Производство Чик извлечение эмбрионов для выращивания мышей нервных стволовых клеток Крест
Summary
Чтобы вырастить нервного гребня стволовых клеток (NCSC) в пробирке, специальные среды (NCSCM) не требуется. Значительная часть NCSCM является куриного эмбриона экстракт (ЦВЕ). Мы здесь описать точных методов для получения максимальной суммы чистого и высокого качества Центральной и Восточной Европы, в том числе детали, как изоляция, мацерации, центрифугирования и фильтрации процессов.
Abstract
Нервного гребня возникает из-за нервно-эктодермы в период эмбриогенеза и сохраняется только на время. Первые эксперименты уже проверенные плюрипотентных клеток-предшественников, чтобы быть неотъемлемой частью нервного гребня 1. Фенотипически, нервного гребня стволовых клеток (NCSC) определяются одновременно выразив p75 (низкий аффинных фактора роста нервов рецепторов, LNGFR) и SOX10 во время их миграции из нервного гребня 2,3,4,5. Эти клетки-предшественники могут дифференцироваться в клетки гладкой мускулатуры, хромаффинных клеток, нейронов и глиальных клеток, а также меланоцитов, хрящевой и костной 6,7,8,9. Чтобы вырастить NCSC в пробирке, специальные нервного гребня стволовых клеток среды (NCSCM) требуется 10. Наиболее сложной частью NCSCM является подготовка куриного эмбриона экстракт (ЦВЕ), представляющий собой важный источник роста факторов NCSC, а также для других типов нейронных эксплантов. Другие ингредиенты NCSCM рядом с Центральной и Восточной Европы имеются в продаже. Производство CCE с использованием лабораторных стандартной комплектации он имеет большое значение, чтобы знать о сложных деталей, как изоляция, мацерации, центрифугирования и фильтрации процессов. В этом протоколе описываются точных методов для получения максимальной суммы чистого и высокого качества ЦВЕ.
Protocol
Discussion
Этот протокол основан на модификации процедуры, которые были описаны в прошлом 10,11. В дополнение к бывшим публикациях мы здесь, показывают отдельные различные этапы процесса более расширены. Это подтверждает экспериментатор с важной детали обеспечения правильного разбирательс?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Поддержку и советы Маркус Pajtler и Роберт Борер были бесценны для визуализации этого протокола.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
References
- Bronner-Fraser, M., Fraser, S. E. Cell lineage analysis reveals multipotency of some avian neural crest cells. Nature. 335, 161-164 (1988).
- Stemple, D. L., Anderson, D. J. Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest. Cell. 71, 973-985 (1992).
- Rao, M. S., Anderson, D. J. Immortalization and controlled in vitro differentiation of murine multipotent neural crest stem cells. J Neurobiol. 32, 722-746 (1997).
- Paratore, C., Goerich, D. E., Suter, U., Wegner, M., Sommer, L. Survival and glial fate acquisition of neural crest cells are regulated by an interplay between the transcription factor Sox10 and extrinsic combinatorial signaling. Cell. 128, 3949-3961 (2001).
- Kim, J., Lo, L., Dormand, E., Anderson, D. J. SOX10 maintains multipotency and inhibits neuronal differentiation of neural crest stem cells. Neuron. 38, 17-31 (2003).
- Anderson, D. J., Groves, A., Lo, L., Ma, Q., Rao, M., Shah, N. M., Sommer, L. Cell lineage determination and the control of neuronal identity in the neural crest. Review Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 62, 493-504 (1997).
- Dorsky, R. I., Moon, R. T., Raible, D. W. Environmental signals and cell fate specification in premigratory neural crest. Review Bioessays. 22, 708-716 (2000).
- Sieber-Blum, M. Factors controlling lineage specification in the neural crest. Int Rev Cytol. 197, 1-33 (2000).
- Dupin, E., Real, C., Ledouarin, N. The neural crest stem cells: control of neural crest cell fate and plasticity by endothelin-3. Int Rev Cytol. 73, 533-545 (2001).
- Maurer, J., Fuchs, S., Jäger, R., Kurz, B., Sommer, L., Schorle, H. Establishment and controlled differentiation of neural crest stem cell lines using conditional transgenesis. Differentiation. 75, 890-891 (2007).
- Wu, Y. Y., Mujtaba, T., Rao, M. S. Isolation of stem and precursor cells from fetal tissue. Methods Mol Biol. 198, 29-40 (2002).
