Drosophile larvaire JNM immunohistochimie
Summary
Ce protocole montre comment effectuer la larve de drosophile immunohistochimie sur disséqués.
Abstract
L'<em> Drosophile</em> Jonction neuromusculaire (JNM) est un système modèle établi utilisée pour l'étude du développement synaptique et la plasticité. L'utilisation généralisée de la<em> Drosophile</em> Système de moteur est due à sa grande accessibilité. Elle peut être analysée avec une seule cellule de résolution. Il ya 30 muscles par hemisegment dont l'agencement intérieur la paroi du corps périphériques sont connus. Un total de 31 neurones moteurs attachent à ces muscles dans un modèle qui a la haute fidélité. En utilisant la biologie moléculaire et la génétique, on peut créer des animaux transgéniques ou mutants. Ensuite, on peut étudier les conséquences du développement sur la morphologie et la fonction du MNJ. L'immunohistochimie peut être utilisée pour l'image clairement les composantes de la JNM. Dans cet article, nous montrons comment utiliser coloration des anticorps pour visualiser les<em> Drosophile</em> Larvaires JNM.
Protocol
Discussion
L'immunohistochimie (IHC) est vitale pour l'étude de la biologie JNM, car elle permet la visualisation de la JNM. Ceci est accompli en utilisant des anticorps qui reconnaissent la membrane neuronale (par exemple, HRP), l'presynapse (par exemple, CSP, SYT), et / ou le postsynapse (par exemple, DLG). Molécules de signalisation, des protéines de structure, ou de nouvelles protéines d'intérêt peuvent aussi être colorées. Ensuite, les gènes peuvent être mutés ou missexpressed, et IHC peut détecter…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
References
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
