쥐에서 Active 지연 유형 과민성 (DTH)의 유도 및 모니터링

Summary

지연 유형 과민성 (DTH)는 CCR7 – 효과기 기억 T의 lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 여기 루이스 쥐에 적극적으로 DTH를 유발하고 염증 반응을 모니터링하는 방법을 보여줍니다.

Abstract

지연 유형 과민성 (DTH)은 면역 시스템이 준비하는되어있는 대한 항원의 주사의 사이트를 침투 CCR7 – 효과기 기억 T의 lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 염증 반응은 antigenic 도전의 사이트의 빨갛게과 팽창이 특징입니다. 그것은 면역 억제제의 생체내 효능에 결정하는 편리한 모델입니다. 피부 DTH는 항원에 특정한 T의 lymphocytes의 입양 전송 또는 항원, 그리고 주어진 피부 영역에서 염증 반응을 유발하는 항원과 이후의 intradermal 도전과 적극적인 예방 접종을 통해 유도된 수 있습니다. DTH 반응은 예를 들어 ovalbumin, 투베르쿨린,​​ 파상풍 toxoid, 또​​는 열쇠 림펫 hemocyanin (KLH)에 대한 다양한 항원을 유도하실 수 있습니다.

여기 루이스 쥐에서 활약 DTH 반응을 유도하는 방법을 보여줍니다. 우리가 먼저 프로 인드의 도움이되는을 완료에 KLH,이자 우리의 항원의 물 – 인 – 오일 에멀젼을 준비하고 쥐에 subcutaneously이 유제를 주입합니다. 이것은 KLH로 이동 메모리 T 세포를 개발하는 면역 체계를 주요 것입니다. 세븐 일 후 우리는 반대편에, 한쪽과 ovalbumin,없는 항원과 KLH와 함께 뒷면에 intradermally 쥐에 도전합니다. 염증 반응이 16~72시간 나중에 볼 수 있으며 빨간색과 부풀어 지역은 DTH 심각의 표시로 측정됩니다.

Protocol

1. 유제의 준비 ovalbumin는 파상풍 toxoid, 수용액의 열쇠 림펫 hemocyanin ….)은 프로 인드의 도움이되는를 완료하는 데 추가 : 유제는 항원의 1:1 혼합물 (DTH는 다양한 항원을 유도 할 수있다. 그것은 도움이되는가 아닌 다른 방법으로 라운드에 항원을 추가하는 것이 매우 중요합니다! 결정과 유제를 주입하면 폐기물이 많이있다, 그래서 항상 당신이 필요로했던 것보다 1.5 또는 2 …

Discussion

DTH 반응보다 정확한 측정을 위해 우리는 귀의 날개에있는 항원과 쥐 도전하는 것이 좋습니다. 반응은 다음 관련 항원 – 도전 귀가하거나, 생리 혼자 또는없는 항원과 도전 귀 사이에 붓기 귀에 차이로 측정할 수 있습니다. 귀에에 도전 데모는 1로 표시됩니다.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.