Antivegetativa monostrati auto-assemblati su microelettrodi per Biomolecole Patterning

Summary

Vi presentiamo una procedura per la formazione di un poli (glicole etilenico) auto-assemblati monostrato (PEG-SAM) su un substrato di silicio con microelettrodi d'oro. Il PEG-SAM è formato in un unico passaggio ed evita biofouling sulle superfici di silicio e oro. Elettroforesi viene quindi utilizzato per biomolecole patterning fino alla scala nanometrica.

Abstract

Vi presentiamo una procedura per la formazione di un poli (glicole etilenico) (PEG) trimetossisilano monostrato auto-assemblato (SAM) su un substrato di silicio con microelettrodi d'oro. Il PEG-SAM si forma in un passo unico assembly ed evita biofouling sulle superfici di silicio e oro. La SAM è utilizzato per microelettrodi cappotto fantasia con lo standard, positivo-tono litografia. Utilizzando il microtubulo come esempio, si applica una tensione continua di indurre la migrazione elettroforetica al SAM-elettrodo rivestito in modo reversibile. Una camera di flusso viene utilizzato per l'imaging e la migrazione elettroforetica patterning microtubuli<em> In situ</em> Usando la microscopia in epifluorescenza. Questo metodo è generalmente applicabile a patterning biomolecole, in quanto impiega l'elettroforesi per immobilizzare molecole bersaglio e quindi non richiede specifiche interazioni molecolari. Inoltre, evita i problemi incontrati nel tentativo di modello le molecole SAM direttamente utilizzando tecniche litografiche. La compatibilità con la litografia a fascio elettronico permette a questo metodo da utilizzare per biomolecole modello su scala nanometrica.

Protocol

Preparazione dei reagenti Preparare tampone TUBI (80 TUBI mM, 1 mM MgCl 2, 1mM EGTA, portato a pH 6,8 con KOH). Aliquota e glucosio ossidasi negozio, la catalasi e il glucosio a -70 ° C e taxolo a -20 ° C secondo i protocolli esistenti. 1,2 Aliquotare e tubulina conservare a -70 ° C secondo le istruzioni fornite dal fornitore. Modello microelettrodi Au utilizzando la litografia Tagliare wafer di silicio in 1,5 1 cm 'substrati…

Discussion

La migrazione di MTS è facilmente visualizzabile usando la microscopia a fluorescenza per la loro luminosità e la fluorescenza di fondo basso. Il metodo è generalmente applicabile a patterning biomolecole, in quanto richiede solo che il biomolecole essere indotto a portare un onere netto di regolazione adeguata del pH del buffer. Elettroosmosi è evitato in questa configurazione perché non ci sono superfici di carico, come le pareti di silice utilizzata in elettroforesi capillare.

Divers…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
2-[methoxypoly-(ethyleneoxy)propyl]-trimethoxysilane (PEG-silane)		Gelest, Inc.	SIM6492.7	6-9 PEG units; molecular weight 450-600 g mol-1
2-mercaptoethanol		Sigma	M7522
Acetone		EMD Chemicals	AX0120-8	ACS grade
Catalase		Calbiochem	219001-5MU
Chlorobenzene		EMD Chemicals	MK441908	ACS grade
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid (EGTA)		Calbiochem	324626
Glucose		EMD Chemicals	DX0145-1
Glucose oxidase		MP Biomedicals	100330
Guanosine-5’-[(α,Β)-methyleno]triphosphate, Sodium salt (GMPCPP)		Jena Biosciences, GmbH	NU-405s
Guanosine-5’-triphosphate		Sigma	G8752
Isopropanol		EMD Chemicals	PX1835-5	ACS grade
Methyl isobutyl ketone (MIBK)		Fisher Scientific	AC12739-0010
Paclitaxel (taxol)		Calbiochem	580555
Piperazine-N,N”-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES)		Sigma	P1851
Polymethylmethacrylate (PMMA)		Brewer Science, Inc.	950K	molecular weight 950K
Rhodamine tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T331M	from bovine brain 99% pure, lyophilized
Toluene		EMD Chemicals	TX0735-5	ACS grade
Tubulin		Cytoskeleton, Inc.	T238	from bovine brain 99% pure, lyophilized

No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003”) diameter) can be obtained from electronic supply companies.