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Neuroscience

किशोर C57BL/6 नर और मादा चूहों के लिए सामाजिक हार तनाव मॉडल

Published: March 15, 2024 doi: 10.3791/66455
Automatic Translation
1, 1, 2, 2, 2,3,4,5
1Integrated Program in Neuroscience, McGill University, 2Douglas Mental Health University Institute, McGill University, 3Department of Psychiatry, McGill University, 4Department of Neurology and Neurosurgery, Faculty of Medicine, McGill University, 5Ludmer Centre for Neuroinformatics & Mental Health, McGill University

Summary

हमने किशोर C57BL/6 चूहों के लिए एक त्वरित सामाजिक हार तनाव मॉडल विकसित किया, जो पुरुषों और महिलाओं दोनों में काम करता है और असतत किशोर अवधि के दौरान जोखिम की अनुमति देता है। इस मॉडल के लिए एक्सपोजर सामाजिक परिहार को प्रेरित करता है, लेकिन केवल पराजित नर और मादा चूहों के सबसेट में।

Abstract

किशोरावस्था में सामाजिक प्रतिकूलता प्रचलित है और मानसिक स्वास्थ्य प्रक्षेपवक्र को नकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकती है। चल रहे मस्तिष्क के विकास और व्यवहार परिणामों पर इसके प्रभावों को समझने के लिए किशोर पुरुष और महिला कृन्तकों में सामाजिक तनाव मॉडलिंग की आवश्यकता है। पुरानी सामाजिक हार तनाव प्रतिमान (सीएसडीएस) का व्यापक रूप से वयस्क C57BL/6 पुरुष चूहों में सामाजिक तनाव को मॉडल करने के लिए उपयोग किया गया है, जो एक वयस्क पुरुष कृंतक द्वारा अपने क्षेत्र पर आक्रमण करने वाले घुसपैठिए द्वारा प्रदर्शित आक्रामक व्यवहार का लाभ उठाता है। इस प्रतिमान का एक फायदा यह है कि यह पिछले हार सत्र के बाद सामाजिक व्यवहार 24 घंटे में अपने व्यक्तिगत मतभेदों के आधार पर लचीला और अतिसंवेदनशील समूहों में पराजित चूहों को वर्गीकृत करने की अनुमति देता है. किशोर C57BL/6 चूहों में इस मॉडल को लागू करना चुनौतीपूर्ण रहा है क्योंकि वयस्क या किशोर चूहे आमतौर पर शुरुआती किशोर नर या मादा चूहों पर हमला नहीं करते हैं और क्योंकि किशोरावस्था जीवन की एक छोटी अवधि है, जिसमें भेद्यता की विचारशील अस्थायी खिड़कियां शामिल हैं। किशोर नर और मादा चूहों के लिए उपयोग किए जाने वाले सीएसडीएस के त्वरित संस्करण को अनुकूलित करके इस सीमा को दूर किया गया था। प्रति दिन 2 शारीरिक हमले सत्रों के साथ यह 4-दिवसीय तनाव प्रतिमान आक्रामकता के लिए सीडी -1 माउस को प्राइम करने के लिए C57BL/6 पुरुष वयस्क का उपयोग करता है जैसे कि यह आसानी से पुरुष या महिला किशोर माउस पर हमला करता है। इस मॉडल को किशोर चूहों के लिए त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) कहा जाता था। एसीएसडी के लिए किशोर एक्सपोजर पुरुषों और महिलाओं दोनों में 24 घंटे बाद सामाजिक परिहार को प्रेरित करता है, लेकिन केवल पराजित चूहों के सबसेट में। यह भेद्यता लचीले और अतिसंवेदनशील समूहों के बीच सत्रों में हमलों की संख्या के अनुरूप होने के बावजूद होती है। किशोरावस्था के भीतर असतत अवधि के दौरान जोखिम की अनुमति देने के लिए एसीएसडी मॉडल काफी छोटा है, सामाजिक परिहार व्यवहार की उपस्थिति या अनुपस्थिति के अनुसार चूहों के अलगाव की अनुमति देता है, और किशोर सी 57 बीएल / 6 महिला चूहों में सामाजिक हार तनाव का अध्ययन करने के लिए उपलब्ध पहला मॉडल है।

Introduction

पुरानी सामाजिक हार तनाव प्रतिमान का व्यापक रूप से वयस्क प्रसवोत्तर दिन (पीएनडी) >65 पुरुष कृन्तकों में सामाजिक तनाव को मॉडल करने के लिए उपयोग किया जाता है। यह प्रतिमान एक वयस्क पुरुष कृंतक के प्राकृतिक आक्रामक व्यवहार पर आधारित है जब एक घुसपैठिया अपने क्षेत्र पर आक्रमण करता है। इस मॉडल का उपयोग चूहों, हैम्स्टर और चूहों 1,2,3,4,5,6,7,8,9 सहित विभिन्न प्रकार की कृंतक प्रजातियों में किया जाता है, और इसमें लगभग 10 दिनों तक चलने वाले शारीरिक आक्रामकता और मनोवैज्ञानिक तनाव का संयोजन होता है, जिसके दौरान एक घुसपैठिया कृंतक निवासी कृंतक से शारीरिक आक्रामकता के कुछ मिनट का प्रयोग करता है। दो कृन्तकों निवासी के घर पिंजरे में रहते हैं, एक विभक्त है कि संवेदी लेकिन नहीं शारीरिक संपर्क 7 की अनुमति देता हैद्वारा अलग. चूहों प्रयोगों में, सबसे अधिक इस्तेमाल किया निवासी / आक्रामक चूहों सेवानिवृत्त प्रजनकों स्विस सीडी -1 चूहों है, जो घुसपैठिए चूहों 6,7 के खिलाफ मजबूत क्षेत्रीय व्यवहार दिखाने रहे हैं. घुसपैठिए चूहों के लिए, सबसे अच्छा विशेषता तनाव इनब्रीड C57BL/6 तनाव 2,4,5 है। पराजित माउस को हमलावर की आदत को रोकने के लिए हर दिन एक नए हमलावर के संपर्क में आता है। नियंत्रण चूहों को प्रत्येक दिन एक अलग विशिष्ट के साथ रखा जाता है। पिछले हार सत्र के बाद 24 घंटे में, प्रयोगात्मक चूहों वे अनुपस्थिति (कोई लक्ष्य), या एक उपन्यास सीडी -1 माउस (लक्ष्य) की उपस्थिति में एक खुले मैदान का पता लगाने कर सकते हैं जिसमें एक सामाजिक संपर्क परीक्षण (एसआईटी) में परीक्षण कर रहे हैं. नियंत्रण चूहों कार्य के गैर लक्ष्य भाग बनाम लक्ष्य के साथ बातचीत क्षेत्र में अधिक समय बिताने. पराजित चूहों को अतिसंवेदनशील (अनुपात < 1) या लचीला (अनुपात >1) के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, एक सामाजिक संपर्क अनुपात के अनुसार (हमलावर के साथ बातचीत क्षेत्र में बिताया गया समय/हमलावर अनुपस्थित के साथ बातचीत क्षेत्र में बिताया गया समय)। यह प्रक्रिया तनाव के जवाब में व्यक्तिगत मतभेदों का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण प्रदान करती है।

हाल के वर्षों तक, पुरानी सामाजिक हार तनाव मॉडल ज्यादातर वयस्क पुरुष चूहों में इस्तेमाल किया गया है क्योंकि उच्चारण पुरुष प्रभुत्व पदानुक्रम पुरुषों के खिलाफ लड़ शामिल है, लेकिन महिलाओं 6,7 के खिलाफ नहीं. इसके अलावा, नर कृंतक आमतौर पर मादाओं पर हमला नहीं करते हैं; इसके बजाय, वे संभोग व्यवहार में संलग्न हैं10. इन बाधाओं के बावजूद, वयस्क महिला चूहों के लिए पुरानी सामाजिक हार तनाव प्रतिमान को अनुकूलित करने के लिए विभिन्न रणनीतियों का विकास किया गया है। उदाहरण के लिए, सामाजिक हार के कैलिफोर्निया माउस मॉडल दोनों लिंगों से इस मोनोग्रामस प्रजातियों की प्राकृतिक आक्रामकता पर आधारित है जब उनके क्षेत्र 9,11 का बचाव. अन्य दृष्टिकोण सीडी-1 चूहों के आक्रामक व्यवहार को प्रेरित करने पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जो उनके वेंट्रोमेडियल हाइपोथैलेमस को लगातार आक्रामक व्यवहार10,12 करने के लिए उत्तेजित करते हैं, या सीडी-1 हमलावरों13 से हमले प्राप्त करने के लिए प्रयोगात्मक वयस्क महिला चूहों में पुरुष मूत्र लागू करके। सीडी-1 चूहों की यह बढ़ी हुई और लगातार आक्रामकता प्रयोगात्मक घुसपैठिए माउस केलिए बातचीत 6 की लंबाई के दौरान हमलावर द्वारा बार-बार हमलों के प्रति अधीनता के स्पष्ट व्यवहार संकेत दिखाने के लिए महत्वपूर्ण है।

किशोर C57BL/6mice में उपयोग करने के लिए पुरानी सामाजिक हार मॉडल को अपनाना
किशोरावस्था पर्याप्त मनोसामाजिक परिपक्वता द्वारा चिह्नित अवधि है, जो मस्तिष्क के सूक्ष्म और स्थूल वास्तुकला में परिवर्तन के समानांतर प्रकट होती है, विशेष रूप से प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में। दोनों मनुष्यों और कृन्तकों में, वहाँ विशिष्ट शुरुआत और किशोर अवधि14,15 के अंत के बारे में थोड़ा आम सहमति है. इसके अलावा, चल रहे मस्तिष्क और संज्ञानात्मक विकास 16,17,18,19के अनुभव-प्रेरित व्यवधान के लिए किशोरावस्था के भीतर भेद्यता की महत्वपूर्ण खिड़कियां हैं। यौवन और किशोरावस्था एक ही समय में होती है, लेकिन ये शब्द पर्यायवाची नहीं हैं। यौवन यौन परिपक्वता की शुरुआत का प्रतीक है, जबकि किशोरावस्था एक व्यापक चरण का प्रतिनिधित्व करती है जो एक किशोर अवस्था से स्वतंत्रता20 प्राप्त करने के लिए क्रमिक बदलाव की विशेषता है। विभिन्न समूहों ने सुझाव दिया है कि चूहों में किशोरावस्था वीनिंग (पीएनडी 21) से वयस्कता (पीएनडी 60)21तक फैली हुई है। विशेष रूप से, प्रारंभिक किशोरावस्था को पहले और दूसरे सप्ताह के बाद (पीएनडी 21-34) और मध्य-किशोरावस्था को पीएनडी 35-48 अवधि के रूप में संदर्भित किया जा सकता है। इन श्रेणियों में उदाहरण के लिए डोपामाइन प्रणाली 22,23,24 के विकास, न्यूरोनल नेटवर्क 17,25,26,27 के विकास पर दवा के प्रभाव की भेद्यता और 16,20,28,29,30 के बारे में असतत विकासात्मक अवधि शामिल हैंका उपयोग कर सकते हैं

सामाजिक हार प्रोटोकॉल के लिए निवासी माउस से लड़ने का व्यवहार आवश्यक है। हालांकि, मादा चूहों के साथ, नर आमतौर पर शुरुआती किशोर चूहों के साथ आक्रामक बातचीत में संलग्न नहीं होते हैं, संभवतः क्योंकि वे उन्हें खतरे के रूप में नहीं देखते हैं। किशोर C57BL/6 चूहों में पुरानी सामाजिक हार के प्रभावों की खोज करने वाले अधिकांश अध्ययन मध्य-किशोर अवधि 31,32,33,34,35के दौरान किए गए हैं; दूसरों किशोर जोखिम36,37 के प्रसवोत्तर दिन निर्दिष्ट नहीं है, या जल्दी वयस्कता38 के लिए हार के लिए दिनों का विस्तार या संवेदी संपर्क39 की अनुमति नहीं है; किशोर चूहों पर अन्य अध्ययन विभिन्न उपभेदों40,41का उपयोग करें. किशोर पुरुष चूहों में पुरानी सामाजिक हार तनाव का उपयोग करके इन अध्ययनों की विशेषताओं को तालिका 1में संक्षेप में प्रस्तुत किया गया है।

हमारा शोध समूह C57BL/6 चूहों में प्रारंभिक किशोरावस्था सहित जोखिम की विशिष्ट किशोर खिड़कियों को लक्षित करने में रुचि रखता है। विभिन्न किशोर अवधियों की छोटी अवधि के कारण, पुरानी सामाजिक हार तनाव प्रतिमान के त्वरित संस्करण का एक संशोधित संस्करण42 डिजाइन किया गया था। इस मॉडल को किशोर चूहों के लिए त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) कहा जाता था। पिछले काम से पता चलता है कि चूहों 8,26,43,44,45 में किशोरावस्था में सामाजिक तनाव के प्रति संवेदनशीलता में महत्वपूर्ण सेक्स मतभेद हैं, साथ ही मनुष्यों में मानसिक स्वास्थ्य प्रक्षेपवक्र पर सामाजिक तनाव के हानिकारक प्रभावमें 46,47,48,49,50,51,52, 53,54,55,56. एसीएसडी मॉडल किशोर महिला चूहों के लिए भी प्रभावी ढंग से काम करता है, जिससे उन्हें संभावित सेक्स-विशिष्ट परिणामों की जांच करने के साथ-साथ न्यूरोबायोलॉजिकल नींव का पता लगाने की अनुमति मिलती है।

तालिका 1: किशोर पुरुष चूहों में सामाजिक हार तनाव प्रतिमानों का उपयोग करके अध्ययन। तनाव और प्रजातियां: कैलिफोर्निया माउस: पेरोमिस्कस कैलिफोर्निकस। C57BL/6: Mus musculus black 6 inbred माउस स्ट्रेन। C57BL/6J: M. musculus black 6 inbred माउस मॉडल जैक्सन की प्रयोगशालाओं द्वारा प्रदान किया गया। सीडी -1: स्विस से एम। आईसीआर: एम. मस्कुलस इंस्टीट्यूट ऑफ कैंसर रिसर्च ने अल्बिनो माउस स्ट्रेन को पछाड़ दिया। OF1: M. musculus Oncins France 1 outbred albino माउस स्ट्रेन।
संक्षिप्ताक्षर: wk = सप्ताह; पीएनडी = प्रसवोत्तर दिन; रेस = लचीला; sus = अतिसंवेदनशील; अनसस = असंवेदनशील। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Protocol

प्रायोगिक प्रक्रियाओं पशु देखभाल के कनाडा परिषद के दिशा निर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया और मैकगिल विश्वविद्यालय और डगलस अस्पताल पशु देखभाल समिति (पशु प्रयोग अनुमोदन संख्या: 2005-5084) द्वारा अनुमोदित. सभी चूहों को एक तापमान- और आर्द्रता नियंत्रित (21-22 डिग्री सेल्सियस; 60%) कॉलोनी कमरे में और डगलस मानसिक स्वास्थ्य विश्वविद्यालय संस्थान के न्यूरोफेनोटाइपिंग सेंटर में 12 घंटे प्रकाश-अंधेरे चक्र (8:00 घंटे पर प्रकाश) पर रखा गया था। चूहों के पास प्रयोगों के दौरान भोजन और पानी तक पहुंच थी। चूहे प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत के लिए बेतरतीब ढंग से सौंपा गया. प्रायोगिक जानवरों को एक वाणिज्यिक स्रोत से प्राप्त किया गया था ( सामग्री की तालिकादेखें)। तालिका 2 प्रत्येक प्रयोगात्मक चरण के लिए पशु की विशेषताओं को सारांशित करता है। कुल मिलाकर, 489 प्रयोगात्मक समूहों में 489 किशोर C57BL/6J चूहों (259 नर; 230 मादा) का उपयोग किया गया था।

तालिका 2: प्रत्येक प्रयोगात्मक चरण के लिए पशु विषयों. †यदि ये जानवर गंभीर रूप से घायल नहीं हैं, तो उन्हें प्राइमिंग के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। ‡यदि ये जानवर गंभीर रूप से घायल नहीं होते हैं, तो उन्हें एसीएसडी के दौरान प्राइमिंग के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है, डगलस मानसिक स्वास्थ्य विश्वविद्यालय संस्थान के न्यूरोफेनोटाइपिंग सेंटर। पुरुषों के साथ प्रयोगों के लिए, #महिलाओं के साथ प्रयोगों के लिए, यदि हार मिश्रित है, तो प्राइमिंग के लिए महिलाओं का उपयोग करें। ††एसीएसडी के लिए उपयोग नहीं किया जाना चाहिए। संक्षिप्ताक्षर: AcSD = त्वरित सामाजिक हार तनाव; पीएनडी = प्रसवोत्तर दिन कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

1. अनुकूलन

नोट: यह चरण न्यूनतम 1 सप्ताह तक चलना चाहिए।

  1. 4 महीने से अधिक उम्र के पुरुष सीडी -1 सेवानिवृत्त ब्रीडर चूहों ( सामग्री की तालिका) खरीदें और किशोर सी 57 बीएल / 6 जे चूहों की मात्रा से दोगुना (यानी, अगर 10 चूहों को तनाव के संपर्क में लाया जाएगा, तो 20 सीडी -1 चूहों की खरीद करें)।
    नोट: सीडी -1 चूहों की इस मात्रा को प्राप्त करने की सिफारिश की है क्योंकि सीडी -1 चूहों का सिर्फ एक छोटा सा अनुपात किशोर चूहों के प्रति आक्रामक व्यवहार दिखाते हैं।
  2. सीडी -1 पुरुष चूहों स्क्रीनिंग और भड़काना से पहले 1 सप्ताह के लिए भोजन और पानी विज्ञापन libitum के साथ अपने घर पिंजरे में नई सुविधा के लिए अभ्यस्त करते हैं.
  3. स्क्रीनिंग और प्राइमिंग सत्रों के लिए पीएनडी >65 (वयस्क) और पीएनडी 25 ± 3 (किशोर) (तालिका 2) में C57BL/6 का उपयोग करें। प्राइमिंग के प्रति दिन प्रत्येक आयु के 4 C57BL/6 चूहों को प्राप्त करें (यानी, प्राइमिंग के 3 दिनों के लिए, चोटों के जोखिम को कम करने के लिए 12 PND >65 और 12 PND 25 ± 3) प्राप्त करें क्योंकि इन जानवरों को स्क्रीनिंग और प्राइमिंग प्रक्रिया के लिए बार-बार नियोजित किया जाएगा।

2. सीडी -1 स्क्रीनिंग और प्राइमिंग

नोट: इस चरण की अवधि स्क्रीनिंग के 3 दिन (महिला चूहों के लिए 1 दिन) और भड़काना के 3-4 दिन (यह महिला चूहों के लिए और सीडी -1 चूहों आक्रामक व्यवहार के आधार पर बढ़ सकता है।

  1. नीचे वर्णित सीडी -1 के हमलों को पंजीकृत करने के लिए हमले की परिचालन परिभाषा का उपयोग करें।
    1. एक हमले को तब परिभाषित किया जाता है जब CD-1 माउस C57BL/6J माउस को काटता है, और C57BL/6J माउस काटने की प्रतिक्रिया में दूर चला जाता है। एक काटने को तब परिभाषित किया जाता है जब सीडी -1 माउस सी 57 बीएल / 6 जे माउस के शरीर के किसी भी हिस्से पर अपने दांत रखता है। दूर जाने को तब परिभाषित किया जाता है जब C57BL/6J माउस अपने दोनों हिंद पंजे को उस स्थिति से हिलाता है जिसमें वे CD-1 से लगे होने से पहले थे।
    2. सुनिश्चित करें कि अलग-अलग हमलों के बीच कम से कम ~ 2 एस का अंतर है। यदि एक से अधिक काटने <2 सेकंड अलग होते हैं, तो एक हमले के रूप में गिना जाता है।
    3. यदि सीडी-1 माउस बिना ब्रेक (< ~ 2 एस अलग) के उत्तराधिकार में एक से अधिक बार काटता है, तो धीरे से प्लास्टिक शासक के साथ जानवरों को अलग करें। यदि सीडी -1 माउस काटता है और जाने नहीं देता है, तो धीरे से जानवरों को अलग करें। यदि C57BL/6J माउस एक कोने में फंस जाता है या CD-1 माउस द्वारा नीचे पिन किया जाता है और काटने की प्रतिक्रिया में दूर नहीं जा सकता है, तो जानवरों को एक शासक के साथ धीरे से अलग करें। इन सभी को एक हमले (अलगाव तक) के रूप में गिनें।
  2. जांच
    1. सभी जानवरों से निपटने के लिए नाइट्राइल परीक्षा दस्ताने का प्रयोग करें और इत्र या सुगंध के उपयोग से बचें।
    2. सीडी -1 चूहों घर-पिंजरे में घुसपैठियों (पीएनडी >65) के रूप में केवल वयस्क C57BL/6 पुरुष चूहों के साथ स्क्रीनिंग के1 दिन प्रदर्शन करें। हमेशा एक नया प्रयोग करने से पहले सीडी -1 चूहों स्क्रीन.
    3. 3 मिनट के लिए सीडी -1 पुरुष माउस के घर-पिंजरे में एक वयस्क पुरुष C57BL/6 माउस PND >65 का परिचय दें। पहली आक्रामकता के लिए विलंबता पंजीकृत करें और कितने आक्रामकता का प्रदर्शन किया जाता है ( पूरक तालिका 1 देखें)।
    4. स्क्रीनिंग के 2वें से अंतिम दिन तक, 57 मिनट के लिए एक वयस्क पुरुष C6BL/6 PND>1 का परिचय दें (यदि CD-30 बहुत आक्रामक है तो 1 s की सीमा) और फिर इसे 57 मिनट के लिए एक किशोर C57BL/6 PND 25 ± 3 के साथ स्वैप करें।
      नोट: किशोर चूहों के साथ स्क्रीनिंग करना महत्वपूर्ण है क्योंकि वयस्क C57BL/6 नर माउस पर हमला करने वाले सभी चूहे किशोर C57BL/6 पर हमला नहीं करेंगे। वास्तव में, सीडी -1 चूहे जो किशोर चूहों पर हमला करते हैं, वे हमेशा वयस्क सी 57 बीएल /
    5. यदि प्रयोग महिला चूहों के प्रति आक्रामकता के लिए है, तो किशोर मादा चूहों के साथ स्क्रीनिंग और प्राइमिंग करें, भले ही प्रयोगात्मक चूहों में दोनों लिंग शामिल हों।
    6. पहली आक्रामकता, हमलों की संख्या और सभी C57BL/6 चूहों द्वारा प्राप्त घावों के लिए विलंबता पंजीकृत करें ( पूरक तालिका 2 देखें)।
    7. किसी भी प्रकार की बातचीत को पंजीकृत करें: पीछा करना, बढ़ते व्यवहार, सूँघना, संवारना या काटना। यदि CD-1 किशोर C57BL/6 चूहों के पास नहीं जाता है तो पंजीकरण करें; यदि यह व्यवहार 2 दिनों के लिए दोहराया जाता है, तो सीडी -1 को प्राइमिंग में शामिल न करें।
    8. भड़काना चरण के लिए, सभी सीडी -1 चूहों का चयन करें जो किशोर C57BL/6 का पीछा करने, बढ़ते व्यवहार, सूँघने, अनुसरण करने, संवारने या काटने जैसे व्यवहार प्रदर्शित करते हैं।
    9. गैर चयनित सीडी -1 चूहों रखें और सामाजिक संपर्क परीक्षण (एसआईटी) के लिए उनका इस्तेमाल करते हैं.
      नोट: समय के साथ क्षेत्रीय व्यवहार बढ़ता है; इसलिए, गैर चयनित सीडी -1 चूहों अगले प्रयोग में किशोर चूहों की ओर आक्रामक हो सकता है.
  3. भड़काना CD-1 आक्रामक व्यवहार
    1. घर सीडी -1 भड़काना के अंतिम दिन तक अपने घर पिंजरे में भड़काना के लिए चयनित चूहों.
    2. एक वयस्क पुरुष C57BL/6J माउस PND >65 को 30 s के लिए CD-1 होम-केज में पेश करें और फिर इसे 5 मिनट के लिए एक किशोर C57BL/6 PND 25 ± 3 माउस से स्वैप करें।
    3. पहली आक्रामकता, हमलों की संख्या और किसी भी बातचीत के लिए विलंबता पंजीकृत करें ( पूरक तालिका 3 देखें)।
    4. प्राइमिंग 2x एक दिन के लिए 3-4 दिनों के लिए एक ही समय में हार निर्धारित कर रहे हैं (9:00 am और 2:00 pm).
      नोट: नहीं सभी सीडी -1 चूहों पहले दिनों के दौरान किशोर चूहों पर हमला करेंगे, खासकर अगर भड़काना महिला चूहों की ओर है. भड़काना के लिए दिनों की संख्या में वृद्धि या सीडी -1 चूहों द्वारा दिखाए गए आक्रामक व्यवहार के आधार पर कमी कर सकते हैं.
    5. भड़काना दिनों की संख्या को कम करने के लिए, सीडी -1 चूहों का पुन: उपयोग करें जो पुरुष चूहों के साथ एक पूर्व सामाजिक हार प्रयोग के माध्यम से किया गया है। सीडी -1 चूहों वृद्धि हुई आक्रामकता नहीं दिखा है, मापदंड तक पहुँचने तक भड़काना के लिए दिनों का विस्तार.
    6. भड़काना के लिए दिनों में कमी अगर सीडी -1 चूहों अत्यधिक आक्रामक व्यवहार दिखाने (C57BL/6 चूहों अत्यधिक घायल दिखाने) सामाजिक हार के दौरान गंभीर चोटों को रोकने के लिए.
    7. प्रयोग के अगले चरण के लिए, सीडी-1 चूहों है कि लगातार 2 दिनों के लिए कम से कम 10x (पुरुषों) या 5x (महिलाओं) किशोर चूहों पर हमला.

3. एसीएसडी प्रोटोकॉल

नोट: इस चरण में आदत के 3 दिन और एसीएसडी के संपर्क में 4 दिन शामिल हैं।

  1. आदत
    1. सामाजिक हार (चित्रा 1 ए-एफ) के लिए चूहे पिंजरों की स्थापना करें। उपयुक्त ऐक्रेलिक ग्लास डिवाइडर (चित्रा 1 बी, डी; सामग्री की तालिका) का उपयोग करके चूहे के पिंजरों को 2 डिब्बों में विभाजित करें।
    2. पिंजरे के दोनों किनारों पर हार्ड वुडचिप बिस्तर जोड़ें, बिस्तर सामग्री (चित्रा 1 डी) के रूप में प्रति पक्ष एक कपास वर्ग जोड़ें। सुनिश्चित करें कि वायर टॉप बाइंडर क्लिप(चित्रा 1ई)के साथ सुरक्षित है। सुनिश्चित करें कि चूहे का पिंजरा सुरक्षात्मक कपास (चित्रा 1 एफ) के बिना कवर ढक्कन के साथ कवर किया गया है।
    3. पिंजरे के एक तरफ प्रति पिंजरे एक सीडी -1 माउस रखें। प्रत्येक माउस की आसान पहचान के लिए पिंजरे के बाहर पर एक टैग रखें.
    4. एसीएसडी प्रोटोकॉल शुरू होने से 2 या 3 दिन पहले सामाजिक हार तंत्र (चित्रा 1 एफ) में चयनित सीडी -1 चूहों को घर दें (सीडी -1 क्षेत्रीय व्यवहार को बढ़ाने के लिए)।
    5. प्रयोग से 1 दिन पहले एक भड़काना सत्र प्रदर्शन; आक्रामकता को लगातार बनाए रखने के लिए यह महत्वपूर्ण है।
  2. हार सत्र
    1. 4 दिनों के लिए प्रति दिन 2 सत्र (पहला सत्र: सुबह 9 बजे, दूसरा सत्र: दोपहर 2 बजे) करें, कुल 8 सत्र। यह सुनिश्चित करने के लिए एक शेड्यूल बनाएं कि हमलावर प्रत्येक सत्र के लिए अलग होगा ( पूरक तालिका 4 और पूरक तालिका 5 देखें)।
    2. पिंजरे के सीडी -1 पक्ष में पेश करने से पहले सी 57 बीएल / 6 किशोर माउस का वजन करें। हार पिंजरे के सीडी -1 पक्ष में 30 एस के लिए एक वयस्क पुरुष सी 57 बीएल / 6 माउस >65 का परिचय दें और फिर इसे 10 मिनट लंबी हार एपिसोड या प्रति सत्र अधिकतम 10 हमलों के लिए एक किशोर सी 57 बीएल / 6 पीएनडी 24-28 माउस के साथ स्वैप करें।
    3. एक प्लास्टिक शासक के साथ प्रत्येक हमले के बाद जानवरों को अलग. हार के हर सत्र के बाद, चोटों की जांच करें, और दर्द निवारक क्रीम के साथ उनका इलाज करें। चोटों की संख्या दर्ज करें।
    4. किशोर C57BL/6J माउस को अगले सत्र तक किसी अपरिचित हमलावर के बगल में मुफ्त डिब्बे में रखें। प्रत्येक सत्र में एक अलग हमलावर के साथ प्रक्रिया को दोहराएं।
    5. प्रयोगात्मक और आक्रामक चूहों है कि पिछले सत्र युग्मित नहीं थे के साथ सत्र शुरू. प्राइमिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले वयस्क C57BL/6J पुरुष चूहों की चोटों की निगरानी करें ( पूरक तालिका 6 देखें)।
  3. पशु कल्याण और मानवीय समापन बिंदुओं के लिए नीचे दी गई सिफारिशों का पालन करें।
    1. सामाजिक पराजयों के लिए संबंधित संस्थागत समीक्षा बोर्ड की मानक संचालन प्रक्रिया का पालन करें और निरंतर पशु चिकित्सा मूल्यांकन सुनिश्चित करें।
    2. जानवरों की पीड़ा और मृत्यु से बचने के लिए पूरे अध्ययन में चूहों के स्वास्थ्य की निगरानी करें।
    3. सत्यापित करें कि छिद्रित विभक्त सही ढंग से चूहों को दूसरे डिब्बे को पार करने से रोकने के लिए सेट किया गया है।
    4. पशु चिकित्सा देखभाल कर्मचारियों को सूचित करें जब किसी जानवर के पास उचित निगरानी के लिए घाव हो और घाव पूरी तरह से ठीक होने तक दैनिक दर्द निवारक क्रीम लागू करें।
    5. यदि कोई चोट बिगड़ जाती है (घाव आकार में बढ़ जाते हैं), तो अगले सत्र में हमलों को 5 तक सीमित करें जिससे वसूली हो सके। गंभीर चोटों के लिए जाँच करें। गंभीर चोटों को 1 सेमी > कुल घावों के रूप में परिभाषित किया गया है।
    6. प्रारंभिक शरीर के वजन से अपने वजन में 15% -20% की कमी पेश करने वाले जानवरों को तुरंत हटा दें और इच्छामृत्यु दें; लोकोमोटर गतिविधि और बिगड़ा हुआ संवारने में कमी/कमी; 1 सेमी > घावों के साथ चूहे; कटे हुए लिंग, या forelimbs की सूजन के साथ काटने के निशान।
      टिप्पणी प्राथमिक इच्छामृत्यु आइसोफ्लुरेन/सीओ2 गैस चैम्बरों के माध्यम से की जाती है जिसके बाद ग्रीवा विस्थापन द्वारा द्वितीयक इच्छामृत्यु की जाती है।
  4. चूहों को नियंत्रित करें
    1. 4 दिनों के लिए प्रति दिन 2 सत्र (पहला सत्र: सुबह 9 बजे, दूसरा सत्र: दोपहर 2 बजे) करें, कुल 8 सत्र। यह सुनिश्चित करने के लिए एक शेड्यूल बनाएं कि नियंत्रण चूहों को पिंजरे को एक अलग C57BL/6J प्रत्येक सत्र के साथ साझा करें ( अनुपूरक तालिका 7 और पूरक तालिका 8 देखें)।
      नोट: नियंत्रण चूहों एक हमलावर के संपर्क में नहीं हैं. हर हार सत्र में एक उपन्यास सीडी -1 माउस के परिचय की नकल करने के लिए, नियंत्रण चूहों को हर सत्र में एक नए समान-लिंग और समान-आयु विशिष्ट (गैर-लिटरमेट) के साथ जोड़ा जाता है।
    2. एसीएसडी चूहों से एक अलग कमरे में सामाजिक हार तंत्र (चित्रा 1) में नियंत्रण चूहों को घर दें।
    3. पिंजरे प्रति दो नियंत्रण चूहों रखें, पिंजरे के प्रत्येक तरफ एक. चूहों को पिंजरे के एक अलग पक्ष या अलग-अलग पिंजरे में पूरी तरह से रखें, ताकि वे गंध को पहचान न सकें। प्रत्येक सत्र नियंत्रण चूहों घुमाएँ.

Figure 1
चित्रा 1: किशोर चूहों के लिए त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) के लिए उपकरण। (ए) बाएं से दाएं, सलाखों के बीच 0.6 सेमी जुदाई के साथ युग्मित स्टील-वायर टॉप, 0.6 सेमी के छिद्रों व्यास के साथ स्पष्ट छिद्रित पॉली कार्बोनेट डिवाइडर, तार के शीर्ष को सुरक्षित करने के लिए बांधने की मशीन क्लिप, कवर ढक्कन के साथ स्पष्ट चूहा पिंजरे (कपास सुरक्षात्मक परत के बिना)। (बी) ऊपर: वयस्कों (बाएं) में पुरानी सामाजिक हार के लिए पॉली कार्बोनेट डिवाइडर और किशोरों (दाएं) में एसीएसडी के बीच तुलना; नीचे: किशोर चूहों के लिए पॉली कार्बोनेट डिवाइडर तक बंद। (सी) ऊपर: वयस्कों (बाएं) में पुरानी सामाजिक हार के लिए स्टील-वायर टॉप और किशोरों (दाएं) में एसीएसडी के बीच तुलना; नीचे: स्टील-वायर टॉप का क्लोज-अप। (डीएफ) सामाजिक हार तंत्र का संयोजन। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

4. सामाजिक संपर्क परीक्षण

  1. एसीएसडी का पालन करते हुए एसआईटी करें जैसा कि पहले 57,58,59 वर्णित है।
    1. एसीएसडी के अंतिम सत्र के बाद एसआईटी 24 घंटे करें। सुबह 9 बजे से शाम 4 बजे के बीच लाल बत्ती की स्थिति (पीली रोशनी की स्थिति में नहीं) के तहत एसआईटी का प्रदर्शन करें।
    2. मुख्य वर्ग-क्षेत्र और ओवरहेड वीडियो कैमरा सेट करें ( सामग्री की तालिकादेखें)। मुख्य क्षेत्र को 3 क्षेत्रों में विभाजित किया गया है: सामाजिक संपर्क क्षेत्र (SIZ), कोने और केंद्र; इन क्षेत्रों को एक काली रेखा (एक काले स्थायी मार्कर का उपयोग करें) के साथ क्षेत्र में चिह्नित किया जाना चाहिए। प्रत्येक क्षेत्र के लिए निम्न आयामों और मापदंड का उपयोग करें.
      1. सुनिश्चित करें कि SIZ 14 सेमी x 9 सेमी का वर्ग क्षेत्र है, जो बाड़े को घेरता है। कोने बाड़े के विपरीत दीवार के कोनों में छोटे, चौकोर क्षेत्र (9 सेमी x 9 सेमी) हैं और एसआईजेड से सबसे दूर बिंदु का प्रतिनिधित्व करते हैं। केंद्र एसआईजेड और कोनों के बीच का क्षेत्र है।
    3. एक सफाई हाइड्रोजन पेरोक्सीडेज समाधान के साथ क्षेत्र और बाड़ों को साफ करें।
    4. विश्लेषण के लिए फर्श पर प्रत्येक जानवर के लिए पहचान टैग रखें। ऑफ़लाइन विश्लेषण के लिए सभी पशु व्यवहार रिकॉर्ड करें।
  2. आधारभूत अन्वेषण का निर्धारण करने के लिए पहला सत्र
    1. अखाड़े की दीवारों में से एक के खिलाफ एक खाली तार जाल बाड़े रखें। प्रयोगात्मक (पराजित या नियंत्रण) किशोर C57BL/6 माउस को अखाड़े के बीच में रखें। यह 2.5 मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से क्षेत्र का पता लगाने के लिए अनुमति दें. माउस को पुनः प्राप्त करें।
    2. एक सफाई हाइड्रोजन पेरोक्सीडेज समाधान के साथ क्षेत्र और बाड़ों को साफ करें।
  3. सामाजिक मेलजोल के लिए दूसरा सत्र
    1. वायर मेष बाड़े के अंदर एक अपरिचित सीडी -1 माउस रखें। बाड़े को पिछले सत्र के समान स्थान पर रखें।
    2. उसी किशोर C57BL/6 माउस को अखाड़े में फिर से पेश करें। यह 2.5 मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से क्षेत्र का पता लगाने के लिए अनुमति दें. चूहों को पुनः प्राप्त करें।
    3. एक सफाई हाइड्रोजन पेरोक्सीडेज समाधान के साथ क्षेत्र और बाड़ों को साफ करें।
    4. एक counterbalanced क्रम में सभी किशोर C57BL/6 चूहों (जोर दिया और नियंत्रण चूहों) के लिए प्रक्रिया दोहराएँ.
    5. तनाव और पूर्वाग्रह से निपटने के लिए एसआईटी के लिए एक से अधिक सीडी -1 माउस का उपयोग करें (उदाहरण के लिए, 30 सी 57 बीएल / 6 चूहों के एक समूह के लिए, 4 सीडी -1 चूहों का उपयोग करें)। किशोर चूहों के बीच उन्हें संतुलित करें।
      नोट: यह परीक्षण एक सामाजिक लक्ष्य की ओर प्रयोगात्मक चूहों के दृष्टिकोण और / या परिहार व्यवहार को मापता है, जैसा कि पहले कृष्णन5 और गोल्डन7 द्वारा वर्णित है।
  4. विश्लेषण
    1. परीक्षण के दोनों सत्रों के दौरान इंटरैक्शन ज़ोन और कोनों में बिताए गए समय (ओं) को रिकॉर्ड करें।
    2. सीडी -1 हमलावर के साथ बातचीत क्षेत्र में बिताए गए समय के रूप में सामाजिक संपर्क अनुपात की गणना सीडी -1 हमलावर अनुपस्थित के साथ बातचीत क्षेत्र में बिताए समय से विभाजित करें।
    3. अतिसंवेदनशील के रूप में 1.00 < अनुपात और लचीला के रूप में 1.00 ≥ अनुपात के साथ तनावग्रस्त चूहों को वर्गीकृत करें।
    4. जानवरों है कि पहले सत्र के दौरान क्षेत्र का पता लगाने (यानी, निर्दिष्ट क्षेत्रों में से किसी में 0 एस खर्च) हरकत गतिविधि में मतभेद को नियंत्रित करने के लिए सभी विश्लेषण से बाहर करें.
    5. गैर-प्रतिनिधि लचीला जानवरों को रोकने के लिए सभी विश्लेषणों से ≥4 सामाजिक हार सत्रों में 0 हमले प्राप्त करने वाले सभी जानवरों को बाहर करें।
    6. चूहों (अतिसंवेदनशील नहीं) को छोड़ दें जो यह सुनिश्चित करने के लिए इंटरैक्शन ज़ोन के अंदर कम से कम 61 एस खर्च नहीं करते हैं कि उच्च सामाजिक संपर्क अनुपात सामाजिक लक्ष्य में वास्तविक रुचि को दर्शाते हैं।
    7. बाहरी बातचीत अनुपात स्कोर के साथ चूहों को बाहर करें.

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Representative Results

किशोर C57BL/6 पुरुष चूहों (PND 21) में क्रोनिक सोशल हार तनाव मॉडल का उपयोग करके कुल चार अलग-अलग प्रयोग किए गए। हालांकि, इस मॉडल ने प्रारंभिक किशोर C57BL/6 चूहों में इसके उपयोग के लिए महत्वपूर्ण सीमाएं प्रस्तुत कीं।

किशोर C57BL/6 चूहों के लिए आवश्यक उपकरण संशोधन
पहली सीमा यह थी कि सामाजिक हार तंत्र के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरण वयस्क चूहों के लिए डिज़ाइन किए गए थे। उनके आकार के कारण, पीएनडी 57 पर किशोर C6BL/21 चूहे डिवाइडर के छिद्रों से आक्रामक पक्ष तक गुजरने में सक्षम थे। इसने संवेदी संपर्क की अवधि को बाधित किया। इसके अतिरिक्त, किशोर चूहे स्टील-वायर टॉप की सलाखों से बचने में सक्षम थे। इसलिए, उपकरण चूहों के भागने (चित्रा 1) को रोकने के लिए संशोधित किया गया था. छिद्रों का व्यास 1.1 सेमी से 0.6 सेमी(चित्रा 1बी)में बदल दिया गया था, और स्टील-वायर टॉप को एक से बदल दिया गया था जिसमें सलाखों के बीच 1.1 सेमी पृथक्करण था, जिसमें 0.6 सेमी पृथक्करण(चित्रा 1सी)के साथ एक था। इसके अतिरिक्त, शीर्ष क्लिप के साथ सुरक्षित किया गया था, और चूहे के पिंजरों को सुरक्षात्मक कपास के बिना प्लास्टिक कवर के साथ भी कवर किया गया था। वुडचिप बिस्तर भी किशोर चूहों (चित्रा 1 डी-एफ) के लिए एक उपयुक्त स्तर पर सेट किया गया था।

एसीएसडी मॉडल को सुसंगत, आक्रामक मुकाबलों को सुनिश्चित करने के लिए वयस्क पुरुष सीडी -1 चूहों की प्राइमिंग की आवश्यकता होती है
दूसरी और अधिक महत्वपूर्ण सीमा किशोर चूहों की ओर सीडी -1 चूहों की शारीरिक आक्रामकता में स्थिरता की कमी थी। पुरानी सामाजिक हार सत्रों के दौरान, आक्रामकता 10 मिनट के सत्र के दौरान शून्य आक्रामक हमलों से एक या दो काटने के लिए भिन्न होती है जो किशोर चूहों के छोटे आकार के कारण घातक थे। हालांकि, अगर सीडी -1 चूहों एक से अधिक प्रयोग के लिए इस्तेमाल किया गया, हमलों की संख्या में स्थिरता में वृद्धि हुई.

चित्रा 2 बी प्रत्येक पुरानी सामाजिक हार प्रयोगात्मक पलटन (पी 0, ए 0, ए 1, और ए 2) के लिए दिन के अनुसार हमलों की संख्या से पता चलता है. दिन और पलटन (चित्रा 2बी, दो-तरफा दोहराया उपायों एनोवा: एफ (27, 234) = 3.83, पी < 0.0001), दिन का मुख्य प्रभाव (एफ (6.288, 163.5) = 6.2, पी < 0.0001), और पलटन का मुख्य प्रभाव (एफ (3, 26) = 3.8, पी = 0.02) के बीच एक बातचीत पाई गई। पोस्ट हॉक परीक्षण ने 1, 2, 3 और 7 दिनों में साथियों के बीच अंतर का खुलासा किया (होल्म-सिडक पोस्ट हॉक परीक्षण: दिन 1, पी 0 बनाम ए 2, पी = 0.02; ए 1 बनाम ए 2, पी = 0.02; दिन 2, ए 1 बनाम ए 2, पी = 0.04; दिन, 3 A0 बनाम A1, p = 0.007; ए 1 बनाम ए 2, पी = 0.04; दिन 7, A0 बनाम A1, p = 0.04)। प्रयोगों P0 और A0 में सभी सीडी -1 चूहों पिछले 3 दिनों में हमला बंद कर दिया. प्रयोगों पी 0 और ए 0 के लिए इस्तेमाल किया गया था कि सीडी -1 चूहों पहले शारीरिक बातचीत के अधीन होने पर आक्रामकता के लिए अधिक प्रवण थे कि ए1 में इस्तेमाल किया गया था, जिसमें हमलों (चित्रा 2बी) में एक स्थिरता थी।

इस कारण से, जैसा कि चरण 2.1 और 2.2 में वर्णित है, सीडी -1 चूहों को विशेष रूप से किशोर चूहों के प्रति उनकी आक्रामकता के लिए जांच की गई थी और किशोर सी 57 बीएल / 6 चूहों के प्रति आक्रामकता के लिए एक वयस्क सी 57 बीएल / 6 पुरुष के साथ प्राइम किया गया था। इसके अलावा, एसीएसडी का उपयोग पीएनडी 21 से पीएनडी 25 तक उम्र बढ़ाने और अभी भी शुरुआती किशोरावस्था को लक्षित करने के लिए किया गया था।

एसीएसडी सत्रों के दौरान, सीडी -1 चूहों ने किशोर चूहों की ओर हमलों की संख्या में वृद्धि की और अधिक सुसंगत पैटर्न में जैसा कि चित्र 2 डी में दिखाया गया है। पुरानी सामाजिक हार प्रतिमान के विपरीत, सत्र और प्रयोगात्मक पलटन (चित्रा 2डी, दो-तरफा दोहराया उपायों एनोवा: एफ (35, 483) = 1.33, पी = 0.1) के बीच कोई महत्वपूर्ण बातचीत नहीं मिली, सत्र का एक मुख्य प्रभाव था (एफ (5.644, 389.5) = 14.15, पी < 0.0001) और पलटन का एक मुख्य प्रभाव (एफ (5, 69) = 7.91, पी < 0.0001); होल्म-सिडक पोस्ट हॉक परीक्षण ने साथियों के बीच महत्वपूर्ण अंतर प्रकट नहीं किया। साथियों के बीच हमलों के औसत की तुलना से पता चला कि यह प्रभाव ज्यादातर कोहोर्ट ए 7 द्वारा संचालित किया गया था, जिसमें हमलों की संख्या काफी अधिक थी (डेटा नहीं दिखाया गया है, एकतरफा एनोवा एफ (5, 69) = 7.911, पी < 0.0001; होल्म-सिडक पोस्ट हॉक परीक्षण: A3 बनाम A6, पी = 0.04; ए 7 बनाम ए 5, पी = 0.002; ए 7 बनाम ए 6, पी < 0.0001; ए 7 बनाम ए 8, पी = 0.0001)।

किशोर चूहों को एसीएसडी के दौरान प्राइमेड सीडी -1 चूहों के साथ अधिक हमले प्राप्त हुए, जो कि पुरानी सामाजिक हार प्रोटोकॉल (चित्रा 2ई, वेल्च के सुधार के साथ अप्रकाशित टी-टेस्ट, टी = 15.40, डीएफ = 17.87, पी < 0.0001) भोले (गैर-प्राइमेड) सीडी -1 चूहों का उपयोग कर रहे थे। पुरानी सामाजिक हार प्रोटोकॉल के दौरान हमले सुसंगत नहीं थे, और वास्तव में, कई प्रयोगात्मक चूहों पर हमला नहीं किया गया था।

Figure 2
चित्रा 2: पुरानी सामाजिक हार तनाव और एसीएसडी के बीच प्रति दिन हमलों की संख्या की तुलना। (ए) पुरानी सामाजिक हार तनाव मॉडल की समयरेखा। (बी) किशोर सी 57 बीएल / 6 पुरुष चूहों (दो-तरफा दोहराया उपायों एनोवा) में पुरानी सामाजिक हार तनाव के दौरान प्रत्येक प्रयोगात्मक पलटन (पी 0, पी 1, ए 1, और ए 2) के लिए प्रति दिन हमलों की संख्या। (सी) त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) मॉडल की समयरेखा। (डी) किशोर C57BL/6 पुरुष चूहों (दो-तरफा दोहराया उपाय ANOVA) में AcSD के दौरान प्रत्येक प्रयोगात्मक पलटन (A3-A8) के लिए प्रति दिन हमलों की संख्या। (ई) एसीएसडी के लिए हमलों की औसत संख्या काफी अधिक थी (वेल्च के सुधार के साथ अयुग्मित टी परीक्षण, **** पी < 0.0001)। सभी डेटा SEM ± माध्य के रूप में दिखाए जाते हैं। संक्षिप्ताक्षर: CSDS = पुरानी सामाजिक हार तनाव; SIT = सामाजिक संपर्क परीक्षण; पीएनडी = प्रसवोत्तर दिन; P0, A0-A8 = प्रत्येक प्रयोगात्मक पलटन के लिए लेबल। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

एसीएसडी सत्रों के दौरान हमलों का पैटर्न 24 घंटे बाद सामाजिक फेनोटाइप को प्रभावित नहीं करता है
सामाजिक हार तनाव जोखिम के बाद, अधिकांश किशोर पुरुष चूहों ने एसआईटी (चित्रा 3 बी, पुरानी सामाजिक हार: एक तरफा एनोवा एफ (2, 43) = 14.57, पी < 0.0001 में परीक्षण किए जाने पर सामाजिक परिहार नहीं दिखाया। स्‍त्री-विषयक एसीएसडी: क्रुस्कल-वालिस परीक्षण, एच (2) = 72.35, पी < 0.0001)। दोनों मॉडलों के लिए, सामाजिक-परिहार और गैर-सामाजिक-परिहार पराजित चूहों (चित्रा 3 डी, पुरानी सामाजिक हार: दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा, एफ (9, 252) = 4.07, पी = 0.21 के बीच हमलों की संख्या में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। एच। एसीएसडी: दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा, एफ (7, 511) = 1.32, पी = 0.24)। हालांकि, एसीएसडी एक्सपोजर (चित्रा 3 सी, जी, 70% बनाम 55.26%, द्विपद परीक्षण (एक-पूंछ), पी = 0.0047) के बाद पुरानी सामाजिक हार के बाद लचीला चूहों का अनुपात अधिक था।

Figure 3
चित्रा 3: पुरानी सामाजिक हार तनाव और एसीएसडी प्रतिमानों के बाद सामाजिक संपर्क परीक्षण (एसआईटी) स्कोर की तुलना। (ए) पुरानी सामाजिक हार तनाव मॉडल की समयरेखा। (बी) किशोरावस्था में पुरानी सामाजिक हार तनाव (एकतरफा एनोवा) के बाद एसआईटी स्कोर का वितरण। (सी) किशोरावस्था में पुरानी सामाजिक हार तनाव के बाद लचीला / अतिसंवेदनशील का अनुपात। (डी) पुरानी सामाजिक हार तनाव के दौरान प्राप्त फेनोटाइप द्वारा हमलों की संख्या, लचीला और अतिसंवेदनशील के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया (दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा)। (ई) त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) मॉडल की समयरेखा। (च) किशोरावस्था में एसीएसडी के बाद एसआईटी स्कोर का वितरण (क्रुस्कल-वालिस)। इस आंकड़े को57 से संशोधित किया गया है। (छ) किशोरावस्था में एसीएसडी के बाद लचीला/अतिसंवेदनशील का अनुपात। इस आंकड़े को57 से संशोधित किया गया है। (एच) एसीएसडी के दौरान प्राप्त फेनोटाइप द्वारा हमलों की संख्या; लचीला और अतिसंवेदनशील (दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा) के बीच कोई अंतर नहीं है। इस आंकड़े को59 से संशोधित किया गया है। ** पी < 0.001, **** पी < 0.0001। सभी डेटा SEM ± माध्य के रूप में दिखाए जाते हैं। संक्षिप्ताक्षर: PND = प्रसवोत्तर दिन; कॉन = नियंत्रण; रेस = लचीला; सुस = अतिसंवेदनशील। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

AcSD का उपयोग किशोर C57BL/6 मादा चूहों में किया जा सकता है
क्योंकि पीएनडी 25 सी 57 बीएल / 6 नर और मादा चूहों ने प्रजनन परिपक्वता तक नहीं पहुंचा है, प्राइमेड सीडी -1 चूहों किशोर मादा चूहों की ओर आक्रामक हमले पेश कर सकते हैं जैसा कि उन्होंने किशोर पुरुष चूहों की ओर किया था। हालांकि, भड़काना चरण हमलों (चित्रा 4 ए) की एक सुसंगत संख्या तक पहुँचने के लिए बढ़ाया जाना था. जैसा कि चित्रा 4 बी में दिखाया गया है, प्रयोगों में दिन और पलटन के बीच कोई बातचीत नहीं मिली (चित्रा 4बी, दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा: एफ (35,707) = 1.38, पी = 0.07), सत्र का एक मुख्य प्रभाव था (एफ (6.286, 634.9) = 16.1, पी < 0.0001) और पलटन का एक मुख्य प्रभाव (एफ (5, 101) = 11.34, पी < 0.0001; होल्म-सिडक पोस्ट हॉक परीक्षण: सत्र 2 सी 4 बनाम सी 8, पी = 0.03; सत्र 6 सी 7 बनाम सी 4, पी = 0.02; सी 7 बनाम सी 5, पी = 0.02; सत्र 7 सी 8 बनाम सी 3, पी = 0.02; सी 8 बनाम सी 4, पी = 0.045)। AcSD के संपर्क में आने वाले अधिकांश किशोर C57BL/6 मादा चूहे सामाजिक परिहार के प्रति लचीले थे (चित्र 4C, ब्राउन-फोर्सिथ का ANOVA: F(2,113.4) = 27.2, p < 0.0001), किशोर नर चूहों के समान। लचीला और अतिसंवेदनशील चूहों (चित्रा 4ई, दो-तरफा दोहराया उपायों एनोवा, सत्र एक्स फेनोटाइप इंटरैक्शन: एफ (7, 714) = 0.73, पी = 0.64, सत्र एफ का मुख्य प्रभाव (6.375, 650.3) = 7.02, पी < 0.0001, फेनोटाइप एफ (1, 102) = 0.4, पी = 0.53) का कोई मुख्य प्रभाव नहीं मिला।

Figure 4
चित्रा 4: किशोर महिला चूहों में एसीडी। (ए) प्रयोग की समयरेखा। (बी) एसीएसडी (दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा) के दौरान प्रयोग द्वारा प्रति दिन हमलों की संख्या। (सी) मादा चूहों (ब्राउन-फोर्सिथ के एनोवा) में किशोरावस्था के दौरान एसीएसडी के बाद एसआईटी स्कोर का वितरण। (डी) किशोरावस्था में एसीएसडी के बाद लचीला/अतिसंवेदनशील का अनुपात (दाएं)। (ई) एसीएसडी के दौरान प्राप्त फेनोटाइप द्वारा हमलों की संख्या; लचीला और अतिसंवेदनशील चूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया (दो-तरफा दोहराया उपाय एनोवा)। सभी आंकड़ों को एसईएम ± माध्य के रूप में दिखाया गया है। (सी-ई) इन आंकड़ों को59 से संशोधित किया गया है। संक्षिप्ताक्षर: एसआईटी = सामाजिक संपर्क परीक्षण; पीएनडी = प्रसवोत्तर दिन; C3-C8 = प्रत्येक प्रयोगात्मक पलटन के लिए लेबल; कॉन = नियंत्रण; रेस = लचीला; सुस = अतिसंवेदनशील। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक तालिका 1: वयस्कों के साथ स्क्रीनिंग के दिन 1 के लिए स्कोरिंग शीट टेम्पलेट। संक्षिप्ताक्षर: CD-1 = CD-1 चूहों की ID, Exp = प्रयोग ID, 3 मिनट = C57BL/6 वयस्क चूहों के लिए स्क्रीनिंग सत्र की अवधि, BL6 ID = स्क्रीनिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 वयस्क चूहों की ID, Lat 1 ADULTS = C57BL/6 वयस्क माउस की ओर CD-1 से पहले हमले की विलंबता, # आक्रामकता = CD-1 द्वारा किए गए हमलों की संख्या। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 2: वयस्कों और किशोरों के साथ स्क्रीनिंग के लिए स्कोरिंग शीट टेम्पलेट। संक्षिप्ताक्षर: ऍक्स्प = प्रयोग आईडी, 1 मिनट = C57BL/6 वयस्क चूहों के लिए स्क्रीनिंग सत्र की अवधि, BL6 आईडी = स्क्रीनिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 वयस्क चूहों की आईडी, अक्षांश 1 वयस्क = सीडी-1 से C57BL/6 वयस्क माउस की ओर पहले हमले की विलंबता, # आक्रामकता = सीडी-1 द्वारा किए गए हमलों की संख्या, 5 मिनट = C57BL/6 किशोर चूहों के लिए स्क्रीनिंग सत्र की अवधि, BL6 Ad = स्क्रीनिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 किशोर चूहों की ID, Lat 1 किशोर = CD-1 से C57BL/6 किशोर माउस की ओर पहले हमले की विलंबता, CD-1 = CD-1 चूहों की आईडी की जांच की गई। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 3: प्राइमिंग चरण के लिए स्कोरिंग शीट टेम्पलेट। संक्षिप्ताक्षर: CD-1 = प्राइमिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले CD-1 चूहों की ID, Exp = प्रयोग ID, 30 सेकंड = C57BL/6 वयस्क चूहों के लिए प्राइमिंग सत्र की अवधि, BL6 ID = प्राइमिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 वयस्क चूहों की ID, Lat 1 ADULTS = CD-1 से C57BL/6 वयस्क माउस की ओर पहले हमले की विलंबता, # आक्रामकता = CD-1 द्वारा किए गए हमलों की संख्या, न्यूनतम: 3 = C57BL/6 किशोर चूहों के लिए प्राइमिंग सत्र की अवधि, BL6 Ad = प्राइमिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 किशोर चूहों की आईडी, लैट 1 किशोर = C57BL/6 किशोर माउस की ओर CD-1 से पहले हमले की विलंबता, # माउंटिंग = C57BL/6 किशोर चूहों द्वारा प्राप्त माउंटिंग की संख्या। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 4: सामाजिक हार शेड्यूलिंग (20 किशोर चूहों) के लिए स्कोरिंग शीट टेम्पलेट। संक्षिप्ताक्षर: CD1 = CD-1 चूहों की ID, E = प्रयोग, H = आर्द्रता, 1 st = सत्र 1, 2nd = सत्र 2, BL6 वयस्क = C57BL/6 वयस्क चूहों की आईडी प्राइमिंग के लिए उपयोग किया जाता है, वजन = C57BL/6 किशोर चूहों का वजन, # हमले = CD-1 द्वारा किए गए हमलों की संख्या, # घाव = C57BL/6 किशोर चूहों द्वारा प्राप्त घावों की संख्या। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 5: सामाजिक हार शेड्यूलिंग का उदाहरण। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 6: वयस्क C57BL/6 नर चूहों की चोट की निगरानी के लिए टेम्पलेट। संक्षिप्ताक्षर: पहला - # घाव = सत्र 57 में C6BL/1 वयस्क माउस द्वारा प्राप्त घावों की संख्या, दूसरा - # घाव = सत्र 57 में C6BL/2 वयस्क माउस द्वारा प्राप्त घावों की संख्या, BL6 = प्राइमिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले C57BL/6 वयस्क चूहों की ID। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 7: नियंत्रण समूह शेड्यूलिंग टेम्पलेट (10 किशोर चूहों). पांव मारने के नियम: एक ही विशिष्ट को न दोहराएं; एक माउस एक ही दिन में बॉक्स के एक ही पक्ष को दोहरा नहीं सकता है; चूहों को अपने घर के पिंजरे से विभिन्न पिंजरों से चूहों के साथ हाथापाई करनी पड़ती है; घर के पिंजरों को गिना जाता है; चूहों की संख्या घर पिंजरे संख्या के आधार पर दी जाती है; पराजित और नियंत्रण समूहों को घर के पिंजरे से बेतरतीब ढंग से लिया जाता है। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक तालिका 8: नियंत्रण समूह शेड्यूलिंग का उदाहरण. कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

सीडी -1 चूहों में लगातार, आक्रामक व्यवहार
स्क्रीनिंग चरण के दौरान, सीडी -1 (पीछा करना, बढ़ते व्यवहार, सूँघना, संवारना, या काटना) द्वारा प्रदर्शित सभी व्यवहारों पर ध्यान देना और एसीएसडी के लिए सीडी -1 चूहों का चयन करते समय इन रिकॉर्डों का बारीकी से पालन करना बहुत महत्वपूर्ण है। यह संभावना है कि एक सीडी -1 माउस जो उस पर हमला किए बिना किशोर माउस के साथ बातचीत करता है, प्राइमिंग के दौरान किशोर चूहों के प्रति आक्रामकता विकसित करेगा। इसके विपरीत, एक सीडी -1 माउस जो एक वयस्क माउस पर हमला करता है लेकिन एक किशोर माउस से संपर्क नहीं करता है, शायद किशोर चूहों के प्रति आक्रामकता विकसित नहीं करेगा।

सीडी -1 भड़काना चरण किशोर चूहों की ओर आक्रामक व्यवहार विकसित करने की अनुमति देता है। इसलिए, चूहों के चयन के लिए व्यवहार का सटीक रजिस्टर होना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, यह हमेशा एक नए प्रयोग से पहले सीडी -1 चूहों स्क्रीन करने के लिए आवश्यक है, यहां तक कि जब एक सीडी 1 माउस से पहले हार के माध्यम से किया गया है. कुछ सीडी -1 चूहों किशोर चूहों पर हमला करना बंद कर सकते हैं जब समय की अवधि के लिए अपने घर के पिंजरों में निर्विवाद छोड़ दिया जाता है, दूसरों को बढ़े हुए क्षेत्रीय व्यवहार विकसित हो सकते हैं क्योंकि उन्हें अलगाव में रखा जाता है।

सीडी-1 चूहों की भड़काना के लिए, प्रोटोकॉल 3 दिनों की सिफारिश करता है। भोले सीडी -1 चूहों कार्यरत हैं, भड़काना बढ़ाया जा सकता है अगर सीडी -1 चूहों सक्रिय रूप से किशोर चूहों पर हमला नहीं करते. सीडी -1 चूहों के लिए जो किशोर चूहों के साथ सामाजिक हार के माध्यम से किया गया था, इस भड़काना चरण की अवधि कम किया जा सकता है.

स्क्रीनिंग और भड़काना चरणों सफल AcSD सत्र के लिए महत्वपूर्ण हैं. उदाहरण के लिए, सीडी -1 चूहों को उचित रूप से प्राइम किया गया था, वे कम आक्रामक सीडी -1 माउस की तुलना में तेजी से 10-हमले की सीमा तक हमला करेंगे और पहुंचेंगे, जिससे छोटी हार एपिसोड की अनुमति मिलेगी।

एसीएसडी के दौरान, जानवरों को अलग करना महत्वपूर्ण है जब हमले बहुत हिंसक होते हैं (यानी, सीडी -1 माउस सी 57 बीएल / 6 जे माउस को जाने नहीं देता है); अन्यथा, किशोर चूहे घायल हो जाएंगे, और हमलों को सीमित करने की आवश्यकता है। संक्रमण से बचने के लिए चोटों का इलाज करना भी बहुत महत्वपूर्ण है; चोटों के इलाज के लिए तैलीय मलहम का उपयोग न करने की सिफारिश की जाती है क्योंकि जानवर मरहम को चाटेंगे, इस प्रक्रिया में बाल खो देंगे और चोट को उजागर करेंगे।

किशोर C57BL/6 नर और मादा चूहों के लिए उपयोग किए जाने वाले समस्या निवारण AcSD
पुरानी सामाजिक हार तनाव मॉडल ने पुरुष और महिला दोनों C57BL/6 चूहों में शुरुआती किशोरावस्था में इसके उपयोग के लिए महत्वपूर्ण सीमाएं प्रस्तुत कीं। इस खंड में, किशोरावस्था में एसीएसडी मॉडल के विकास के लिए किए गए संशोधनों का वर्णन किया गया है।

उपकरण: उपकरणों की पूरी सूची सामग्री की तालिका में सूचीबद्ध है। प्रारंभिक किशोरावस्था में C57BL/6 किशोर चूहे (PND 21-30) प्रयोगशाला60 में पहले उपयोग किए गए वर्णित उपकरणों के लिए बहुत छोटे थे। ऐक्रेलिक ग्लास डिवाइडर पर छिद्रों का व्यास C57BL/6 चूहों को एक डिब्बे से दूसरे डिब्बे में पार करने की अनुमति देने के लिए काफी बड़ा है, जहां हमलावर रहता है। इसे रोकने के लिए, ऐक्रेलिक ग्लास डिवाइडर जिनमें एक छोटे व्यास के छिद्र होते हैं, बनाए गए थे। इसके अलावा, चूहों को पिंजरों से बचने से रोकने के लिए स्टील-वायर टॉप को क्लिप के साथ सुरक्षित करने की आवश्यकता थी। नियोजित कवर ढक्कन आमतौर पर हवादार पिंजरों के लिए उपयोग किए जाते हैं। इस मामले में, इन कवर ढक्कन सुरक्षात्मक कपास के बिना इस्तेमाल किया गया उचित वेंटिलेशन की अनुमति देने के लिए और पिंजरे से भागने से चूहों को रोकने के लिए. यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि उपयोग किए जाने वाले वुडचिप बिस्तर की मात्रा को किशोर चूहों को भोजन और कवर ढक्कन पर रखे पानी के डिस्पेंसर तक पहुंचने की अनुमति देनी चाहिए। हालांकि, बड़ी मात्रा में वुडचिप गीला हो सकता है।

सीडी-1 चूहों का चयन: क्रोनिक मॉडल में, सीडी-1 चूहों प्रयोग की शुरुआत से पहले आक्रामक व्यवहार के लिए जांच की जाती है। सीडी -1 चूहों स्क्रीनिंग के 3 दिनों के बाद चुना जाता है, और उनके आक्रामक व्यवहार का आकलन किया जाता है. स्क्रीनिंग के बाद, जिन जानवरों को 30 एस के तहत हमला करने की देरी होती है और जो लगातार हमले दिखाते हैं, उन्हें अगले चरण के लिए चुना जाता है। हालांकि, पुरानी सामाजिक हार प्रयोगों के दौरान, सीडी-1 चूहों ने 10 दिनों (चित्रा 2बी)के लिए हमलों की लगातार संख्या बनाए नहीं रखी। इसलिए, घुसपैठिए माउस की ओर आक्रामकता की कमी के कारण कई सीडी -1 चूहों को प्रयोग से हटाया जाना था। वास्तव में, जबकि सीडी -1 चूहों के केवल एक छोटे से अनुपात ने घुसपैठिए माउस पर हमला किया, इनमें से कुछ चूहे बेहद आक्रामक थे और कभी-कभी पुरुष C57BL/6 PND 21 चूहों को गंभीर रूप से घायल कर देते थे। इसलिए, सीडी -1 चूहों की स्क्रीनिंग किशोर चूहों की ओर आक्रामक चूहों का चयन करने के लिए बदल दिया गया था, शारीरिक आक्रामकता को बढ़ाने.

शारीरिक आक्रामकता की संगति: लगातार शारीरिक आक्रामकताघुसपैठिए 6 की तेजी से और मजबूत हार प्राप्त करने की ओर ले जाती है। प्रयोगों और प्रयोगकर्ताओं के बीच प्रक्रियाओं को मानकीकृत करने के लिए, हमले की एक परिचालन परिभाषाका उपयोग 57 किया गया था, जिससे आक्रामकता के सटीक मात्रात्मक माप की अनुमति मिलती है।

भड़काना आक्रामकता: पुरानी सामाजिक हार प्रयोगों के दौरान, हमलों की संख्या बहुत भिन्न होती है, प्रयोग के अंतिम दिनों के दौरान कम हो जाती है (चित्र 2बी)। किशोर C57BL/6 पुरुष चूहों की ओर CD-1 चूहों के आक्रामक व्यवहार को बढ़ाने के लिए, CD-1 चूहों को उनके घर के पिंजरे में पेश किए गए चूहों की परवाह किए बिना सक्रिय रूप से आक्रामक होने के लिए तैयार किया गया था। यह व्यवहार किशोर माउस से पहले 1 मिनट के लिए एक वयस्क C57BL/6 पुरुष माउस को पेश करके प्राप्त किया गया था, जिससे वयस्क को पुनः प्राप्त करने के बाद किशोर चूहों पर हमला करने के लिए सीडी -1 माउस को प्रोत्साहित किया गया था।

मॉडल की अवधि: पीएनडी 21 पर किशोर सी 57 बीएल / 6 चूहे बहुत छोटे हैं, और सीडी -1 चूहे सिर्फ एक हमले से उन्हें गंभीर रूप से घायल कर सकते हैं। इसलिए, प्रारंभिक किशोरावस्था को लक्षित करने के लिए और अभी भी सामाजिक हार के दोहराए गए सत्रों के लिए, क्लासिक 10-दिवसीय पुरानी सामाजिक हार तनाव के लिए एक वैकल्पिक मॉडल का चयन किया गया था। त्वरित सामाजिक हार तनाव (एसीएसडी) 42 में प्रति दिन शारीरिक आक्रामकता के दो सत्र होते हैं, सुबह में एक सत्र और दोपहर में एक, कुल 4 दिनों (8 सत्र) के लिए। एसीएसडी मॉडल ने किशोर चूहों की उम्र में पीएनडी 21 से पीएनडी 25 तक वृद्धि की अनुमति दी, जो अभी भी केवल शुरुआती किशोरावस्था को लक्षित कर रहा है।

किशोरावस्था में एसीएसडी की सीमाएं
AcSD मॉडल की कुछ सीमाएँ हैं। वयस्कों में पुरानी सामाजिक हार मॉडल की तुलना में, एसीएसडी को किशोर सी 57 बीएल / 6 चूहों की सीडी -1 चूहों की संख्या से दोगुनी संख्या की स्क्रीनिंग की आवश्यकता होती है। भड़काना चरण की अवधि सीडी -1 चूहों के आक्रामक व्यवहार के आधार पर भिन्न हो सकते हैं; जैसे, एसीएसडी अनुसूची को प्रत्याशा के साथ योजनाबद्ध किया जाना चाहिए, और इन सभी चर पर विचार करने की आवश्यकता है। चूंकि अधिकांश किशोर चूहों एसीएसडी एक्सपोजर के बाद सामाजिक परिहार के खिलाफ लचीलापन दिखाएंगे, अतिसंवेदनशील चूहों की प्रतिनिधि संख्या प्राप्त करने के लिए, प्रयोगात्मक पलटन में पुरुषों के लिए कम से कम 20 जानवर और महिलाओं के लिए 30 शामिल होना चाहिए।

किशोर चूहों में एसीएसडी प्रयोगात्मक समूहों में लगातार परिणाम देता है
पुरानी सामाजिक हार और एसीएसडी प्रोटोकॉल दोनों के साथ सामाजिक तनाव के संपर्क में आने के बाद, अधिकांश किशोर पुरुष चूहों ने सामाजिक परिहार के खिलाफ लचीलापन दिखाया। हालांकि, पुरानी सामाजिक हार मॉडल के लिए, सीडी -1 द्वारा हमलों की संख्या में परिवर्तनशीलता को एक भ्रमित चर के रूप में त्यागना संभव नहीं था। इसके विपरीत, एसीएसडी प्रयोगों के लिए, सीडी-1 चूहों को सत्रों में हमलों की एक सुसंगत संख्या प्राप्त करने के लिए हर हार सत्र से पहले प्राइम किया जाता है (चित्र 2डी,ई)। कुल मिलाकर, एसीएसडी के संपर्क में आने वाले चूहों के सभी प्रयोगात्मक समूह सत्रों में समान संख्या में हमले दिखाते हैं (चित्र 2डी); हालांकि, यह पुरानी सामाजिक हार मॉडल(चित्रा 2बी)के संपर्क में आने वाले चूहों के साथियों के लिए मामला नहीं है।

वयस्क C57BL/6 मादा चूहों में पुरानी सामाजिक हार तनाव का उपयोग अन्य प्रजातियों औरउपभेदों 9,13,45,61 में इस मॉडल का उपयोग कर दूसरों के साथ तुलना में चुनौतीपूर्ण किया गया है. किशोर C57BL/6 महिला चूहों में AcSD प्रयोगों के लिए, भड़काना चरण बढ़ाया गया था, सीडी -1 चूहों (चित्रा 4A) के आक्रामक व्यवहार को सुनिश्चित करने. हालांकि, महिला प्रयोगात्मक समूहों (चित्रा 4 बी) में हमलों की संख्या में परिवर्तनशीलता देखी जा सकती है। बहरहाल, इन प्रयोगों में, सभी सीडी -1 चूहों ने महिलाओं के प्रति आक्रामक व्यवहार दिखाया। हमलों की संख्या में वृद्धि करने के लिए, पुरुष चूहों के साथ भड़काना 1 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है. पुरुषों की तरह, सामाजिक परिहार के खिलाफ लचीला किशोर सी 57 बीएल / 6 महिला चूहों का अनुपात संवेदनशीलता दिखाने वालों की तुलना में अधिक था (चित्रा 4सी, डी)। इसके अलावा, हमलों की संख्या लचीला और अतिसंवेदनशील चूहों (चित्रा 4ई) के बीच भिन्न नहीं थी, यह दर्शाता है कि फेनोटाइप हमलों से स्वतंत्र है। एसीएसडी का उपयोग किशोर C57BL/6 मादा चूहों में किया जा सकता है और एक ही सीडी-1 चूहों का उपयोग करके दोनों लिंगों में एक ही समय में प्रयोग किए जा सकते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को कैनेडियन इंस्टीट्यूट फॉर हेल्थ रिसर्च (सीएफ ग्रांट नंबर: एमओपी -74709; पीजेटी 190045), नेशनल इंस्टीट्यूट ऑन ड्रग एब्यूज (सीएफ ग्रांट नंबर: R01DA037911), नेचुरल साइंसेज एंड इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल ऑफ कनाडा (सीएफ ग्रांट नंबर: 2982226)। एंड्रिया पंतोजा-अर्बन को मेक्सिको से मानविकी, विज्ञान और प्रौद्योगिकी के लिए राष्ट्रीय परिषद / Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías (CONAHCYT) और FRQNT - विदेशी छात्रों के लिए मेरिट छात्रवृत्ति कार्यक्रम (PBEEE) द्वारा समर्थित किया गया था। सैमुअल रिचर को मैकगिल विश्वविद्यालय में न्यूरोसाइंस के एकीकृत कार्यक्रम से छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया था। चित्रा चित्र BioRender.com से टेम्पलेट्स का उपयोग करके बनाए गए थे।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6 adolescent mice  In house breeding Mice were breeded at the Neurophenotyping Centre of the Douglas Mental Health University Institute.
C57BL/6 adult mice  Charles River Laboratories Strain Code: 027 Mice are ordered so as to arrive at PND>65 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
C57BL/6J adolescent mice  Jackson Labs Strain Code: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664 Mice are ordered so as to arrive at PND 24 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
CD-1 mice  Charles River Laboratories Strain Code: 022 Mice retired breeders more than three months of age and singled housed throughout.
Cleaning solution  Virox Animal Health DIN 02537222 Prevail: Accelerated Hydrogen Peroxide. Desinfectant cleaner and deodorizer.
Clear perforated acrylic glass divider  Manufactured by Douglas Hospital, custom order 0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); perforations of 0.6 cm diameter. The dividers are perforated allowing sensory but no physical contact between the pair of mice.
Clear rectangular rat cages  Allentown 24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h).
Cotton squares for bedding Inotiv Envigo T.6060 iso-BLOX 2.5 cm x 2.5 cm. Added to the social defeat apparatus.
Hard woodchip bedding Inotiv Envigo Teklad 7090, 7115 Sani-chip bedding.
Large binder clips to secure the steel-wire tops STAPLES Item #: 132429, Model #: 24178-CA 51 mm
Medium binder clips to secure the steel-wire tops Item #: 132367, Model #: 24172-CA 32 mm, in case the cover lids of the rat cages do not close with the large clips
Pain relief cream Polysporin Plus Pain Relief Cream (red format, NOT ointment), 2 Antibiotics plus lidocaine hydrochloride
Paired Steel-wire tops  24 cm (w) × 48 cm (d) with 0.6 cm (w) of separation between the grill
Removable wire-mesh enclosure  Johnston industrial plastics 11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) custom order; two per social interaction test arena secured in precut clear polycarbonate
Social interaction open-field arena PEXIGLAS 45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), custom-crafted from opaque acrylic glass (Plexiglas) 
Stopwatch  For timing defeat sessions
Video camera with infrared lights  Swann SRDVR-44580V  Swann Camera - 4 Channel 1080p Digital Video Recorder & 2 x PRO-T853
Video tracking software  Topscan 2.0 Clever Systems Inc.

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Pantoja-Urbán, A. H., Richer, S., Giroux, M., Nouel, D., Flores, C. Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL/6 Male and Female Mice. J. Vis. Exp. (205), e66455, doi:10.3791/66455 (2024).

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