モルフォリノ注射:ゼブラフィッシュの機能を研究する遺伝子発現をノックダウンする方法

Abstract

出典:ハイドD.R.、他再生成大人ゼブラフィッシュテールフィンへのモルフォリノスのインビボエレクトロポレーション.J. ヴィス・エクス(2012)

プロトコルは、尾部のモルフォリノ注射によるゼブラフィッシュにおける遺伝子発現の標的型ノックダウンを記述する。

Protocol

1. モルフォリーノ注射 モルフォリーノを注入する前日に、射出プレートを作る(図1)。井戸の一方の端でノッチを切り取るようにしてください, これは、マイクロインジェクション手順のための魚を安定させるのに役立ちます. フルオレセインタグ付きモルフォリーノを適切な濃度(1.2 mMから始めることを推奨)に希釈し、65°Cの水浴に5分間入れます。 …

Representative Results

図 1.A. アガロースから作られ、モルフォリーノのマイクロインジェクション中に魚を保持する小さな井戸を含む注入プレートの模式図。 図 2.モルフォリノマイクロインジェクションの概略図。A.魚の頭を井戸…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia