طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)
Summary
هذا الفيديو يوضح ثقافة جديدة ، وهي الطريقة التي يتم تربيتها افراخ الدجاج خارج البويضة لمدة تصل إلى 24 ساعة. هذه الطريقة تمكن واحد لدراسة التطور المبكر (مسحة البدائية إلى 14 سوم) ، وهي الفترة المقابلة ل9 – E7 في الماوس. تطبيقات هذه التقنية تشمل electroporation ، التهجين في الموضع والمناعية.
Abstract
الجنين الفرخ هو أداة قيمة في دراسة التطور الجنيني المبكر. شفافيته ، وسهولة الوصول وسهولة التلاعب ، وجعلها أداة مثالية لدراسة تشكيل والزخرفة من والدماغ الجسيدة ، الأنبوب العصبي والقلب primordia. تطبيقات الثقافة الجنين الفرخ تشمل electroporation بنيات الحمض النووي الريبي أو من أجل تحليل وظائف الجينات ، والطعوم من الخرز عامل النمو المغلفة مثل FGFs وأفضل الممارسات الإدارية ، وكذلك جبل بأكمله في الموقع التهجين والمناعية. هذا الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في الثقافة الجنين فرخ ؛ أولا ، explanted الجنين في المياه المالحة. ثم ، يتركز على الجنين حلقة الزجاج. يتم رفع الأغشية التي تحيط بالجنين على طول الجدران من الحلبة. ثم يتم وضع الخاتم في صحن الثقافة التي تحتوي على مجموعة من albumine. غير مختومة طبق الثقافة وضعت في غرفة رطبة ، حيث يتم تربيتها في جنين لمدة تصل إلى 24 ساعة. أخيرا ، تتم إزالة الجنين من الحلقة ، والثابتة وتجهيزها لتطبيقات أخرى. وتقدم أيضا دليلا المشاكل.
Protocol
Discussion
ويمكن استخدام أسلوب 2 للثقافة الجديدة تشكيلة واسعة من التطبيقات ، بدءا من الطعوم من عامل النمو التي تحتوي على حبات 3 ، لتحميل كامل التهجين في الموقع وتحميل كامل المناعية 4. الثقافة خلال فترة 24 ساعة تمكن الرصد المستمر من التطور الجنيني في تطبيقات مثل الفاصل ?…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة مارغريت Alkek M. إلى RHF.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fertile | |
| Stereomicroscope | Microscope | Leica Microsystems | MZ9.5 or similar | |
| Marsh Automatic Incubator | Tool | Lyon | RX | |
| Hybridization Incubator | Tool | Robbins Scientific | M1000 | |
| Pyrex dish (2) | Tool | |||
| Watchmaker’s glass 50mm | Tool | VWR | 66112-060 | |
| Glass rings | Tool | Physical Plant facility | cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish. | |
| Curved Forceps (1) | Surgery | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Forceps (2) | Surgery | Fine Science Tools | 11002-13 | blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil |
| Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas | Surgery | Electron Microscopy Sciences | 62082-00 | |
| Fine scissors | Surgery | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Plastic dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
| Rubber Bulb | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| Pasteur Capillary Pipette | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | round edge under flame |
| Microcapillary tube | Surgery | Sigma | P1049-1PAK | Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps |
| Microdissecting knife | Surgery | Fine Science Tools | 10056-12 | Use to puncture cavities prior to in situ hybridization |
| Minuten pins 0.2mm diam | Surgery | Fine Science Tools | 26002-20 | |
| Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base | Reagent | Dow Corning | 0001986475 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Reagent | Acros Organics | 10025025 | Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave |
Referências
- Pannett, P. A., Compton, C. A. The cultivation of tissues in saline. Lancet. 206, 381-384 (1924).
- New, D. T. A new technique for the cultivation of the chick embryo in vitro. J. Embryol. Exp. Morph. 3, 326-331 (1955).
- Alvarez, I. S., Araujo, M., Nieto, M. A. Neural induction in whole chick embryo cultures by FGF. Dev. Biol. 199, 42-54 (1998).
- Psychoyos, D., Stern, C. D. Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen’s node and the anterior primitive streak in the chick embryo. Development. 122, 3263-3273 (1996).
- Psychoyos, D., Stern, C. D. Fates and migratory routes of primitive streak cells in the chick embryo. Development. 122, 1523-1534 (1996).
- Voiculescu, O., Papanayotou, C., Stern, C. D. Spatially and temporally controlled electroporation of early chick embryos. Nature Protoc. 3, 419-426 (2008).
