الاستقراء والرصد من أحدث نوع فرط الحساسية المتأخرة (DTH) في الفئران

Summary

تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة CCR7 – المستجيب الخلايا اللمفية تي الذاكرة. نحن هنا لشرح كيفية حمل DTH النشطة في الفئران لويس ومراقبة الاستجابة للالتهابات.

Abstract

تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة CCR7 – المستجيب الخلايا اللمفية تي الذاكرة التي اختراق موقع من حقن ضد مستضد التي كانت تستعد للنظام المناعي. ويتسم رد فعل التهابية بواسطة احمرار وتورم في موقع التحدي مستضدي. ذلك هو نموذج مناسب لتحديد فعالية في الجسم الحي للمناعة. يمكن أن يتسبب DTH الجلدي إما عن طريق نقل بالتبني من الخلايا الليمفاوية T مستضد محددة أو عن طريق التحصين النشط مع مستضد ، وتحديا لاحقة مع الأدمة للمستضد للحث على رد فعل التهابية في منطقة الجلد معين. يمكن أن يتسبب ردود DTH لمستضدات مختلفة ، على سبيل المثال ovalbumin ، السلين والتيتانوس توكسويد ، أو ثقب المفتاح هيموسيانين اللزيق (KLH).

نحن هنا لشرح كيفية إحداث تفاعل نشط DTH في الفئران لويس. ونحن نستعد لأول مرة في المياه مستحلب النفط من KLH ، مستضد لدينا مصلحة في استكمال مساعد فرويند وحقن تحت الجلد هذا المستحلب للفئران. وهذا رئيس الجهاز المناعي لتطوير الخلايا التائية الذاكرة الموجهة إلى KLH. بعد سبعة أيام سوف نتحدى الفئران intradermally على الظهر مع KLH على جانب واحد مع ovalbumin ، وهو مستضد غير ذات صلة ، وعلى الجانب الآخر. سيكون رد فعل التهابية تكون مرئية 16-72 ساعة في وقت لاحق ، وسيتم قياس منطقة حمراء ومنتفخة كمؤشر لشدة DTH.

Protocol

1. إعداد مستحلب المستحلب هو مزيج 01:01 من المستضد (يمكن أن يتسبب DTH لمستضدات مختلفة : ovalbumin ، ذوفان الكزاز ، ثقب المفتاح اللزيق هيموسيانين….) في محلول مائي إضافة إلى استكمال مساعد فرويند. من المهم جدا لإضافة المستضد إلى مسا?…

Discussion

لقياس أكثر دقة للتفاعل DTH نوصي تحدي الفئران مع المستضد في الصيوان من الأذن. ويمكن بعد ذلك أن يكون رد الفعل كما يقاس الفارق بين تورم في الأذن بالأذن مستضد تحدى ذات الصلة والأذن الطعن إما مع المياه المالحة وحدها أو مع مستضد غير ذي صلة. ويرد تظاهرة التحدي في الأذن في 1.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.