चिकी भ्रूण निकालें के murine तंत्रिका शिखा स्टेम सेल की खेती के लिए उत्पादन
Summary
इन विट्रो में तंत्रिका शिखा स्टेम कोशिकाओं (NCSC) खेती, एक विशेष माध्यम (NCSCM) की आवश्यकता है. NCSCM का आवश्यक हिस्सा लड़की भ्रूण निकालने (CEE) है. हम यहाँ से सही तकनीक का वर्णन करने के लिए शुद्ध और उच्च गुणवत्ता CEE की एक अधिकतम राशि अलगाव, थकावट, centrifugation, और निस्पंदन प्रक्रियाओं के रूप में विवरण सहित उत्पादन.
Abstract
तंत्रिका शिखा embryogenesis दौरान न्यूरो बाह्य त्वक स्तर से उठता है और केवल अस्थायी तौर पर बनी रहती है. प्रारंभिक प्रयोगों को पहले से ही pluripotent पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं proofed तंत्रिका शिखा 1 के एक अभिन्न अंग होना है. Phenotypically, तंत्रिका शिखा स्टेम कोशिकाओं (NCSC) तंत्रिका शिखा 2,3,4,5 से अपने प्रवास के दौरान एक साथ p75 (कम affine तंत्रिका वृद्धि कारक रिसेप्टर, LNGFR) और SOX10 व्यक्त द्वारा परिभाषित कर रहे हैं. इन पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं, chromaffin कोशिकाओं, न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं melanocytes के रूप में अच्छी तरह के रूप में उपास्थि और हड्डी 6,7,8,9 में अंतर कर सकते हैं . इन विट्रो, एक विशेष तंत्रिका शिखा स्टेम सेल मध्यम (NCSCM) में NCSC खेती के लिए 10 आवश्यक है . NCSCM का सबसे जटिल हिस्सा लड़की भ्रूण (CEE) निकालने NCSC के लिए के रूप में अच्छी तरह के रूप में तंत्रिका explants के अन्य प्रकार के लिए एक वृद्धि कारकों की आवश्यक स्रोत का प्रतिनिधित्व करने की तैयारी है. CEE के बगल में अन्य NCSCM सामग्री व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं. उत्पादन सीसीई प्रयोगशाला का उपयोग मानक उपकरण यह उच्च महत्व का है अलगाव, थकावट, centrifugation, और निस्पंदन प्रक्रियाओं के रूप में चुनौतीपूर्ण विवरण के बारे में पता है. इस प्रोटोकॉल में हम सटीक शुद्ध और उच्च गुणवत्ता CEE की एक अधिकतम राशि का उत्पादन तकनीक का वर्णन.
Protocol
Discussion
यह प्रोटोकॉल है कि अतीत 10,11 में वर्णित किया गया है प्रक्रियाओं के संशोधनों पर आधारित है. पूर्व प्रकाशन के लिए इसके अलावा में हम यहाँ व्यक्ति की प्रक्रिया के विभिन्न चरणों और अधिक विस्तार दिखाते हैं….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
और Markus Pajtler और रॉबर्ट Bohrer के समर्थन सलाह इस प्रोटोकॉल के दृश्य के लिए अमूल्य थे.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
References
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