为介观荧光体层摄影术在体内成像的发展果蝇</em
Summary
介观荧光断层超越组织切片荧光显微镜渗透限制。该技术是基于多投影照明和光子运输说明。我们表现出体内的形态发生全身三维可视化的GFP表达翼成虫光盘<em>果蝇。</em
Abstract
可视化发展的器官的形成以及progession和治疗疾病，往往在很大程度上依赖于光学询问完整的生物体中的分子和功能的变化的能力。大多数现有的光学成像方法，在尺寸之间的渗透现代光学显微镜的限制（0.5 – 1MM）和光肉眼扩散强加的限制在于成像不足（> 1cm）发布[1]。因此，许多重要的模式生物，如昆虫，动物胚胎或小动物的四肢，保持体内的光学成像访问。
虽然有越来越多的对纳米分辨率的光学成像方法的发展利益，再也没有出现过许多成功的努力，在提高成像的穿透深度。执行超出显微镜的限制，在活体成像的能力，其实是在会见与组织中的光子散射目前相关困难。最近作出的努力，例如整个胚胎图像[2,3]，需要特殊化学处理的标本，以清除它们从散射，一个程序，使它们只适合验尸报告成像。然而，这些方法的证据成像大于通常由双光子或共聚焦显微镜，尤其是在发育生物学和药物发现，允许的标本的需要。
我们已经开发出一种新的光学名为介观荧光断层成像技术[4]，适用于尺寸在1mm – 5mm的非侵入体内成像。穿透深度的方法，交流决议，但提供了前所未有的层析成像性能，它已经开发添加为一个新的层面发育生物学观测（和其他可能的生物研究领域）传授的能力，形象演变荧光随着时间的推移标签响应。 ，因此，它可以加速的形态或功能上的基因突变或外部刺激的依赖关系的研究，重要的是，捕捉发展或组织的功能，让相同，发展的有机体的纵向时间推移可视的完整图片。
该技术采用了修改后的实验室显微镜和多投影照明在360度的预测数据收集。它适用于费米简化福克 – 普兰克光子输运方程的解，几何光学的原则结合起来，以建立一个现实的反转计划，适用于介观范围。这使得在体内样本中的非透明的三维结构可视化全身高达几个毫米大小。
我们已经证明了三维成像三个体内的技术性能发展果蝇体内和实时连续超过6小时以下的翅膀在不透明的果蝇蛹的形态发生的组织结构。
Protocol
Discussion
蛹的情况下，表达GFP的唾液腺了D在体内重建果蝇 prepupa（比例尺，500微米）与相应的组织学（蓝色，DAPI染色，绿色，绿色荧光）如图1所示（A）。时间推移D 的系列成像果蝇翅膀成虫光盘是在图1（b）所示。图像采集从单一的活标本，在四个不同的时间点（0,3.0，3.5，6.5小时）。在第一列在0度蛹的背视图的投影显示。在第二列的重建对应的红色线条表示的部分。最后，与…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
C. Vinegoni承认由美国国立卫生研究院（NIH）拨款1 RO1 – EB006432研究院的支持。
References
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