Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos

Summary

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7 efetuador linfócitos T de memória. Aqui demonstramos como induzir DTH ativa em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Abstract

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por linfócitos efetores CCR7-T de memória que infiltram o local da injeção de um antígeno contra o qual o sistema imunológico tem sido preparado. A reação inflamatória é caracterizada por vermelhidão e inchaço do local de desafio antigênico. É um modelo conveniente para determinar a eficácia in vivo de imunossupressores. DTH cutânea pode ser induzida ou por transferência adotiva de linfócitos T antígeno-específicos ou por imunização ativa com um antígeno e subseqüente desafio intradérmico com o antígeno para induzir a reação inflamatória da pele em uma área determinada. Respostas DTH pode ser induzida a vários antígenos, por exemplo ovalbumina, tuberculina, toxóide tetânico, ou limpet keyhole hemocianina (KLH).

Aqui demonstramos como para induzir uma reação ativa DTH em ratos Lewis. Vamos primeiro preparar uma emulsão de água em óleo de KLH, nosso antígeno de interesse, em completa adjuvante de Freund e injetar este emulsão por via subcutânea a ratos. Isso vai preparar o sistema imunológico para desenvolver células de memória T direcionado para KLH. Sete dias mais tarde, vai desafiar os ratos por via intradérmica na parte traseira com KLH de um lado e com ovalbumina, um antígeno irrelevante, do outro lado. A reação inflamatória será visível 16-72 horas mais tarde, a área vermelha e inchada será medida como uma indicação da gravidade da DTH.

Protocol

1. Preparação da emulsão A emulsão é uma mistura 1:1 do antígeno (DTH pode ser induzida a vários antígenos: ovalbumina, toxóide tetânico, limpet keyhole hemocianina ….) em solução aquosa adicionado ao adjuvante completo de Freund. É muito importante adicionar o antígeno ao adjuvante e não o contrário! Há uma grande quantidade de resíduos ao fazer e injetando uma emulsão, por isso sempre preparar 1,5 ou 2 vezes mais do que o que você precisa. Dis…

Discussion

Para uma medição mais precisa da reação DTH recomendamos desafiando os ratos com o antígeno no pavilhão da orelha. A reação pode ser medido como uma diferença no ouvido inchaço entre o ouvido antígeno desafiou relevantes eo ouvido desafiados com solução salina, sozinho ou com o antígeno irrelevante. Uma demonstração do desafio no ouvido é mostrado na 1.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.