Morpholino-injectie: een methode om doelgenexpressie neer te halen om functie bij zebravissen te bestuderen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Hyde D.R., et al. In vivo elektroporatie van morfolinos in de regenererende volwassen zebravis staartvin. J.Vis. Exp. (2012)
Het protocol beschrijft gerichte knockdown van genexpressie bij zebravissen door morfolino-injectie in de staart.
Protocol
1. Morfolino injectie Maak de dag voorafgaand aan het injecteren van de morfolino een injectieplaat (figuur 1). Zorg ervoor dat u een inkeping aan het ene uiteinde van de put uitsnijdt, wat helpt de vis te stabiliseren voor de micro-injectieprocedure. Verdun het met fluoresceïne gelabelde morfolino tot de juiste concentratie (aan te bevelen te beginnen met 1,2 mM) en plaats het gedurende 5 minuten in een waterbad van 65 °C. Laad de naald met de morfolino<s…
Representative Results
Figuur 1. A. Schematisch van de injectieplaat, die is gemaakt van agarose en een kleine put bevat om de vis vast te houden tijdens de micro-insectie van de morfolino. Figuur 2. Schematisch van morfolino micro-injection. A. Plaats de vis in de schaal met de kop van de vis in de…
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Cite This Article
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).