O significado de pequenas colônias em Candida spp. resistência a medicamentos não foi totalmente explorado. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) oferece uma estratégia promissora contra infecções fúngicas resistentes a medicamentos. Este estudo demonstra que a aPDT mediada por rosa bengala desativa efetivamente Candida glabrata e induz pequenas colônias, apresentando um procedimento único.
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Artigo de método
Indução de pequenas colônias em Candida glabrate via terapia fotodinâmica mediada por Rose Bengal
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Enfrentando uma taxa de mortalidade de 40% em pacientes com candidemia, a Candida resistente a medicamentos e seus pequenos mutantes continuam sendo um grande desafio de tratamento. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) tem como alvo várias estruturas fúngicas, ao contrário dos antibióticos/antifúngicos, potencialmente frustrando a resistência. Os métodos tradicionais para induzir colônias pequenas dependem de brometo de etídio ou fluconazol, que podem influenciar a suscetibilidade aos medicamentos e as respostas ao estresse. Este estudo investigou a aplicação de luz verde (pico de 520 nm) e fotossensibilizador de rosa bengala (RB) no combate a um isolado de Candida glabrata resistente a medicamentos. Os resultados revelaram que o tratamento com aPDT inibiu significativamente o crescimento celular (redução de ≥99,9%) e induziu efetivamente a formação de colônias pequenas, como evidenciado pela redução do tamanho e perda da coloração do indicador redox mitocondrial. Este estudo fornece evidências iniciais de que o aPDT pode induzir pequenas colônias em uma cepa de C. glabrata multirresistente in vitro, oferecendo uma abordagem potencialmente transformadora para combater infecções fúngicas resistentes.
Introdução
As infecções fúngicas, particularmente aquelas causadas por Candida albicans e Candida glabrata, cada vez mais resistentes, representam uma séria ameaça global1. Essas infecções podem ser mortais, especialmente para pacientes hospitalizados e aqueles com sistema imunológico enfraquecido. O aumento da resistência antifúngica ameaça o controle da candidíase invasiva, uma infecção fúngica grave com alta mortalidade, especialmente por Candida albicans2. Cepas resistentes dificultam o tratamento eficaz, aumentando potencialmente a complexidade e as taxas de mortalidade. No condado de Alameda, Califó....
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Protocolo
1. Cultura de C. glabrata
NOTA: Um C. glabrata multirresistente (C2-1000907) que é resistente à maioria dos agentes antifúngicos, incluindo fluconazol, é usado para os experimentos. As condições experimentais podem precisar ser adaptadas à cepa específica, pois podem existir variações entre diferentes cepas. Todos os experimentos usaram Candida em fase logarítmica cultivada a 25 ° C (imitando a infecção natural) para consistência. A falta de hifas de C. glabrata simplifica a quantificação em comparação com C. albicans, que forma hifas a 37 °C10.
- Para prep....
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Resultados
Os dados são apresentados como a média com ± erro padrão e foram obtidos a partir de três experimentos independentes, com pelo menos triplicatas em cada grupo. Os dados experimentais, incluindo contagens de colônias, medições de OD600 e resultados de coloração TTC, foram representados graficamente e analisados estatisticamente usando gráficos e software estatístico (ver Tabela de Materiais). A análise dos dados foi realizada por ANOVA ou teste t de uma via, sendo considerado significa.......
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Discussão
Este estudo revela a PDT como o primeiro método relatado para induzir a formação de pequenas colônias em Candida, superando os efeitos estabelecidos do brometo de etídio e do fluconazol. Esta nova observação requer uma exploração mais aprofundada para desvendar suas implicações tanto para a erradicação de fungos, diminuindo a virulência quanto para o surgimento de mecanismos de resistência.
A PDT mediada por RB inibe efetivamente o crescimento de C. glabrata, sugerindo uma potencial a.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflito de interesses.
Agradecimentos
Este trabalho recebeu financiamento do Ministério da Ciência e Tecnologia, Taiwan [MOST 110-2314-B-006-086-MY3], Universidade Nacional de Cheng Kung [K111-B094], [K111-B095], Hospital Universitário Nacional de Cheng Kung, Taiwan [NCKUH-11204031], [NCKUMCS2022057].
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,22 μ filtro m | Merck, Taipei, Taiwan | Millex, SLGVR33RS | |
| Tubo de microfuga de 1,5 mL | Neptune, San Diego, EUA# | 3745 | |
| Cloreto de trifeniltetrazólio a 20% (TTC) | Sigma-Aldrich, MO, EUA | T8877 | |
| Tubo de fundo redondo de polipropileno de 5 mL | Corning, AZ, EUA | 352059 | |
| Tubo de fundo redondo de 5 mL com tampa de filtro de célula | Corning, AZ, EUA | Falcon, #352235 | |
| placa de 96 poços | Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan | #16196 | |
| Agar | BRS, Tainan, Taiwan | AG012 | |
| Disco em branco | Advantec, Tóquio, Japão | 49005040 | |
| Centrífuga | Eppendorf, Reino Unido | 5415R | |
| Solução de brometo de etídio | Sigma-Aldrich, MO, EUA | E1510 | |
| Fluconazol, 2 mg/mL | Pfizer, NY, EUA | BC18790248 | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | Versão 7.0 | |
| Tira de diodo emissor de luz verde (LED) | Nanyi electronics Co., Ltd, Tainan, Taiwan | 5050 | Onda de excitação: 500~550 nm |
| Baixa temperatura. agitar Incubadoras | Yihder, Taipei, Taiwan | LM-570D (R) | |
| Cotonetes para cuidados bucais | Good Verita Enterprise, Taipei, Taiwan | 161357 | |
| Muller Hinton II ágar | BD biosciences, Califórnia, EUA | 211438 | |
| Leitor de microplacas multimodo | Molecular Devices | Espectrofotômetro SpectraMax i3x | |
| OD600 | Biochrom, Londres, Reino Unido | Ultrospec 10 | |
| Rose Bengal | Sigma-Aldrich, EUA | 330000 | concentração de estoque 40 mg / mL = 4%, preparar em PBS, armazenado a 4 &graus; C |
| Tubo de vidro esterilizado | Sunmei, Tainan, Taiwan | AK45048-16100 | |
| Extrato de levedura Peptona Dextrose Meio | HIMEDIA, Índia | M1363 |
Referências
- Soriano, A., et al. Invasive candidiasis: current clinical challenges and unmet needs in adult populations. J Antimicrob Chemother. 78 (7), 1569-1585 (2023).
- Pappas, P. G., Lionakis, M. S., Arendrup, M. C., Ostrosky-Zeichner, L., Kullberg, B. J. Invasive candidiasis. Nat Rev....
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Reimpressões e permissões
