Injeção de Morpholino: Um método para derrubar a expressão genética direcionada para estudar a função em zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hyde D.R., et al. In vivo Eletroporação de Morpholinos na Barbatanade Cauda de Zebrafish Adulto Regenerante . J. Vis. Exp. (2012)
O protocolo descreve o knockdown direcionado da expressão genética em zebrafish por injeção de morfolino na cauda.
Protocol
1. Injeção de Morfolino Um dia antes de injetar o morfolino, faça uma placa de injeção(Figura 1). Certifique-se de cortar um entalhe em uma extremidade do poço, o que ajuda a estabilizar o peixe para o procedimento de microinjeção. Diluir o morpholino marcado por fluoresceína para a concentração adequada (recomendo começar com 1,2 mM) e coloque em um banho de água de 65 °C, por 5 minutos. Carregue a agulha com o morfolino (nota:</strong…
Representative Results
Figura 1. A. Esquema da placa de injeção, que é feita de agarose e contém um pequeno poço para segurar o peixe durante a microinjeção do morfelino. Figura 2. Esquema de microinjeção de morfolino. A. Coloque o peixe no prato com a cabeça do peixe no entalhe cortado do…
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Cite This Article
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).