Стрептозоцин Лечение: Зебрафиш Модель типа 1 Сахарный диабет

Overview

Это видео описывает технику создания модели зебры для сахарного диабета типа 1 с помощью препарата Стрептозоцин, для изучения патофизиологии диабетических осложнений и метаболической памяти.

Protocol

1. Поколение зебры с сахарным диабетом, DM рыбы

1. Подготовь как восстановительные, так и анестетические резервуары для воды. Восстановительная вода является нормальной рыбной водой. Для анестезии воды добавить достаточно 2-феноксиэтанол так, что 1:1,000 разбавления в нормальной рыбной воде достигается.
2. Приготовьте 0,3% раствор (в паровой капюшон) стрептозоцина (СТЗ), добавив 6 мг СТЗ в 2 мл 0,09% хлорида натрия и сразу же поместите раствор на лед. Это обеспечит достаточное количество инъекционного раствора для инъекций примерно 20 рыб в 20 мин. Если вы превысите 20-минутную отметку, остановитесь и сделайте новое решение по ЮТ перед началом работы. В отдельной трубке aliquot достаточно солевого раствора для контроля рыбы. После того, как ЮТЗ solubilized все последующие шаги не требуют использования дыма капот.
3. Заполните шприц 1/2 см, оснащенный иглой калибра 27 1/2 с помощью СТЗ или контрольных решений, обеспечивающих, чтобы пузырьки воздуха не оказались в ловушке.
4. Обезболивать каждую рыбу индивидуально, помещая рыбу в обезболивающее, и ждать, пока их плавание движение прекратится (1-2 мин).
5. После анестезии кратко поместите рыбу на бумажное полотенце, чтобы поглотить излишки воды, поместите рыбу в вес лодки и измерить массу рыбы.
6. Поместите рыбу на твердую поверхность (крышка чашки Петри) для инъекций.
7. Ввимите СТИ или контрольный раствор в брюшную полость рыбы, вставив иглу мимо скошенной в задний аспект брюшного перитонеума.
8. По каждой рыбе должно быть доставлено 0,35 мг/г (350 мг/кг), а объем требуемого раствора в 0,3% можно рассчитать следующим образом.
   1. Умножьте массу рыбы (г) на 0,35, чтобы дать количество ТС в мг требуется.
   2. разделить продукт, генерируемый выше, на 3, чтобы дать объем 0,3% раствора, необходимого для инъекций в мкл.
      Образец: Для рыбы 0,5 г: а) 0,5 х 0,35 и 0,175 б) .0175/3 " 0,058 мл и 58 л.
      Такой же объем без ЮТЗ будет введен для контрольной рыбы. Лист для объемов для впрыски на массу рыбы должен быть создан и использован для быстрой справки.
9. После инъекции поместите рыбу в резервуар для восстановления воды и контролировать их для нормальной деятельности плавания. После того, как это было достигнуто, рыба передается в нормальный живой резервуар, который поддерживается в диапазоне пониженной температуры от 22 градусов по Цельсию до 24 градусов по Цельсию. Эта пониженная температура имеет решающее значение для эффективной индукции гипергликемии (сахарный диабет, DM).
10. Хотя гипергликемия обнаруживается в течение 24 часов после первой инъекции, для того, чтобы вызвать длительное состояние очень высокой гипергликемии зебры требуют частой фазы индукции инъекций с последующими еженедельными инъекциями обслуживания, как показано ниже.

Неделя 1: 3 инъекции (День 1, 3, 5), Неделя 2: 1 инъекция (День 12), Неделя 3: 1 инъекция (День 19), Неделя 4: (День 21) Выполните анализ интереса.

На данный момент зебрафиш, как считается, были в длительном состоянии гипергликемии и проявляют диабетические осложнения ретинопатии, нефропатии, а также нарушения регенерации плавника. Они называются DM рыбы. Кроме того, при желании рыба может поддерживаться в гипергликомическом состоянии с еженедельными инъекциями обслуживания. Приблизительно 5% смерти в ходе этого процесса следует ожидать.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.