Se presenta un procedimiento para la formación de un poli (etilenglicol) auto-ensambladas monocapa (PEG-SAM) en un substrato de silicio con microelectrodos de oro. El PEG-SAM se forma en un solo paso y evita la contaminación biológica en las superficies de silicio y oro. Electroforesis se utiliza para modelar biomoléculas a la nanoescala.
Abstract
Se presenta un procedimiento para la formación de un poli (etilenglicol) (PEG) trimetoxisilano auto-ensambladas monocapa (SAM) en un substrato de silicio con microelectrodos de oro. El PEG-SAM se forma en una etapa de montaje simple y evita incrustaciones en las superficies de silicio y oro. El SAM se utiliza para microelectrodos abrigo estampado con el estándar, de tono positivo litografía. El uso de los microtúbulos como ejemplo, se aplica un voltaje de DC para inducir la migración electroforética al electrodo SAM recubiertos de una manera reversible. Una cámara de flujo se utiliza para obtener imágenes de la migración y los patrones de electroforesis de microtúbulos<em> In situ</em> Mediante microscopía de epifluorescencia. Este método es generalmente aplicable a los patrones de biomoléculas, ya que emplea la electroforesis para inmovilizar las moléculas objetivo y por lo tanto no requiere de interacciones moleculares específicas. Además, evita los problemas encontrados al intentar patrón de las moléculas de SAM directamente utilizando técnicas litográficas. La compatibilidad con litografía por haz de electrones permite a este método que se utilizará para las biomoléculas patrón en la nanoescala.
Protocol
Preparación de los reactivos Preparar tampón PIPES (80 TUBOS mM, 1 mM MgCl2, 1 mM EGTA, ajustada a pH 6,8 con KOH). Alícuota y almacenar la glucosa oxidasa, catalasa y glucosa a -70 ° C y taxol a -20 ° C de acuerdo con los protocolos existentes. 1,2 alícuotas y la tubulina almacenar a -70 ° C de acuerdo con las instrucciones que se incluyen por el proveedor. Au microelectrodos patrón utilizando la litografía Corte de obleas…
Discussion
La migración de MT es fácil de visualizar mediante microscopía de fluorescencia debido a su brillo y la fluorescencia de fondo bajo. El método es aplicable en general a los patrones de biomoléculas, ya que sólo se requiere que las biomoléculas ser inducidos a realizar un cargo neto por el ajuste adecuado del pH. Electroósmosis se evita en esta configuración, porque no hay superficies cargadas, tales como las paredes de sílice utilizado en electroforesis capilar.
Varias modificacion…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconocemos Melissa Grunlan útil para los debates sobre la formación de SAM. Esta investigación fue financiada en parte por la Fundación Robert A. Welch (A-1585).
No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003) diameter) can be obtained from electronic supply companies.
Noel, J., Teizer, W., Hwang, W. Antifouling Self-assembled Monolayers on Microelectrodes for Patterning Biomolecules. J. Vis. Exp. (30), e1390, doi:10.3791/1390 (2009).