Antifouling monocamadas auto-organizadas em Microeletrodos de Biomoléculas Patterning

Summary

Nós apresentamos um procedimento para a formação de um poli (etileno glicol) monocamada auto-montados (PEG-SAM) em um substrato de silício com microeletrodos de ouro. O PEG-SAM é formada em uma única etapa e impede a incrustação em superfícies de silício e ouro. Eletroforese é então utilizado para padronização biomoléculas até a nanoescala.

Abstract

Nós apresentamos um procedimento para a formação de um poli (etileno glicol) (PEG) monocamada auto-montados trimetoxissilano (SAM) em um substrato de silício com microeletrodos de ouro. O PEG-SAM é formado em uma etapa única montagem e impede a incrustação em superfícies de silício e ouro. A SAM é usada para microeletrodos casaco estampados com a norma, litografia tom positivo. Usando o microtúbulos como um exemplo, nós aplicamos uma tensão DC para induzir a migração eletroforética para o eletrodo revestido SAM de forma reversível. A câmara de fluxo é usado para geração de imagens a migração eletroforética e padronização de microtúbulos<em> In situ</em> Meio de microscopia de epifluorescência. Este método é geralmente aplicável a padronização biomolécula, como se emprega a eletroforese para imobilizar moléculas-alvo e, portanto, não requer específicas interações moleculares. Além disso, evita problemas encontrados ao tentar padrão as moléculas SAM diretamente usando técnicas litográficas. A compatibilidade com litografia por feixe de elétrons permite que este método seja usado para biomoléculas padrão em nanoescala.

Protocol

Preparação de reagentes Prepare TUBOS tampão (80 mM PIPES, 1mM MgCl 2, 1 mM EGTA, ajustado para pH 6,8 com KOH). Alíquotas e armazenar glicose oxidase, catalase e glicose a -70 ° C e taxol a -20 ° C de acordo com protocolos existentes. 1,2 alíquotas e tubulina armazenar a -70 ° C de acordo com as instruções fornecidas pelo fornecedor. Microeletrodos padrão de Au utilizando litografia Corte em pastilhas de silício 1,5 1 c…

Discussion

A migração dos MTs é facilmente visualizado através de microscopia de fluorescência por causa de seu brilho e da fluorescência de fundo baixa. O método é geralmente aplicável a padronização biomolécula, uma vez que só exige que as biomoléculas ser induzido a levar uma carga líquida pelo ajuste adequado do pH. Eletroosmose é evitada nesta configuração, porque não há superfícies carregadas como as paredes de sílica usada em eletroforese capilar.

Várias modificações des…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
2-[methoxypoly-(ethyleneoxy)propyl]-trimethoxysilane (PEG-silane)		Gelest, Inc.	SIM6492.7	6-9 PEG units; molecular weight 450-600 g mol-1
2-mercaptoethanol		Sigma	M7522
Acetone		EMD Chemicals	AX0120-8	ACS grade
Catalase		Calbiochem	219001-5MU
Chlorobenzene		EMD Chemicals	MK441908	ACS grade
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid (EGTA)		Calbiochem	324626
Glucose		EMD Chemicals	DX0145-1
Glucose oxidase		MP Biomedicals	100330
Guanosine-5’-[(α,Β)-methyleno]triphosphate, Sodium salt (GMPCPP)		Jena Biosciences, GmbH	NU-405s
Guanosine-5’-triphosphate		Sigma	G8752
Isopropanol		EMD Chemicals	PX1835-5	ACS grade
Methyl isobutyl ketone (MIBK)		Fisher Scientific	AC12739-0010
Paclitaxel (taxol)		Calbiochem	580555
Piperazine-N,N”-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES)		Sigma	P1851
Polymethylmethacrylate (PMMA)		Brewer Science, Inc.	950K	molecular weight 950K
Rhodamine tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T331M	from bovine brain 99% pure, lyophilized
Toluene		EMD Chemicals	TX0735-5	ACS grade
Tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T238	from bovine brain 99% pure, lyophilized

No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003”) diameter) can be obtained from electronic supply companies.