Для изучения<em> Myxococcus Ксанф</em> Рой поведение, мы разработали покадровой микрокиносъемки протокол, который может быть изменен для различных анализов. Он использует стандартные условия роста адаптированы для микроскопии и дает воспроизводимые результаты за счет использования недорогих, многоразовые прокладки силикона. Мы использовали этот метод для количественного многоклеточных хемотаксис.
Abstract
Рой δ-proteobacterium Myxococcus Ксанф содержит миллионы клеток, которые действуют как коллективные, координации движения через серию сигналов для создания сложных, динамических моделей, как ответ на сигналами окружающей среды. Эти модели самоорганизации и возникающих, они не могут быть предсказаны, наблюдая за поведением отдельных клеток. Использование покадровой микрокиносъемки отслеживания анализа, мы выявили различные возникающие картины в M. Ксанф называется хемотаксис, определяется как направленное движение лазают по питательным градиент к ее источника 1.
Для того, чтобы эффективно характеризуют хемотаксис с помощью покадровой микрокиносъемки, мы разработали пластины высоко модифицируемые комплекса (рис. 1) и построен кластер из 8 микроскопов (рис. 2), каждый из которых способен захватить покадровой видео. Анализ является достаточно строгими, чтобы последовательно репликации количественные данные, и в результате видео позволяют нам наблюдать и отслеживать незначительные изменения в рой поведение. Как только захватили, видео передается анализ / хранения компьютер с достаточным объемом памяти для обработки и хранения тысяч видеороликов. Гибкость этой установки, оказалась полезной для нескольких членов М. Ксанф сообщества.
Protocol
Поставки необходимо: Klett метр Внесите и советы 2,5 мл пробирок микроцентрифужных Микроцентрифуга CTTYE СМИ: 1,0% Casitone (Difco Laboratories), 0,5% дрожжевого экстракта (Difco Laboratories), 10,0 мМ Трис-HCl (рН 8,0), 1,0 мМ KH 2 PO 4, 8,0 мМ MgSO 4 TPM СМИ: 10,0 мМ Три…
Discussion
Покадровый микрокиносъемки (TM) стала стандартным подходом к изучению прокариотических подвижность 2-7. Традиционно, ТМ выполняется с помощью фильтра фитили бумага, тонкая колодки агар или агар плит в качестве подложек 8-11. Эти методы являются адекватными и экономически эффе?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование стало возможным благодаря Национального научного фонда Карьера премии (MCB-0746066, Характеризация транскрипции активаторы, которые регулируют поведение Emergent), чтобы RDW
Мы благодарны LJ Шимкус, Б. Гольдман, Г. Син, М. Зингер, Л. Г. Уэлч, К. Мерфи, и Герберт Тейлор за полезные обсуждения и замечания по рукописи.
Taylor, R. G., Welch, R. D. Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography. J. Vis. Exp. (42), e2038, doi:10.3791/2038 (2010).