Registro del comportamiento multicelular en Myxococcus xanthus Las biopelículas con Time-lapse Microcinematography
Summary
Para el estudio de<em> Myxococcus xanthus</em> Comportamiento de enjambre, hemos diseñado un protocolo microcinematography lapso de tiempo que puede ser modificado para diferentes ensayos. Emplea a las condiciones normales de crecimiento adaptado para la microscopía, y con resultados reproducibles mediante el uso de empaques de bajo costo, de silicona reutilizables. Hemos utilizado este método para cuantificar la quimiotaxis multicelulares.
Abstract
Un enjambre de la δ-proteobacteria xanthus Myxococcus contiene millones de células que actúan como un movimiento colectivo, coordinando a través de una serie de señales para crear patrones complejos, dinámicos, como respuesta a señales ambientales. Estos patrones son de auto-organización y emergentes, ya que no se puede predecir mediante la observación del comportamiento de las células individuales. Mediante un ensayo de microcinematography lapso de tiempo de seguimiento, se identificaron un patrón distinto emergente en M. xanthus llamado quimiotaxis, que se define como el movimiento dirigido de un enjambre de hasta un gradiente de nutrientes hacia su fuente 1.
A fin de caracterizar de manera eficiente a través de la quimiotaxis microcinematography lapso de tiempo, hemos desarrollado un complejo altamente modificable placa (Figura 1) y construyó un grupo de 8 microscopios (Figura 2), cada uno capaz de capturar vídeos con lapso de tiempo. El ensayo es lo suficientemente riguroso como para permitir la replicación constante de datos cuantificables, y los videos resultantes nos permiten observar y rastrear cambios sutiles en el comportamiento de enjambre. Una vez capturados, los videos son trasladados a un equipo de análisis / almacenamiento con memoria suficiente para procesar y almacenar miles de videos. La flexibilidad de esta instalación ha demostrado ser útil para varios miembros de la M. xanthus comunidad.
Protocol
Discussion
Time-lapse microcinematography (TM) se ha convertido en un método estándar para el estudio de la motilidad procariotas 2-7. Tradicionalmente, la TM se lleva a cabo mediante el uso de mechas de papel de filtro, pastillas de finas agar, o agar losas como sustratos 08.11. Estos métodos son los adecuados y el coste efectivo cuando se usa para generar secuencias de imágenes de las ilustraciones general del movimiento de bacterias. Sin embargo, si las secuencias de imagen debe dar lugar a la generaci…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación fue posible gracias a un premio de la Fundación Nacional de Ciencias de Carrera (MCB-0746066, Caracterización de los activadores transcripcionales que regulan el comportamiento emergente) de RDW
Estamos muy agradecidos a LJ Shimkus, Goldman BS, Suen G., Singer M. Welch LG, Murphy KA, y HG Taylor útil para los debates y comentarios sobre el manuscrito.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1.0% Casitone | Difco Laboratories | |||
| 0.5% yeast extract | Difco Laboratories | |||
| Micro-sampling pipette | Fisher | |||
| 100 μl glass disposable tip | Fisher | |||
| 2 x 2 cm, 0.5-mm-thick silicone rubber gasket | Grace Bio-Lab Inc. |
References
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