لدراسة<em> Myxococcus زانثس</em> سرب السلوك ، قمنا بتصميم بروتوكول microcinematography مرور الزمن التي يمكن تعديلها لفحوصات مختلفة. انها توظف ظروف النمو القياسية تكييفها للفحص المجهري ، وتعطي نتائج استنساخه من خلال استخدام غير مكلفة ، والحشايا السيليكون التي يعاد استخدامها. وقد استخدمنا هذا الأسلوب لتحديد الكيميائي متعددة الخلايا.
Abstract
سرب من δ – proteobacterium زانثس Myxococcus تحتوي على الملايين من الخلايا التي تتصرف كحركة جماعية تنسيق من خلال سلسلة من إشارات إلى إنشاء مجمع ، وأنماط دينامية واستجابة لمنبهات البيئية. هذه الأنماط هي التنظيم الذاتي والناشئة ، لا يمكن التنبؤ من خلال مراقبة سلوك الخلايا الفردية. باستخدام تتبع microcinematography الوقت الفاصل بين مقايسة ، حددنا نمطا متميزا الناشئة في م. دعا زانثس الكيميائي ، الذي يعرف بأنه حركة موجهة من سرب يصل الانحدار نحو مصدره المغذيات 1.
طورنا من أجل تميز بكفاءة الكيميائي عبر مرور الزمن microcinematography ، لوحة معقدة للغاية للتعديل (الشكل 1) ، وشيدت مجموعة من 8 المجاهر (الشكل 2) ، كل قادر على الفيديو مرور الزمن الالتقاط. في مقايسة غير دقيق بما فيه الكفاية للسماح النسخ ثابت من البيانات القابلة للقياس الكمي ، وأشرطة الفيديو مما يتيح لنا مراقبة وتعقب التغييرات الطفيفة في السلوك سرب. القبض على مرة واحدة ، يتم نقل مقاطع الفيديو إلى جهاز كمبيوتر التحليل / التخزين مع ذاكرة كافية لمعالجة وتخزين الآلاف من أشرطة الفيديو. وقد أثبت مرونة هذا الإعداد مفيد لعدد من أعضاء م. زانثس المجتمع.
Protocol
الإمدادات اللازمة : Klett متر ماصة ونصائح 2.5 مل أنابيب microcentrifuge Microcentrifuge CTTYE وسائل الإعلام : <ul style=";text-align:right;direct…
Discussion
وقد أصبح الوقت الفاصل بين microcinematography (TM) نهج موحد لدراسة حركية بروكاريوتيك 2-7. تقليديا ، يتم تنفيذ TM باستخدام الفتائل رقة الترشيح ، ومنصات آغار رقيقة ، أو ألواح آغار بمثابة ركائز 11/08. هذه الأساليب هي كافية وفعالة من حيث التكلفة عند استخدامها لتوليد متواليات…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقدم هذا البحث ممكنا بفضل جائزة مؤسسة العلوم الوطنية شهادة (MCB – 0746066 ، توصيف المنشطات التي تنظم سلوك الترانسكربتي الناشئة) لRDW
ونحن ممتنون لShimkus LJ ، غولدمان BS ، Suen G. ، M. سنجر وولش LG ، ميرفي KA ، ونيافة تايلور لاجراء مناقشات مفيدة والتعليقات على المخطوطة.
Taylor, R. G., Welch, R. D. Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography. J. Vis. Exp. (42), e2038, doi:10.3791/2038 (2010).