Antifouling monocapas auto-ensambladas de microelectrodos de Biomoléculas Patrones

Summary

Se presenta un procedimiento para la formación de un poli (etilenglicol) auto-ensambladas monocapa (PEG-SAM) en un substrato de silicio con microelectrodos de oro. El PEG-SAM se forma en un solo paso y evita la contaminación biológica en las superficies de silicio y oro. Electroforesis se utiliza para modelar biomoléculas a la nanoescala.

Abstract

Se presenta un procedimiento para la formación de un poli (etilenglicol) (PEG) trimetoxisilano auto-ensambladas monocapa (SAM) en un substrato de silicio con microelectrodos de oro. El PEG-SAM se forma en una etapa de montaje simple y evita incrustaciones en las superficies de silicio y oro. El SAM se utiliza para microelectrodos abrigo estampado con el estándar, de tono positivo litografía. El uso de los microtúbulos como ejemplo, se aplica un voltaje de DC para inducir la migración electroforética al electrodo SAM recubiertos de una manera reversible. Una cámara de flujo se utiliza para obtener imágenes de la migración y los patrones de electroforesis de microtúbulos<em> In situ</em> Mediante microscopía de epifluorescencia. Este método es generalmente aplicable a los patrones de biomoléculas, ya que emplea la electroforesis para inmovilizar las moléculas objetivo y por lo tanto no requiere de interacciones moleculares específicas. Además, evita los problemas encontrados al intentar patrón de las moléculas de SAM directamente utilizando técnicas litográficas. La compatibilidad con litografía por haz de electrones permite a este método que se utilizará para las biomoléculas patrón en la nanoescala.

Protocol

Preparación de los reactivos Preparar tampón PIPES (80 TUBOS mM, 1 mM MgCl2, 1 mM EGTA, ajustada a pH 6,8 con KOH). Alícuota y almacenar la glucosa oxidasa, catalasa y glucosa a -70 ° C y taxol a -20 ° C de acuerdo con los protocolos existentes. 1,2 alícuotas y la tubulina almacenar a -70 ° C de acuerdo con las instrucciones que se incluyen por el proveedor. Au microelectrodos patrón utilizando la litografía Corte de obleas…

Discussion

La migración de MT es fácil de visualizar mediante microscopía de fluorescencia debido a su brillo y la fluorescencia de fondo bajo. El método es aplicable en general a los patrones de biomoléculas, ya que sólo se requiere que las biomoléculas ser inducidos a realizar un cargo neto por el ajuste adecuado del pH. Electroósmosis se evita en esta configuración, porque no hay superficies cargadas, tales como las paredes de sílice utilizado en electroforesis capilar.

Varias modificacion…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
2-[methoxypoly-(ethyleneoxy)propyl]-trimethoxysilane (PEG-silane)		Gelest, Inc.	SIM6492.7	6-9 PEG units; molecular weight 450-600 g mol-1
2-mercaptoethanol		Sigma	M7522
Acetone		EMD Chemicals	AX0120-8	ACS grade
Catalase		Calbiochem	219001-5MU
Chlorobenzene		EMD Chemicals	MK441908	ACS grade
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid (EGTA)		Calbiochem	324626
Glucose		EMD Chemicals	DX0145-1
Glucose oxidase		MP Biomedicals	100330
Guanosine-5’-[(α,Β)-methyleno]triphosphate, Sodium salt (GMPCPP)		Jena Biosciences, GmbH	NU-405s
Guanosine-5’-triphosphate		Sigma	G8752
Isopropanol		EMD Chemicals	PX1835-5	ACS grade
Methyl isobutyl ketone (MIBK)		Fisher Scientific	AC12739-0010
Paclitaxel (taxol)		Calbiochem	580555
Piperazine-N,N”-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES)		Sigma	P1851
Polymethylmethacrylate (PMMA)		Brewer Science, Inc.	950K	molecular weight 950K
Rhodamine tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T331M	from bovine brain 99% pure, lyophilized
Toluene		EMD Chemicals	TX0735-5	ACS grade
Tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T238	from bovine brain 99% pure, lyophilized

No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003”) diameter) can be obtained from electronic supply companies.