 ס"מ; פין קטוע, או סימני נשיכה עם נפיחות של הגפיים הקדמיות.
      הערה: המתת חסד ראשונית מתבצעת באמצעות תאי גזים איזופלורן / CO2 ואחריה המתת חסד משנית הנעשית על ידי פריקת צוואר הרחם.
  4. עכברי בקרה
    1. בצעו 2 מפגשים ביום (מפגש ראשון: 9:00, מפגש שני: 14:00) במשך 4 ימים, 8 מפגשים בסך הכל. קבעו לוח זמנים כדי להבטיח שעכברי הביקורת יחלקו את הכלוב עם C57BL/6J שונה בכל מפגש (ראו טבלה משלימה 7 וטבלה משלימה 8).
      הערה: עכברי ביקורת אינם חשופים לתוקפן. כדי לחקות את ההקדמה לעכבר CD-1 חדשני בכל סשן תבוסה, עכברי ביקורת משויכים לעכבר חדש מאותו מין ומאותו גיל ספציפי (שאינו חבר להמלטה) בכל סשן.
    2. מקמו את עכברי הבקרה במנגנון התבוסה החברתית (איור 1) בחדר נפרד מזה של עכברי AcSD.
    3. הניחו שני עכברי ביקורת בכל כלוב, אחד בכל צד של הכלוב. שכן את העכברים בצד אחר של הכלוב או בכלוב אחר לגמרי, כך שהם לא יזהו את הריח. סובב את עכברי הבקרה בכל הפעלה.

Figure 1
איור 1: מנגנון לדחק תבוסה חברתית מואץ (AcSD) עבור עכברים מתבגרים. (A) משמאל לימין, צמרות חוטי פלדה מזווגים עם הפרדה של 0.6 ס"מ בין הסורגים, מחיצת פוליקרבונט מחוררת שקופה בקוטר נקבים של 0.6 ס"מ, אטבי קלסרים לאבטחת ראשי החוטים, כלוב חולדות שקוף עם מכסה כיסוי (ללא שכבת מגן כותנה). (B) למעלה: השוואה בין מחיצות הפוליקרבונט לתבוסה חברתית כרונית במבוגרים (משמאל) לבין AcSD במתבגרים (מימין); למטה: קרוב למחיצת הפוליקרבונט לעכברים מתבגרים. (C) למעלה: השוואה בין צמרות חוטי הפלדה לתבוסה חברתית כרונית במבוגרים (משמאל) לבין AcSD במתבגרים (מימין); למטה: תקריב של צמרות חוטי הפלדה. (ד-ו) הרכבת מנגנון התבוסה החברתית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

4. מבחן אינטראקציה חברתית

  1. בצע את SIT לאחר AcSD כפי שתואר קודם 57,58,59.
    1. בצע את SIT 24 שעות לאחר ההפעלה האחרונה של AcSD. בצע את SIT בתנאי אור אדום (לא בתנאי אור צהוב) בין השעות 09:00-16:00.
    2. הגדר את הזירה הראשית בריבוע ואת מצלמת הווידאו העילית (ראה טבלת חומרים). הזירה המרכזית מחולקת לשלושה אזורים: אזור האינטראקציה החברתית (SIZ), הפינות והמרכז; אזורים אלה צריכים להיות מסומנים בזירה בקו שחור (השתמש בטוש קבוע שחור). השתמש בממדים ובקריטריונים הבאים עבור כל אזור.
      1. ודא שה-SIZ הוא השטח הריבועי בגודל 14 ס"מ x 9 ס"מ, המקיף את המתחם. הפינות הן שטחים קטנים ומרובעים (9X9 ס"מ) בפינות הקיר מול המתחם ומייצגות את הנקודה הרחוקה ביותר מה-SIZ. המרכז הוא השטח שבין ה-SIZ לפינות.
    3. נקו את הזירה ואת המתחמים בתמיסת מימן פרוקסידאז לניקוי.
    4. הניחו תגי זיהוי לכל חיה על הרצפה לצורך ניתוח. תעד את כל התנהגות בעלי החיים לניתוח לא מקוון.
  2. מפגש ראשון לקביעת חקירה בסיסית
    1. הניחו מתחם רשת תיל ריק על אחד מקירות הזירה. מקם את עכבר הניסוי (המובס או הנשלט) C57BL/6 במרכז הזירה. אפשרו לו לחקור את הזירה בחופשיות במשך 2.5 דקות. אחזר את העכבר.
    2. נקו את הזירה ואת המתחמים בתמיסת מימן פרוקסידאז לניקוי.
  3. מפגש שני לאינטראקציה חברתית
    1. מקם עכבר CD-1 לא מוכר בתוך מארז רשת התיל. מקם את המארז באותו מיקום כמו בהפעלה הקודמת.
    2. הציגו מחדש את אותו עכבר C57BL/6 מתבגר לזירה. אפשרו לו לחקור את הזירה בחופשיות במשך 2.5 דקות. אחזר את העכברים.
    3. נקו את הזירה ואת המתחמים בתמיסת מימן פרוקסידאז לניקוי.
    4. חזור על התהליך עבור כל עכברי C57BL/6 מתבגרים (עכברי לחץ וביקורת) בסדר מאוזן.
    5. השתמש ביותר מעכבר CD-1 אחד עבור SIT כדי להפחית את הלחץ וההטיות של הטיפול (לדוגמה, עבור קבוצה של 30 עכברי C57BL/6, השתמש ב- 4 עכברי CD-1). לאזן אותם בין העכברים המתבגרים.
      הערה: מבחן זה מודד את הגישה ו/או התנהגות ההימנעות של עכברי הניסוי כלפי מטרה חברתית, כפי שתואר לראשונה על ידי קרישנאן5 וגולדן7.
  4. ניתוח
    1. רשמו את הזמן שבילו באזור האינטראקציה ובפינות במהלך שני מפגשי המבחן.
    2. חשב את יחס האינטראקציה החברתית כזמן המושקע באזור האינטראקציה עם התוקפן CD-1 נוכח חלקי הזמן המושקע באזור האינטראקציה עם התוקפן CD-1 נעדר.
    3. סווגו עכברים לחוצים עם יחס < 1.00 כרגישים ויחס ≥ 1.00 כגמישים.
    4. אין לכלול בעלי חיים שאינם חוקרים את הזירה במהלך המפגש הראשון (כלומר, בילו 0 שניות בכל אחד מהאזורים המיועדים לכך) מכל הניתוחים כדי לשלוט בהבדלים בפעילות המוטורית.
    5. אל תכלול את כל בעלי החיים שקיבלו 0 התקפות ב-≥4 מפגשי תבוסה חברתית מכל הניתוחים כדי למנוע בעלי חיים עמידים שאינם מייצגים.
    6. אל תכלול עכברים (שאינם רגישים) שאינם מבלים לפחות 61 שניות בתוך אזור האינטראקציה כדי להבטיח שיחסי אינטראקציה חברתית גבוהים משקפים עניין ממשי ביעד החברתי.
    7. אל תכלול עכברים עם ציוני יחס אינטראקציה חריגים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בסך הכל בוצעו ארבעה ניסויים שונים באמצעות מודל הלחץ הכרוני של תבוסה חברתית בעכברים זכרים מתבגרים C57BL/6 (PND 21). עם זאת, מודל זה הציג מגבלות חשובות לשימוש בו בעכברי C57BL/6 בגיל ההתבגרות המוקדם.

ציוד נדרש לשינויים עבור עכברי C57BL/6 מתבגרים
המגבלה הראשונה הייתה שהציוד ששימש למנגנון התבוסה החברתית נועד לעכברים בוגרים. בגלל גודלם, עכברי C57BL/6 מתבגרים ב-PND 21 הצליחו לעבור דרך הנקבים של החוצצים לצד התוקפן. זה קטע את תקופת המגע החושי. בנוסף, עכברים מתבגרים הצליחו להימלט דרך הסורגים של צמרות חוטי הפלדה. לכן, הציוד שונה כדי למנוע את בריחת העכברים (איור 1). קוטר הנקבים השתנה מ-1.1 ס"מ ל-0.6 ס"מ (איור 1B), וראש חוט הפלדה הוחלף מאחד עם הפרדה של 1.1 ס"מ בין הסורגים לראש עם הפרדה של 0.6 ס"מ (איור 1C). בנוסף, החלק העליון אובטח באמצעות אטבים, וכלובי החולדות כוסו גם הם בכיסויי פלסטיק ללא כותנה מגן. מצעי שבבי העץ נקבעו גם הם ברמה המתאימה לעכברים מתבגרים (איור 1D-F).

מודל AcSD דורש פריימינג של עכברי CD-1 זכרים בוגרים כדי להבטיח התקפים עקביים ותוקפניים
המגבלה השנייה והחשובה יותר הייתה חוסר עקביות בתוקפנות הפיזית של עכברי CD-1 כלפי העכברים המתבגרים. במהלך מפגשי התבוסה החברתית הכרונית, התוקפנות השתנתה מאפס התקפות אגרסיביות במהלך 10 הדקות לנשיכה אחת או שתיים שהיו קטלניות בגלל גודלם הקטן של העכברים המתבגרים. עם זאת, אם עכברי CD-1 שימשו ליותר מניסוי אחד, העקביות במספר ההתקפות גדלה.

איור 2B מראה את מספר ההתקפות ביום עבור כל קבוצת ניסוי של תבוסה חברתית כרונית (P0, A0, A1 ו-A2). נמצאה אינטראקציה בין היום לעוקבה (איור 2B, מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA: F(27, 234) = 3.83, p < 0.0001), ההשפעה העיקרית של היום (F(6.288, 163.5) = 6.2, p < 0.0001), וההשפעה העיקרית של עוקבה (F(3, 26) = 3.8, p = 0.02). בדיקה פוסט-הוק גילתה הבדלים בין קבוצות בימים 1, 2, 3 ו-7 (מבחני הולם-סידאק פוסט-הוק: יום 1, P0 לעומת A2, p = 0.02; A1 לעומת A2, p = 0.02; יום 2, A1 לעומת A2, p = 0.04; יום, 3 A0 לעומת A1, p = 0.007; A1 לעומת A2, p = 0.04; יום 7, A0 לעומת A1, p = 0.04). כל עכברי CD-1 בניסויים P0 ו-A0 הפסיקו לתקוף בשלושת הימים האחרונים. עכברי CD-1 ששימשו לניסויים P0 ו-A0 שימשו ב-A1, שבהם הייתה עקביות בהתקפות (איור 2B), מה שמצביע על כך שה-CD-1 היו מועדים יותר לתוקפנות אם היו נתונים לאינטראקציות פיזיות לפני כן.

מסיבה זו, כפי שמתואר בשלבים 2.1 ו-2.2, עכברי CD-1 נבדקו במיוחד עבור תוקפנותם כלפי עכברים מתבגרים והותקפו עם זכר C57BL/6 בוגר לתוקפנות כלפי עכברי C57BL/6 מתבגרים. יתר על כן, AcSD שימש כדי להגדיל את הגיל מ PND 21 ל PND 25 ועדיין להתמקד בגיל ההתבגרות המוקדם.

במהלך מפגשי AcSD, עכברי CD-1 הגדילו את מספר ההתקפות כלפי עכברים מתבגרים בדפוס עקבי יותר כפי שמוצג באיור 2D. בניגוד לפרדיגמת התבוסה החברתית הכרונית, לא נמצאה אינטראקציה משמעותית בין המפגש לבין קבוצת הניסוי (איור 2D, מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA: F(35, 483) = 1.33, p = 0.1), הייתה השפעה עיקרית של הפעלה (F(5.644, 389.5) = 14.15, p < 0.0001) והשפעה עיקרית של עוקבה (F(5, 69) = 7.91, p < 0.0001); מבחן הולם-סידאק לאחר הוק לא גילה הבדלים משמעותיים בין הקבוצות. השוואה של ממוצעי ההתקפות בין קבוצות גילתה כי השפעה זו הונעה בעיקר על ידי עוקבה A7, אשר היה מספר גבוה משמעותית של התקפות (הנתונים לא מוצגים, חד כיווני ANOVA F(5, 69) = 7.911, p < 0.0001; בדיקות הולם-סידאק לאחר הוק : A3 לעומת A6, p = 0.04; A7 לעומת A5, p = 0.002; A7 לעומת A6, עמ' < 0.0001; A7 לעומת A8, p = 0.0001).

עכברים מתבגרים קיבלו יותר התקפות עם עכברי CD-1 דרוכים במהלך AcSD מאשר עכברים מתבגרים שנחשפו לפרוטוקול תבוסה חברתית כרונית (איור 2E, מבחן t לא מזווג עם תיקון וולש, t = 15.40, df = 17.87, p < 0.0001) באמצעות עכברי CD-1 נאיביים (לא ראשוניים). ההתקפות לא היו עקביות במהלך פרוטוקול התבוסה החברתית הכרונית, ולמעשה, מספר עכברי ניסוי לא הותקפו כלל.

Figure 2
איור 2: השוואה של מספר ההתקפים ביום בין סטרס כרוני של תבוסה חברתית לבין AcSD. (A) ציר הזמן של מודל הסטרס של התבוסה החברתית הכרונית. (B) מספר ההתקפות ביום עבור כל קבוצת ניסוי (P0, P1, A1 ו-A2) במהלך לחץ תבוסה חברתית כרונית בעכברים זכרים מתבגרים C57BL/6 (מדידה דו-כיוונית חוזרת ANOVA). (C) ציר הזמן של מודל הלחץ המואץ של התבוסה החברתית (AcSD). (D) מספר ההתקפות ביום עבור כל קבוצת ניסוי (A3-A8) במהלך AcSD בעכברים זכרים מתבגרים C57BL/6 (מדידה דו-כיוונית חוזרת ANOVA). (E) מספר ההתקפות הממוצע היה גבוה משמעותית עבור AcSD (מבחן t לא משויך עם התיקון של וולש, ****p < 0.0001). כל הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. קיצורים: CSDS = לחץ תבוסה חברתית כרונית; SIT = מבחן אינטראקציה חברתית; PND = יום לאחר הלידה; P0, A0-A8 = תוויות עבור כל קבוצת ניסוי. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

דפוס ההתקפות במהלך הפעלות AcSD אינו משפיע על פנוטיפ חברתי 24 שעות מאוחר יותר
לאחר חשיפה לסטרס של תבוסה חברתית, רוב העכברים הזכרים המתבגרים לא הראו הימנעות חברתית כאשר נבדקו במבחן SIT (איור 3B, תבוסה חברתית כרונית: ANOVA F(2, 43) = 14.57, p < 0.0001. ו, AcSD: מבחן Kruskal-Wallis, H(2) = 72.35, p < 0.0001). עבור שני המודלים, לא היו הבדלים משמעותיים במספר ההתקפות בין עכברים שהובסו על ידי הימנעות חברתית לבין עכברים שאינם נמנעים חברתית (איור 3D, תבוסה חברתית כרונית: מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA, F(9, 252) = 4.07, p = 0.21. ח. AcSD: אמצעים חוזרים דו-כיווניים ANOVA, F(7, 511) = 1.32, p = 0.24). עם זאת, שיעור העכברים העמידים היה גבוה יותר לאחר תבוסה חברתית כרונית מאשר זה שלאחר חשיפה ל-AcSD (איור 3C,G, 70% לעומת 55.26%, בדיקה בינומית (חד-זנבית), p = 0.0047).

Figure 3
איור 3: השוואה בין ציוני מבחני אינטראקציה חברתית (SIT) בעקבות לחץ תבוסה חברתית כרונית ופרדיגמות AcSD. (A) ציר הזמן של מודל הלחץ החברתי הכרוני. (B) התפלגות ציון SIT לאחר תבוסה חברתית כרונית בגיל ההתבגרות (ANOVA חד-כיוונית). (C) שיעור העמידים/רגישים לאחר תבוסה חברתית כרונית בגיל ההתבגרות. (D) מספר ההתקפים על ידי פנוטיפ שהתקבלו במהלך לחץ תבוסה חברתית כרונית, לא נמצאו הבדלים משמעותיים בין עמיד לרגיש (מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA). (E) ציר הזמן של מודל לחץ התבוסה החברתית המואצת (AcSD). (F) התפלגות ציון SIT לאחר AcSD בגיל ההתבגרות (Kruskal-Wallis). נתון זה שונהמ-57. (G) שיעור הגמישים/רגישים לאחר AcSD בגיל ההתבגרות. נתון זה שונהמ-57. (H) מספר ההתקפות לפי פנוטיפ שהתקבלו במהלך AcSD; אין הבדל בין גמיש לרגיש (אמצעים חוזרים דו-כיווניים ANOVA). נתון זה שונהמ-59. **p < 0.001, ****p < 0.0001. כל הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. קיצורים: PND = יום לאחר הלידה; קון = פקדים; Res = גמיש; Sus = רגיש. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

ניתן להשתמש ב-AcSD בעכברות C57BL/6 בגיל ההתבגרות
מכיוון שעכברים זכרים ונקבות PND 25 C57BL/6 לא הגיעו לבשלות רבייה, עכברי CD-1 דרוכים עלולים להציג התקפות אגרסיביות כלפי עכברות נקבות מתבגרות כפי שעשו כלפי עכברים זכרים מתבגרים. אולם היה צורך להרחיב את שלב ההכנה כדי להגיע למספר עקבי של התקפות (איור 4A). כפי שניתן לראות באיור 4B, לא נמצאה אינטראקציה בין היום לעוקבה בין הניסויים (איור 4B, מדידות חוזרות דו-כיווניות ANOVA: F(35,707) = 1.38, p = 0.07), הייתה השפעה עיקרית של המפגש (F(6.286, 634.9) = 16.1, p < 0.0001) והשפעה עיקרית של הקבוצה (F(5, 101) = 11.34, p < 0.0001; בדיקות Holm-Sidak לאחר הוק : מפגש 2 C4 לעומת C8, p = 0.03; מפגש 6 C7 לעומת C4, p = 0.02; C7 לעומת C5, p = 0.02; מפגש 7 C8 לעומת C3, p = 0.02; C8 לעומת C4, p = 0.045). רוב העכברות המתבגרות C57BL/6 שנחשפו ל-AcSD היו עמידות להימנעות חברתית (איור 4C, ANOVA של בראון-פורסיית': F(2,113.4) = 27.2, p < 0.0001), בדומה לעכברים זכרים מתבגרים. לא נמצא הבדל משמעותי במספר ההתקפות בין עכברים עמידים לרגישים (איור 4E, מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA, אינטראקציה פנוטיפ session x: F(7, 714) = 0.73, p = 0.64, ההשפעה העיקרית של הפעלה F(6.375, 650.3) = 7.02, p < 0.0001, ללא השפעה עיקרית של פנוטיפ F(1, 102) = 0.4, p = 0.53).

Figure 4
איור 4: AcSD בעכברות מתבגרות. (A) ציר הזמן של הניסוי. (B) מספר ההתקפות ביום על ידי ניסוי במהלך AcSD (מדידה חוזרת דו-כיוונית ANOVA). (C) התפלגות ציון SIT לאחר AcSD במהלך גיל ההתבגרות בעכברות נקבות (ANOVA של בראון-פורסיית). (D) שיעור עמידים/רגישים לאחר AcSD בגיל ההתבגרות (זכות). (E) מספר ההתקפות לפי פנוטיפ שהתקבלו במהלך AcSD; לא נמצאו הבדלים משמעותיים בין עכברים עמידים לרגישים (מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA). כל הנתונים מוצגים כממוצע ± סמ' (ג-ה) נתונים אלה שונומ-59. קיצורים: SIT = מבחן אינטראקציה חברתית; PND = יום לאחר הלידה; C3-C8 = תוויות עבור כל קבוצת ניסוי; קון = פקדים; Res = גמיש; Sus = רגיש. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

טבלה משלימה 1: תבנית גיליון ניקוד ליום הראשון של ההקרנה עם מבוגרים. קיצורים: CD-1 = מזהה של עכברי CD-1 שהוקרנו, Exp = מזהה ניסוי, 3 דקות = משך סשן ההקרנה עבור עכברים בוגרים C57BL/6, מזהה BL6 = מזהה של C57BL/6 עכברים בוגרים המשמשים להקרנה, Lat 1 ADULTS = חביון ההתקפה הראשונה מה- CD-1 כלפי העכבר הבוגר C57BL/6, # תוקפנות = מספר ההתקפות שבוצעו על ידי CD-1. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 2: תבנית גיליון ניקוד להקרנה עם מבוגרים ובני נוער. קיצורים: Exp = מזהה ניסוי, 1 דקות = משך ההקרנה עבור C57BL/6 עכברים בוגרים, BL6 ID = מזהה של C57BL/6 עכברים בוגרים המשמשים להקרנה, Lat 1 ADULTS = חביון ההתקפה הראשונה מה- CD-1 לכיוון העכבר הבוגר C57BL/6, # תוקפנות = מספר ההתקפות שבוצעו על ידי CD-1, 5 דקות = משך ההקרנה לעכברים מתבגרים C57BL/6, BL6 Ad = מזהה של עכברים מתבגרים C57BL/6 המשמש להקרנה, Lat 1 מתבגרים = חביון ההתקפה הראשונה מה-CD-1 לעבר העכבר המתבגר C57BL/6, CD-1 = מזהה של עכברי CD-1 שהוקרנו. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 3: תבנית גיליון ניקוד לשלב ההקדמה. קיצורים: CD-1 = מזהה של עכברי CD-1 המשמש לפריימינג, Exp = מזהה ניסוי, 30 שניות = משך הפעלת הפריימינג עבור העכברים הבוגרים C57BL/6, מזהה BL6 = מזהה של C57BL/6 עכברים בוגרים המשמשים לפריימינג, Lat 1 ADULTS = חביון ההתקפה הראשונה מה-CD-1 לעבר העכבר הבוגר C57BL/6, # תוקפנות = מספר ההתקפות שבוצעו על ידי CD-1, מינימום: 3 = משך סשן ההכנה לעכברים מתבגרים C57BL/6, BL6 Ad = מזהה של עכברים מתבגרים C57BL/6 המשמשים לפריימינג, Lat 1 מתבגרים = חביון ההתקפה הראשונה מה-CD-1 לכיוון העכבר המתבגר C57BL/6, # הרכבה = מספר ההרכבה שקיבלו העכברים המתבגרים C57BL/6. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 4: תבנית גיליון ניקוד לתזמון תבוסה חברתית (20 עכברים מתבגרים). קיצורים: CD1 = מזהה של עכברי CD-1, E = ניסוי, H = לחות, 1 st = מפגש 1, 2nd = מפגש 2, BL6 מבוגר = מזהה של C57BL/6 עכברים בוגרים המשמשים לפריימינג, משקל = משקל של C57BL/6 עכברים מתבגרים, # התקפות = מספר ההתקפות שבוצעו על ידי CD-1, # פצעים = מספר הפצעים שהתקבלו על ידי עכברים מתבגרים C57BL/6. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 5: דוגמה לתזמון תבוסה חברתית. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 6: תבנית לניטור פציעות של עכברים זכרים בוגרים C57BL/6. קיצורים: 1st - # פצעים = מספר הפצעים שהתקבלו על ידי העכבר הבוגר C57BL/6 במפגש 1, 2nd - # פצעים = מספר הפצעים שהתקבלו על ידי העכבר הבוגר C57BL/6 במפגש 2, BL6 = מזהה של C57BL/6 עכברים בוגרים המשמשים לפריימינג. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 7: תבנית תזמון קבוצת ביקורת (10 עכברים מתבגרים). כללים לערבול: אל תחזור על אותו קונפרט; עכבר אינו יכול לחזור על אותו צד של התיבה באותו יום; עכברים צריכים להיות מקושקשים עם עכברים מכלובים שונים מהכלוב הביתי שלהם; כלובי הבית ממוספרים; מספרי עכברים ניתנים בהתאם למספר הכלוב הביתי; קבוצות מובסות וקבוצות ביקורת נלקחות באופן אקראי מהכלוב הביתי. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 8: דוגמה לתזמון קבוצת ביקורת. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

התנהגות עקבית ותוקפנית בעכברי CD-1
במהלך שלב המיון, חשוב מאוד לשים לב לכל ההתנהגויות המוצגות על ידי CD-1 (מרדף, התנהגויות הרכבה, רחרוח, טיפוח או נשיכה) ולעקוב מקרוב אחר רשומות אלה בעת בחירת עכברי CD-1 עבור AcSD. סביר להניח כי עכבר CD-1 אשר אינטראקציה עם העכבר המתבגר מבלי לתקוף אותו יפתח תוקפנות כלפי עכברים מתבגרים במהלך ההקדמה. לעומת זאת, עכבר CD-1 התוקף עכבר בוגר אך אינו מתקרב לעכבר מתבגר כנראה לא יפתח תוקפנות כלפי עכברים מתבגרים.

שלב הפריימינג CD-1 מאפשר לפתח התנהגות תוקפנית כלפי עכברים מתבגרים. לכן, רישום מדויק של ההתנהגויות הוא קריטי לבחירת העכברים. יתר על כן, חיוני תמיד לסנן את עכברי CD-1 לפני ניסוי חדש, גם כאשר עכבר CD-1 עבר תבוסה בעבר. חלק מעכברי CD-1 יכולים להפסיק לתקוף עכברים מתבגרים כאשר הם נותרים ללא הפרעה בכלובים הביתיים שלהם למשך תקופה מסוימת, אחרים יכולים לפתח התנהגות טריטוריאלית מוגברת מכיוון שהם שוכנים בבידוד.

עבור הפריימינג של עכברי CD-1, הפרוטוקול ממליץ על 3 ימים. אם משתמשים בעכברי CD-1 תמימים, ניתן להאריך את הפריימינג אם עכברי CD-1 אינם תוקפים את העכברים המתבגרים באופן פעיל. עבור עכברי CD-1 שעברו תבוסה חברתית עם עכברים מתבגרים, ניתן לקצר את משך שלב הפריימינג הזה.

שלבי הסינון והפריימינג הם קריטיים למפגשי AcSD מוצלחים. לדוגמה, עכברי CD-1 שהוכנו כראוי יתקפו ויגיעו למגבלת 10 ההתקפות מהר יותר מעכבר CD-1 פחות אגרסיבי, מה שיאפשר אפיזודות תבוסה קצרות.

במהלך AcSD, חיוני להפריד בין בעלי החיים כאשר ההתקפות אלימות מאוד (כלומר, עכבר CD-1 אינו מרפה מעכבר C57BL/6J); אחרת, העכברים המתבגרים ייפצעו, ויש להגביל את ההתקפות. טיפול בפציעות חשוב מאוד גם כדי למנוע זיהומים; מומלץ לא להשתמש במשחות שומניות לטיפול בפציעות מכיוון שבעלי חיים ילקקו את המשחה, יאבדו שיער בתהליך ויחשפו את הפציעה.

פתרון בעיות AcSD לשימוש עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכר ונקבה
מודל הלחץ החברתי הכרוני הציג מגבלות חשובות לשימוש בו בתחילת גיל ההתבגרות בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6. בחלק זה מתוארים השינויים שנעשו לפיתוח מודל AcSD בגיל ההתבגרות.

ציוד: רשימת הציוד המלאה מופיעה בטבלת החומרים. העכברים המתבגרים C57BL/6 בתחילת גיל ההתבגרות (PND 21-30) היו קטנים מדי עבור הציוד שתואר קודם לכן ששימש במעבדה60. קוטר הנקבים על מחיצות הזכוכית האקרילית גדול מספיק כדי לאפשר לעכברי C57BL/6 לעבור מתא אחד למשנהו, שם מתגורר התוקפן. כדי למנוע זאת, מחיצות זכוכית אקרילית שיש להם נקבים בקוטר קטן נעשו. בנוסף, היה צורך לאבטח את ראש חוט הפלדה באמצעות קליפסים כדי למנוע מעכברים לברוח מהכלובים. מכסי הכיסוי המשמשים משמשים בדרך כלל לכלובים מאווררים. במקרה זה, מכסי כיסוי אלה שימשו ללא כותנת המגן כדי לאפשר אוורור נאות ולמנוע בריחה של עכברים מהכלוב. חשוב לקחת בחשבון כי כמות מצעי שבבי העץ בהם נעשה שימוש אמורה לאפשר לעכברים מתבגרים להגיע למזון ולמתקן המים המונח על מכסה הכיסוי. עם זאת, כמויות גדולות של שבבי עץ יכולות להירטב.

בחירת עכברי CD-1: במודל הכרוני, עכברי CD-1 נבדקים להתנהגות תוקפנית לפני תחילת הניסוי. עכברי CD-1 נבחרים לאחר 3 ימי הקרנה, והתנהגותם התוקפנית מוערכת. לאחר הסינון, בעלי החיים שיש להם השהיות לתקוף מתחת לגיל 30 ומראים התקפות עקביות נבחרים לשלב הבא. אולם במהלך ניסויי התבוסה החברתית הכרונית, עכברי CD-1 לא שמרו על מספר עקבי של התקפות במשך 10 ימים (איור 2B). לכן, מספר עכברי CD-1 היו צריכים להיות מוסרים מהניסוי בשל חוסר תוקפנות כלפי העכבר הפולש. למעשה, בעוד שרק חלק קטן מעכברי CD-1 תקפו את העכבר הפולש, חלק מהעכברים הללו היו תוקפניים ביותר ולעיתים פצעו קשה את עכברי C57BL/6 PND 21 הזכרים. לכן, הסינון של עכברי CD-1 שונה לבחירת עכברים תוקפניים כלפי עכברים מתבגרים, מה שהגביר את התוקפנות הפיזית.

עקביות של תוקפנות פיזית: תוקפנות פיזית עקבית מובילה להשגת תבוסה מהירה וחזקה של הפולש6. כדי לתקנן נהלים בין ניסויים לנסיינים, נעשה שימוש בהגדרה מבצעית של התקפה57, המאפשרת מדידה כמותית מדויקת של אגרסיביות.

אגרסיביות ראשונית: במהלך ניסויי התבוסה החברתית הכרונית, מספר ההתקפות השתנה מאוד, וירד בימים האחרונים של הניסוי (איור 2B). כדי להגביר את ההתנהגות התוקפנית של עכברי CD-1 כלפי עכברי C57BL/6 זכרים מתבגרים, עכברי CD-1 היו מוכנים להיות תוקפניים באופן פעיל ללא קשר לעכברים שהוכנסו לכלוב הביתי שלהם. התנהגות זו הושגה על ידי החדרת עכבר זכר C57BL/6 בוגר למשך דקה אחת לפני העכבר המתבגר, עידוד עכבר CD-1 לתקוף את העכברים המתבגרים לאחר שהמבוגר נלקח.

משך המודל: עכברי C57BL/6 מתבגרים ב-PND 21 הם קטנים מאוד, ועכברי CD-1 עלולים לפצוע אותם קשות בהתקפה אחת בלבד. לכן, כדי להתמקד בגיל ההתבגרות המוקדם ועדיין יש מפגשים חוזרים ונשנים של תבוסה חברתית, נבחר מודל חלופי ללחץ התבוסה החברתית הכרונית הקלאסית של 10 ימים. מתח התבוסה החברתית המואצת (AcSD)42 מורכב משני מפגשים של תוקפנות פיזית ביום, מפגש אחד בבוקר ואחד אחר הצהריים, בסך הכל 4 ימים (8 מפגשים). מודל AcSD איפשר להעלות את גיל העכברים המתבגרים מ-PND 21 ל-PND 25, עדיין מכוון לגיל ההתבגרות המוקדם בלבד.

מגבלות של AcSD בגיל ההתבגרות
למודל AcSD יש כמה מגבלות. בהשוואה למודל התבוסה החברתית הכרונית במבוגרים, AcSD דורש סינון של מספר כפול של עכברי CD-1 של עכברי C57BL/6 מתבגרים. משך שלב הפריימינג יכול להשתנות בהתאם להתנהגות התוקפנית של עכברי CD-1; ככזה, לוח הזמנים AcSD צריך להיות מתוכנן עם ציפייה, וכל המשתנים האלה צריך להילקח בחשבון. מאחר שרוב העכברים המתבגרים יפגינו עמידות מפני הימנעות חברתית לאחר חשיפה ל-AcSD, כדי להשיג מספר מייצג של עכברים רגישים, קבוצת הניסוי צריכה לכלול לפחות 20 בעלי חיים לזכרים ו-30 לנקבות.

AcSD בעכברים מתבגרים מניב תוצאות עקביות על פני קבוצות ניסוי
לאחר חשיפה ללחץ חברתי הן עם תבוסה חברתית כרונית והן עם פרוטוקולי AcSD, רוב העכברים הזכרים המתבגרים הראו עמידות מפני הימנעות חברתית. עם זאת, עבור מודל התבוסה החברתית הכרונית, לא ניתן היה לבטל את השונות במספר ההתקפות על ידי CD-1 כמשתנה מבלבל. לעומת זאת, עבור ניסויי AcSD, עכברי CD-1 דרוכים לפני כל סשן תבוסה כדי להשיג מספר עקבי של התקפות על פני סשנים שונים (איור 2D,E). בסך הכל, כל קבוצות הניסוי של עכברים שנחשפו ל-AcSD מראות מספר דומה של התקפות בין הפעלות (איור 2D); אולם זה לא המקרה עבור קבוצות עכברים שנחשפו למודל התבוסה החברתית הכרונית (איור 2B).

השימוש בעקה הכרונית של תבוסה חברתית בעכברות בוגרות C57BL/6 היה מאתגר בהשוואה לאחרים המשתמשים במודל זה במינים אחרים וזנים 9,13,45,61. עבור ניסויי AcSD בעכברות מתבגרות C57BL/6, שלב הפריימינג הוארך, מה שהבטיח את ההתנהגות התוקפנית של עכברי CD-1 (איור 4A). אולם ניתן לראות שונות במספר ההתקפות בין קבוצות ניסוי נשיות (איור 4B). עם זאת, בניסויים אלה, כל עכברי CD-1 הראו התנהגות תוקפנית כלפי נקבות. כדי להגדיל את מספר ההתקפות, ניתן להאריך את הפריימינג עם העכברים הזכרים לדקה אחת. כמו אצל זכרים, שיעור העכברות המתבגרות C57BL/6 שהיו עמידות מפני הימנעות חברתית היה גבוה יותר מזה של אלה שהראו רגישות (איור 4C,D). יתר על כן, מספר ההתקפות לא היה שונה בין עכברים עמידים לרגישים (איור 4E), מה שמצביע על כך שהפנוטיפ אינו תלוי בהתקפות. AcSD יכול לשמש בעכברות C57BL/6 בגיל ההתבגרות וניתן לבצע ניסויים בו זמנית בשני המינים באמצעות אותם עכברי CD-1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו מומנה על ידי המכונים הקנדיים לחקר הבריאות (CF Grant Numbers: MOP-74709; PJT 190045), המכון הלאומי לשימוש בסמים (מספר מענק CF: R01DA037911), המועצה למחקר מדעי הטבע וההנדסה של קנדה (מספר מענק CF: 2982226). אנדראה פנטויה-אורבן נתמכה על ידי המועצה הלאומית למדעי הרוח, המדע והטכנולוגיות / Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías (CONAHCYT) ממקסיקו ו- FRQNT - תוכנית מלגות הצטיינות לסטודנטים זרים (PBEEE). סמואל ריצ'ר נתמך על ידי מלגה מהתוכנית המשולבת למדעי המוח באוניברסיטת מקגיל. איורי איורים נוצרו באמצעות תבניות משנת BioRender.com.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6 adolescent mice  In house breeding Mice were breeded at the Neurophenotyping Centre of the Douglas Mental Health University Institute.
C57BL/6 adult mice  Charles River Laboratories Strain Code: 027 Mice are ordered so as to arrive at PND>65 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
C57BL/6J adolescent mice  Jackson Labs Strain Code: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664 Mice are ordered so as to arrive at PND 24 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
CD-1 mice  Charles River Laboratories Strain Code: 022 Mice retired breeders more than three months of age and singled housed throughout.
Cleaning solution  Virox Animal Health DIN 02537222 Prevail: Accelerated Hydrogen Peroxide. Desinfectant cleaner and deodorizer.
Clear perforated acrylic glass divider  Manufactured by Douglas Hospital, custom order 0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); perforations of 0.6 cm diameter. The dividers are perforated allowing sensory but no physical contact between the pair of mice.
Clear rectangular rat cages  Allentown 24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h).
Cotton squares for bedding Inotiv Envigo T.6060 iso-BLOX 2.5 cm x 2.5 cm. Added to the social defeat apparatus.
Hard woodchip bedding Inotiv Envigo Teklad 7090, 7115 Sani-chip bedding.
Large binder clips to secure the steel-wire tops STAPLES Item #: 132429, Model #: 24178-CA 51 mm
Medium binder clips to secure the steel-wire tops Item #: 132367, Model #: 24172-CA 32 mm, in case the cover lids of the rat cages do not close with the large clips
Pain relief cream Polysporin Plus Pain Relief Cream (red format, NOT ointment), 2 Antibiotics plus lidocaine hydrochloride
Paired Steel-wire tops  24 cm (w) × 48 cm (d) with 0.6 cm (w) of separation between the grill
Removable wire-mesh enclosure  Johnston industrial plastics 11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) custom order; two per social interaction test arena secured in precut clear polycarbonate
Social interaction open-field arena PEXIGLAS 45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), custom-crafted from opaque acrylic glass (Plexiglas) 
Stopwatch  For timing defeat sessions
Video camera with infrared lights  Swann SRDVR-44580V  Swann Camera - 4 Channel 1080p Digital Video Recorder & 2 x PRO-T853
Video tracking software  Topscan 2.0 Clever Systems Inc.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Miczek, K. A. A new test for aggression in rats without aversive stimulation: Differential effects of d-amphetamine and cocaine. Psychopharmacology. 60, 253-259 (1979).
  2. Kudryavtseva, N., Bakshtanovskaya, I., Koryakina, L. Social model of depression in mice of c57bl/6j strain. Pharmacol Biochem Behav. 38 (2), 315-320 (1991).
  3. Blanchard, R. J., Mckittrick, C. R., Blanchard, D. C. Animal models of social stress: Effects on behavior and brain neurochemical systems. Physiol Behav. 73 (3), 261-271 (2001).
  4. Berton, O., et al. Essential role of bdnf in the mesolimbic dopamine pathway in social defeat stress. Science. 311 (5762), 864-868 (2006).
  5. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  6. Bartolomucci, A., Fuchs, E., Koolhaas, J. M., Ohl, F. Acute and chronic social defeat: Stress protocols and behavioral testing. Neuromethods. 42, 261-275 (2009).
  7. Golden, S. A., Covington Iii, H. E., Berton, O., Russo, S. J. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 6 (8), 1183-1191 (2011).
  8. Bourke, C. H., Neigh, G. N. Behavioral effects of chronic adolescent stress are sustained and sexually dimorphic. Horm Behav. 60 (1), 112-120 (2011).
  9. Steinman, M. Q., Trainor, B. C. Sex differences in the effects of social defeat on brain and behavior in the California mouse: Insights from a monogamous rodent. Semin Cell Dev Biol. 61, 92-98 (2017).
  10. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Sci Rep. 7 (1), 12838 (2017).
  11. Wright, E. C., et al. Sexual differentiation of neural mechanisms of stress sensitivity during puberty. Proc Natl Acad Sci U S A. 120 (43), 2306475120 (2023).
  12. Yin, W., et al. Repeated social defeat in female mice induces anxiety-like behavior associated with enhanced myelopoiesis and increased monocyte accumulation in the brain. Brain Behav Immun. 78, 131-142 (2019).
  13. Van Doeselaar, L., et al. Chronic social defeat stress in female mice leads to sex-specific behavioral and neuroendocrine effects. Stress. 24 (2), 168-180 (2021).
  14. Hollenstein, T., Lougheed, J. P. Beyond storm and stress: Typicality, transactions, timing, and temperament to account for adolescent change. Am Psychol. 68 (6), 444 (2013).
  15. Sawyer, S. M., Azzopardi, P. S., Wickremarathne, D., Patton, G. C. The age of adolescence. Lancet Child Adolesc Health. 2 (3), 223-228 (2018).
  16. Adriani, W., Laviola, G. Windows of vulnerability to psychopathology and therapeutic strategy in the adolescent rodent model. Behav Pharmacol. 15 (5), 341-352 (2004).
  17. Reynolds, L. M., et al. Early adolescence is a critical period for the maturation of inhibitory behavior. Cereb Cortex. 29 (9), 3676-3686 (2019).
  18. Reynolds, L. M., et al. Amphetamine disrupts dopamine axon growth in adolescence by a sex-specific mechanism in mice. Nat Commun. 14 (1), 4035 (2023).
  19. Sisk, L. M., Gee, D. G. Stress and adolescence: Vulnerability and opportunity during a sensitive window of development. Curr Opin Psychol. 44, 286-292 (2022).
  20. Spear, L. P. The adolescent brain and age-related behavioral manifestations. Neurosci Biobehav Rev. 24 (4), 417-463 (2000).
  21. Reynolds, L. M., Flores, C. Mesocorticolimbic dopamine pathways across adolescence: Diversity in development. Front Neural Circuits. 15, 735625 (2021).
  22. Manitt, C., et al. The netrin receptor dcc is required in the pubertal organization of mesocortical dopamine circuitry. J Neurosci. 31 (23), 8381-8394 (2011).
  23. Reynolds, L. M., et al. Dcc receptors drive prefrontal cortex maturation by determining dopamine axon targeting in adolescence. Biol Psychiatry. 83 (2), 181-192 (2018).
  24. Kalsbeek, A., Voorn, P., Buijs, R., Pool, C., Uylings, H. Development of the dopaminergic innervation in the prefrontal cortex of the rat. J Comp Neurol. 269 (1), 58-72 (1988).
  25. Cuesta, S., et al. Dcc-related developmental effects of abused-versus therapeutic-like amphetamine doses in adolescence. Addict Biol. 25 (4), 12791 (2020).
  26. Bekhbat, M., et al. Adolescent stress sensitizes the adult neuroimmune transcriptome and leads to sex-specific microglial and behavioral phenotypes. Neuropsychopharmacology. 46 (5), 949-958 (2021).
  27. Hammerslag, L. R., Gulley, J. M. Age and sex differences in reward behavior in adolescent and adult rats. Dev Psychobiol. 56 (4), 611-621 (2014).
  28. Wheeler, A. L., et al. Adolescent cocaine exposure causes enduring macroscale changes in mouse brain structure. J Neurosci. 33 (5), 1797-1803 (2013).
  29. Schneider, M. Adolescence as a vulnerable period to alter rodent behavior. Cell Tissue Res. 354, 99-106 (2013).
  30. Makinodan, M., Rosen, K. M., Ito, S., Corfas, G. A critical period for social experience-dependent oligodendrocyte maturation and myelination. Science. 337 (6100), 1357-1360 (2012).
  31. Iñiguez, S. D., et al. Social defeat stress induces a depression-like phenotype in adolescent male c57bl/6 mice. Stress. 17 (3), 247-255 (2014).
  32. Iñiguez, S. D., et al. Social defeat stress induces depression-like behavior and alters spine morphology in the hippocampus of adolescent male c57bl/6 mice. Neurobiol Stress. 5, 54-64 (2016).
  33. Latsko, M. S., Farnbauch, L. A., Gilman, T. L., Lynch Iii, J. F., Jasnow, A. M. Corticosterone may interact with peripubertal development to shape adult resistance to social defeat. Horm Behav. 82, 38-45 (2016).
  34. Zhang, F., Yuan, S., Shao, F., Wang, W. Adolescent social defeat induced alterations in social behavior and cognitive flexibility in adult mice: Effects of developmental stage and social condition. Front Behav Neurosci. 10, 149 (2016).
  35. Xu, H., et al. Effects of adolescent social stress and antidepressant treatment on cognitive inflexibility and bdnf epigenetic modifications in the mpfc of adult mice. Psychoneuroendocrinology. 88, 92-101 (2018).
  36. Huang, G. B., et al. Effects of chronic social defeat stress on behaviour, endoplasmic reticulum proteins and choline acetyltransferase in adolescent mice. Int J Neuropsychopharmacol. 16 (7), 1635-1647 (2013).
  37. Hasegawa, S., et al. Dysfunction of serotonergic and dopaminergic neuronal systems in the antidepressant-resistant impairment of social behaviors induced by social defeat stress exposure as juveniles. Int J Neuropsychopharmacol. 21 (9), 837-846 (2018).
  38. Resende, L., et al. Social stress in adolescents induces depression and brain-region-specific modulation of the transcription factor max. Transl Psychiatry. 6 (10), e914 (2016).
  39. Mouri, A., et al. Juvenile social defeat stress exposure persistently impairs social behaviors and neurogenesis. Neuropharmacology. 133, 23-37 (2018).
  40. Rodriguez-Arias, M., et al. Social defeat in adolescent mice increases vulnerability to alcohol consumption. Addict Biol. 21 (1), 87-97 (2016).
  41. Montagud-Romero, S., et al. Repeated social defeat and the rewarding effects of cocaine in adult and adolescent mice: Dopamine transcription factors, probdnf signaling pathways, and the trkb receptor in the mesolimbic system. Psychopharmacology. 234, 2063-2075 (2017).
  42. Wilkinson, M. B., et al. A novel role of the wnt-dishevelled-gsk3β signaling cascade in the mouse nucleus accumbens in a social defeat model of depression. J Neurosci. 31 (25), 9084-9092 (2011).
  43. Hyer, M., et al. Chronic adolescent stress causes sustained impairment of cognitive flexibility and hippocampal synaptic strength in female rats. Neurobiol Stress. 14, 100303 (2021).
  44. Bekhbat, M., et al. Chronic adolescent stress sex-specifically alters central and peripheral neuro-immune reactivity in rats. Brain Behav Immun. 76, 248-257 (2019).
  45. Pyter, L. M., Kelly, S. D., Harrell, C. S., Neigh, G. N. Sex differences in the effects of adolescent stress on adult brain inflammatory markers in rats. Brain Behav Immun. 30, 88-94 (2013).
  46. Dalsgaard, S., et al. Incidence rates and cumulative incidences of the full spectrum of diagnosed mental disorders in childhood and adolescence. JAMA psychiatry. 77 (2), 155-164 (2020).
  47. Pedersen, C. B., et al. A comprehensive nationwide study of the incidence rate and lifetime risk for treated mental disorders. JAMA psychiatry. 71 (5), 573-581 (2014).
  48. Heim, C., Shugart, M., Craighead, W. E., Nemeroff, C. B. Neurobiological and psychiatric consequences of child abuse and neglect. Dev Psychobiol. 52 (7), 671-690 (2010).
  49. Kessler, R. C., Petukhova, M., Sampson, N. A., Zaslavsky, A. M., Wittchen, H. U. Twelve-month and lifetime prevalence and lifetime morbid risk of anxiety and mood disorders in the united states. Int J Methods Psychiatr Res. 21 (3), 169-184 (2012).
  50. Boyd, A., et al. Gender differences in mental disorders and suicidality in europe: Results from a large cross-sectional population-based study. J Affect Disord. 173, 245-254 (2015).
  51. Bale, T. L., Epperson, C. N. Sex differences and stress across the lifespan. Nat Neurosci. 18 (10), 1413-1420 (2015).
  52. Hankin, B. L., Mermelstein, R., Roesch, L. Sex differences in adolescent depression: Stress exposure and reactivity models. Child Dev. 78 (1), 279-295 (2007).
  53. Kim, S., Colwell, S. R., Kata, A., Boyle, M. H., Georgiades, K. Cyberbullying victimization and adolescent mental health: Evidence of differential effects by sex and mental health problem type. J Youth Adolesc. 47, 661-672 (2018).
  54. Filipponi, C., Petrocchi, S., Camerini, A. L. Bullying and substance use in early adolescence: Investigating the longitudinal and reciprocal effects over 3 years using the random intercept cross-lagged panel model. Front Psychol. 11, 571943 (2020).
  55. Brody, G. H., Yu, T., Chen, E., Miller, G. E. Persistence of skin-deep resilience in african american adults. Health Psychol. 39 (10), 921 (2020).
  56. Rijlaarsdam, J., Cecil, C. A., Buil, J. M., Van Lier, P. A., Barker, E. D. Exposure to bullying and general psychopathology: A prospective, longitudinal study. Res Child Adolesc Psychopathol. 49, 727-736 (2021).
  57. Vassilev, P., et al. Unique effects of social defeat stress in adolescent male mice on the netrin-1/dcc pathway, prefrontal cortex dopamine and cognition. eNeuro. 8 (2), (2021).
  58. Vassilev, P., et al. Custom-built operant conditioning setup for calcium imaging and cognitive testing in freely moving mice. eNeuro. 9 (1), (2022).
  59. Pantoja-Urbán, A. H., et al. Gains and losses: Resilience to social defeat stress in adolescent female mice. Biol Psychiatry. 95 (1), 37-47 (2024).
  60. Torres-Berrío, A., et al. Dcc confers susceptibility to depression-like behaviors in humans and mice and is regulated by mir-218. Biol Psychiatry. 81 (4), 306-315 (2017).
  61. Ver Hoeve, E. S., Kelly, G., Luz, S., Ghanshani, S., Bhatnagar, S. Short-term and long-term effects of repeated social defeat during adolescence or adulthood in female rats. Neuroscience. 249, 63-73 (2013).

Tags

מילות מפתח: לחץ תבוסה חברתית עכברים מתבגרים C57BL/6 זכר ונקבה הימנעות חברתית מודל לחץ תבוסה חברתית מואצת (AcSD) התפתחות המוח תוצאות התנהגותיות
מודל לחץ תבוסה חברתית עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכרים ונקבות
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Pantoja-Urbán, A. H., Richer,… More

Pantoja-Urbán, A. H., Richer, S., Giroux, M., Nouel, D., Flores, C. Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL/6 Male and Female Mice. J. Vis. Exp. (205), e66455, doi:10.3791/66455 (2024).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter