ショウジョウバエ幼虫NMJ免疫組織化学

Summary

このプロトコルは、解剖さショウジョウバエの幼虫の免疫組織化学を実行する方法を示しています。

Abstract

市販<em>ショウジョウバエ</em>神経筋接合部（NMJ）は、シナプスの発達と可塑性の研究のために使用される確立されたモデルシステムです。の普及<em>ショウジョウバエ</em>モーターシステムはその高いアクセシビリティによるものです。それは、単一セルの分解能で解析することができます。その配置末梢体壁内に知られているhemisegmentあたり30の筋肉があります。 31運動ニューロンの総数は、高い忠実度を持つパターンにこれらの筋肉に付着する。分子生物学と遺伝学を使用して、一つはトランスジェニック動物または変異体を作成することができます。その後、一つはNMJの形態と機能に関する発達影響を調べることができます。免疫組織化学は、NMJの構成要素を明確にイメージするために使用することができます。この記事では、我々は可視化する抗体染色を使用する方法を示します<em>ショウジョウバエ</em>幼虫NMJ。

Protocol

あなたが始める前に PBT（1X PBS中0.1％トリトンX100）、PBTB（0.2％PBTでBSA）、及びPBTN（PBTBの2％のNGS）：以下の溶液を調製。 ショウジョウバエの幼虫を解剖。 ショウジョウバエ幼虫NMJの解剖を参照してください。 免疫組織化学 PBTを含む1.5 mlチューブに幼虫を移動します。 PBTで15分間二回幼虫を洗ってください。注?…

Discussion

それはNMJの可視化を可能にするため、免疫組織化学（IHC）は、NMJ生物学の研究に不可欠です。これは、神経細胞膜（例えば、HRP）、前シナプス（例えば、CSP、SYT）、および/またはpostsynapse（例えば、DLG）を認識する抗体を使用することによって実現されます。シグナル伝達分子、構造タンパク質、または興味の新規タンパク質も染色することができます。その後、遺伝子が変異またはmissexpres…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Stereomicroscope “Stemi” 2000		Carl Zeiss MicroImaging Inc.	495101-9804-000
Light Source KL 1500 LCD		Carl Zeiss MicroImaging Inc.	000000-1063-181
Dumont SS Forceps		Fine Science Tools Inc.	11200-33
Dumont #5 Forceps		Fine Science Tools Inc.	11252-20
Adams™ Nutator Mixer		Becton, Dickinson and Company	421105
No.1 Precision knife		X-Acto	3201
No. 16 Blades		X-Acto	216
ProLong Gold Antifade reagent		Invitrogen Corporation	36930