Vi presentiamo una procedura per la formazione di un poli (glicole etilenico) auto-assemblati monostrato (PEG-SAM) su un substrato di silicio con microelettrodi d'oro. Il PEG-SAM è formato in un unico passaggio ed evita biofouling sulle superfici di silicio e oro. Elettroforesi viene quindi utilizzato per biomolecole patterning fino alla scala nanometrica.
Abstract
Vi presentiamo una procedura per la formazione di un poli (glicole etilenico) (PEG) trimetossisilano monostrato auto-assemblato (SAM) su un substrato di silicio con microelettrodi d'oro. Il PEG-SAM si forma in un passo unico assembly ed evita biofouling sulle superfici di silicio e oro. La SAM è utilizzato per microelettrodi cappotto fantasia con lo standard, positivo-tono litografia. Utilizzando il microtubulo come esempio, si applica una tensione continua di indurre la migrazione elettroforetica al SAM-elettrodo rivestito in modo reversibile. Una camera di flusso viene utilizzato per l'imaging e la migrazione elettroforetica patterning microtubuli<em> In situ</em> Usando la microscopia in epifluorescenza. Questo metodo è generalmente applicabile a patterning biomolecole, in quanto impiega l'elettroforesi per immobilizzare molecole bersaglio e quindi non richiede specifiche interazioni molecolari. Inoltre, evita i problemi incontrati nel tentativo di modello le molecole SAM direttamente utilizzando tecniche litografiche. La compatibilità con la litografia a fascio elettronico permette a questo metodo da utilizzare per biomolecole modello su scala nanometrica.
Protocol
Preparazione dei reagenti Preparare tampone TUBI (80 TUBI mM, 1 mM MgCl 2, 1mM EGTA, portato a pH 6,8 con KOH). Aliquota e glucosio ossidasi negozio, la catalasi e il glucosio a -70 ° C e taxolo a -20 ° C secondo i protocolli esistenti. 1,2 Aliquotare e tubulina conservare a -70 ° C secondo le istruzioni fornite dal fornitore. Modello microelettrodi Au utilizzando la litografia Tagliare wafer di silicio in 1,5 1 cm 'substrati…
Discussion
La migrazione di MTS è facilmente visualizzabile usando la microscopia a fluorescenza per la loro luminosità e la fluorescenza di fondo basso. Il metodo è generalmente applicabile a patterning biomolecole, in quanto richiede solo che il biomolecole essere indotto a portare un onere netto di regolazione adeguata del pH del buffer. Elettroosmosi è evitato in questa configurazione perché non ci sono superfici di carico, come le pareti di silice utilizzata in elettroforesi capillare.
Divers…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Riconosciamo Melissa Grunlan per utili discussioni sulla formazione di SAM. Questa ricerca è stata sostenuta in parte dalla Fondazione A. Robert Welch (A-1585).
No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003) diameter) can be obtained from electronic supply companies.
Noel, J., Teizer, W., Hwang, W. Antifouling Self-assembled Monolayers on Microelectrodes for Patterning Biomolecules. J. Vis. Exp. (30), e1390, doi:10.3791/1390 (2009).