Summary

La normalizzazione nata per fluorescenza Tomografia Ottica proiezione per l'imaging tutto il cuore

Published: June 02, 2009
doi:

Summary

Vi suggeriamo un approccio Nato normalizzato per Tomografia Ottica di proiezione (BnOPT) che rappresenta la proprietà di assorbimento dei campioni ripreso ad ottenere ricostruzioni fluorescenza accurata e quantitativa tomografica. Usiamo l'algoritmo proposto di ricostruire la distribuzione della fluorescenza della sonda molecolare all'interno di organi di animali di piccole dimensioni.

Abstract

Tomografia ottica di proiezione è un tridimensionale tecnica di imaging che è stato recentemente introdotto come strumento di imaging principalmente in biologia dello sviluppo e studi di espressione genica. La tecnica rende campione biologico otticamente trasparente prima li disidratazione e poi messa in una miscela di alcool benzilico e benzoato benzilico in un rapporto di 2:1 (BABB o Murray soluzione s FTA). La tecnica rende campioni biologici otticamente trasparente prima li disidratazione in soluzioni di etanolo graduato allora per questi ultimi in una miscela di alcool benzilico e benzoato benzilico in un rapporto di 2:1 (BABB o Soluzione limpida Murray s) per cancellare. Dopo il processo di compensazione il contributo di scattering nel campione può essere notevolmente ridotto e reso quasi trascurabile, mentre il contributo di assorbimento non può essere eliminato completamente. Quando si tenta di ricostruire la distribuzione della fluorescenza all'interno del campione in esame, questo contributo riguarda le ricostruzioni e conduce, inevitabilmente, ad artefatti ed errori di quantificazione .. Mentre l'assorbimento potrebbero essere ridotti ulteriormente con una permanenza di settimane o mesi nei media radura, questo porterà ad una perdita progressiva di fluorescenza e ad un tempo di campionamento irrealisticamente lunghi di elaborazione. Questo è vero quando ricostruendo sia agenti di contrasto esogeni (agenti di contrasto molecolare), così come il contrasto endogeni (ad esempio, ricostruzioni di espressione genetica delle proteine ​​fluorescenti).

Protocol

Procedura di imaging Il setup sperimentale è mostrato in dettaglio nella Figura 1. Una sorgente di luce LS serve sia come illuminazione per misure di assorbimento e come fonte di eccitazione per misure di fluorescenza ed è filtrata con una stretta banda passante BPF filtro di interferenza. Un insieme di ND densità fissi e variabili neutro filtri combinati con la presenza di un otturatore automatico S permettono di controllare la quantità di luce sul campione e di tenerlo abbastanza basso p…

Acknowledgements

C. Vinegoni riconosce il sostegno di National Institutes of Health (NIH) concedere 1-RO1-EB006432.

References

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Cite This Article
Vinegoni, C., Razansky, D., Figueiredo, J., Fexon, L., Pivovarov, M., Nahrendorf, M., Ntziachristos, V., Weissleder, R. Born Normalization for Fluorescence Optical Projection Tomography for Whole Heart Imaging. J. Vis. Exp. (28), e1389, doi:10.3791/1389 (2009).

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