Erken embriyo şekli morfogenetik süreçleri anlamanın anahtarı, yüksek çözünürlükte görüntü hücrelerinin yeteneği. Biz burada tüm zebrafish embriyolar membran hedefli Yeşil Floresan Protein hücrelerin tek hücreler veya küçük kümeler etiketleme için kullanılan bir tekniktir açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Zebra balığı Beyin Etiketleme ve Görüntüleme Hücreleri
Bu makalede
Düzeltme bildirimi
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Özet
Özet
Anahtar erken omurgalı embriyo şekli morfogenetik süreçleri anlamak için yüksek çözünürlükte görüntü hücrelerinin yeteneği. Zebra balığı embriyosu, enjeksiyon, mozaik ifade plazmid DNA sonuçlarının tek hücreler veya küçük hücre kümeleri görünüm için izin
Protokol
1.Microinjection
- Sulandırınız plazmid kodlama membran hedefli Yeşil Floresan Protein (mGFP Richard Harland nezaket) 40 ng / ml 'lik bir konsantrasyon. DNA Qiagen Maxi Hazırlık Seti kullanarak saflaştırılmış plazmid (Richard Harland mGFP/PCS2 +, nezaket) doğrusallaştırma tarafından hazırlanmıştır. Çözümü için fenol kırmızısı (1 / 10 toplam hacmi seyreltilmiş) eklenmesi çözüm görselleştirmek için tercih edilir. Buz üzerinde DNA çözüm tutun.
- Kademeli bir slaytta iğne hizalayarak ve yavaşça temiz bir jilet kullanarak çapı 1 mikrona kadar iğne vurma, stereomikroskop altında, enjeksiyon iğnesi (Cat No. NA-GD-1 Narishinge Bilimsel, 90mm cam kılcal damar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sonuç olarak, etiketleme teknikleri zebrafish embriyo morfogenetik süreçleri tek bir hücre analizi için izin olarak tanımlanmıştır. Bu protokolün temel vurgu nöral tüp kontrolü altındaki her yerde bir organizatörü mGFP kullanarak görüntüleme etiketli hücreleri için yöntemler. Andersen ve arkadaşları tarafından yeni bir kağıt bu geçici ifade test okuyucuların ek uygulamalar için başvurmalıdır. 3.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma, R. Brewster (1R01GM085290-01A1) verilen bir NIH hibe ile desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
Çözümler
- Hank Stock # 1: 8.0 g NaCl, 0,4 g KCl 100 ml dd H 2 O
- Hank Stock # 2: 0,358 g Na 2 HPO 4 Susuz, 100 ml GKD 2 O 0.60 g KH 2 PO 4
- Hank Stock # 4: 50 ml GKD 2 O 0.72 g CaCl 2
- Hank Stock # 5: 50 ml dd H 2 O 1.23 g MgSO 4 x7H 2 O
- 1 X Fosfat Tamponu:% 0.8 NaCl,% 0,02 KCl 0,02 M PO4, pH 7,3
- Engelleme Çözüm:% 2 normal keçi serumu,% 1 sığır serum albumini (BSA),% 1 dimethysulfoxide (DMSO)
Kaynaklar
- Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish Practical approach series. , Oxford University press. (2002).
- Hong, E., Brewster, R. N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish. Development. 133, 3895-3905 (2006).
- Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Düzeltme
Formal Correction: Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain
Posted by JoVE Editors on 9/16/2010. Citeable Link.
A correction was made to Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain. There was an error in the authors affiliations. The authors have been corrected to:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1
1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County
2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2
1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County
