ラットにおけるアクティブ遅延型過敏（DTH）の誘導とモニタリング

Summary

遅延型過敏症（DTH）はCCR7 -エフェクターメモリーTリンパ球によって媒介炎症反応です。ここでは、ルイスラットでアクティブなDTHを誘導し、炎症反応を監視する方法を示します。

Abstract

遅延型過敏症（DTH）は、免疫系がプライミングされているに対して、抗原の注射の部位に侵入CCR7 -エフェクターメモリーTリンパ球によって媒介炎症反応です。炎症反応は、抗原投与の部位の発赤や腫れが特徴です。それは、免疫抑制剤のin vivo有効性の判断に便利なモデルです。皮膚DTHは、抗原特異的Tリンパ球の養子移入によってまたは抗原、および特定の皮膚領域での炎症反応を誘導する抗原とその後の皮課題と能動免疫のいずれかによって誘導することができる。 DTH反応は例えば卵白アルブミン、ツベルクリン、破傷風トキソイド、またはキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）のために、種々の抗原に誘導することができる。

ここでは、ルイスラットでアクティブなDTH反応を誘導する方法を示します。我々は最初の完全フロイントアジュバントにKLH、興味のある私たちの抗原、の油中水型のエマルジョンを調製し、ラットに皮下このエマルジョンを注入します。これは、KLHに向けメモリーT細胞を開発するために免疫システムをプライミングします。七日後に私たちは反対側に、一方の側に、卵白アルブミン、無関係の抗原とKLHとの背中に皮ラットに挑戦する。炎症反応は、16から72時間後に表示されますし、赤く腫れ面積はDTH重症度の指標として測定されます。

Protocol

1。エマルションの調製エマルジョンは、抗原の1:1混合物である（DTHを種々の抗原に誘導することができる：卵白アルブミン、破傷風トキソイド、水溶液中のキーホールリンペットヘモシアニン….)は、フロイントアジュバントを完了するために追加しました。それは、アジュバントとしない他の方法でラウンドして抗原を追加することが非常に重要です！ 乳剤を作り?…

Discussion

DTH反応のより正確な測定のために我々は、耳の耳介に抗原のラットに挑戦することをお勧めします。反応は、その後、関連する抗原チャレンジ耳と単独で生理食塩水のどちらか、または無関係な抗原を持つ障害者の耳との間で腫れ耳の差として測定することができる。耳のチャレンジのデモは、1に示されています。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.