Morpholino حقن: طريقة لضربة قاضية الهدف التعبير الجيني لدراسة وظيفة في زيبرافيش

Abstract

المصدر: هايد د. ر. وآخرون. في فيفو Electroporation مورفولينوس في تجديد الكبار حمار وحشي الذيل زعنفة. ج. فيس إكسب. (2012)

يصف البروتوكول الضربة القاضية المستهدفة للتعبير الجيني في سمك الحمار الوحشي عن طريق حقن مورفولينو في الذيل.

Protocol

1. مورفولينو حقن في اليوم السابق لحقن morpholino، وجعل لوحة حقن (الشكل 1). تأكد من قطع درجة في نهاية واحدة من البئر، مما يساعد على استقرار الأسماك لإجراء microinjection. تمييع المورفولينو الموسوم بالفلورسين إلى التركيز المناسب (يوصي بدءا من 1.2 mM) ووضعها في حمام مائي 65 درجة مئ?…

Representative Results

الشكل 1 – الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن A. التخطيطي من لوحة الحقن، والتي هي مصنوعة من agarose ويحتوي على بئر صغيرة لعقد الأسماك خلال microinjection من مورفولينو. الشكل 2 – الأرقام 2- ?…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia