で多細胞の動作を記録する Myxococcusザンザスバイオフィルム
Summary
勉強する<em> Myxococcusザンザス</em>群れ行動、我々は、異なるアッセイ用に変更することができるタイムラプスmicrocinematographyプロトコルを設計した。それは、顕微鏡に適合した標準的な成長条件を採用し、安価な、再利用可能なシリコンガスケットを使用して再現性のある結果が得られます。我々は、多細胞走化性を定量化するためにこのメソッドを使用している。
Abstract
δ-プロテオバクテリアMyxococcusザンザスの群れは、環境の手がかりへの応答として、複雑な、動的なパターンを作成するために一連の信号を通じて、集団的、協調運動として作用する細胞の数百万が含まれています。これらのパターンは、自己組織化と創発であり、それらは個々の細胞の挙動を観察することによって予測することはできません。タイムラプスmicrocinematography追跡アッセイを用いて、我々は、M.の明確な緊急のパターンを同定したザンザスは、そのソース1に向けて栄養勾配まで群れの指示運動として定義されて、走化性と呼ばれる。
効率的にタイムラプスmicrocinematographyを経由して走化性を特徴付けるために、我々は高度に変更可能なプレート複合体を開発した（図1）と8顕微鏡（図2）、キャプチャタイムラプスビデオの各能力のクラスタを構築した。アッセイは、定量データの一貫性のある複製を可能にするのに十分厳格であり、結果のビデオは、私たちは群れの行動の微妙な変化を観察し、追跡することができます。一度キャプチャ、ビデオはビデオの何千もの処理および格納するのに十分なメモリと分析/ストレージコンピュータに転送されます。このセットアップの柔軟性は、M.のいくつかのメンバーに役立っていますザンザスコミュニティ。
Protocol
Discussion
タイムラプスmicrocinematography（TM）は、原核生物の運動性2-7を研究するための一般的な手法となっています。伝統的に、TMは、基板8から11のようにろ紙の芯、薄い寒天パッド、または寒天のスラブを使用して実行されます。細菌の運動の一般的なイラストのためのイメージシーケンスを生成するために使用するときにこれらのメソッドは効果が十分とコストです。しかし、イメ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、RDWの国立科学財団のキャリア賞（MCB – 0746066、創発行動を規制する転写活性化因子の特性）によって可能となった
私たちは、原稿上で有用な議論やコメントのためのLJシムカス、BSゴールドマン、G.孫、M.歌手、LGウェルチ、KAマーフィー、およびHGテイラーに感謝しています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1.0% Casitone | Difco Laboratories | |||
| 0.5% yeast extract | Difco Laboratories | |||
| Micro-sampling pipette | Fisher | |||
| 100 μl glass disposable tip | Fisher | |||
| 2 x 2 cm, 0.5-mm-thick silicone rubber gasket | Grace Bio-Lab Inc. |
References
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