망막 신경절 세포의 생존을 공부 시신경의 호감 상해 Murine 모델
Summary
이 프로토콜은 망막 신경절 retrogradely 세포, 및 이후 망막 신경절 세포 생존과 apoptosis를 분석하기 위해서는 시신경의 호감 부상을하기 위해 레이블을하는 방법을 보여줍니다. 그것은 녹내장을 포함하여 시신경 신경 장해의 종류에 대한 실험 질병 모델입니다.
Abstract
시신경 손상은 돌이킬 수없는 시력 상실 결과 망막 신경절 세포 (RGCs)의 점진적 죽음 뒤에, axonal 퇴보를 가져올 수 있습니다. 인간의 이러한 질병의 예는 외상 시신경 신경 장해 및 녹내장에서 시신경의 퇴행을 포함합니다. 이것은 시력 손실과 실명으로 이어지는 시신경의 머리에 전형적인 변화, 진보적인 시신경의 퇴행 및 망막 신경절 세포의 손실, 통제하는 경우,이 특징입니다.
시신경의 호감 (ONC) 부상 마우스 모델은 외상성 시신경 신경 장해에 대한 중요한 실험 질병 모델,이 모델에서는 녹내장 등 시신경 점차 망막 신경절 세포의 apoptosis에 이르게하는 호감의 부상이다. 이 질병 모델의 연결을 죽음과 치료 대책의 발전을 위해 필수적이며, 생존의 일반적인 프로세스와 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 약리 및 분자 방법은 광학 신경 장해 다양한 유형의 치료에 잠재적인 치료 시약을 파악하고 테스트하는이 모델에 사용할 수 있습니다.
여기, 우리는 일 1 망막 신경절 세포의베이스 라인 역행 라벨 (RGCs), 하루 4 (II) 광학 신경 호감 부상, (III) retinae를 수확하고 하루 RGC 생존 분석 (I)의 단계 시범에 의해 단계를 제공합니다 11과 (IV) 대표 결과.
Protocol
Discussion
시신경의 호감 부상 murine 모델 RGC 죽음과 생존의 과정을 연구하는 데 유용합니다. 이 모델은 또한 종종 RGC apoptosis과 생존에 다른 시약과 유전자의 효과를 조사하는 데 사용됩니다. 이 모델의 장점은 최소한의 변화와 재현성의 높은 수준을 가지고있다는 사실이다.
그러나, 특별한주의가이 모델의 몇 가지 단계가 필요합니다. 첫째, 시신경의 호감 부상을 만들 때, 그것은 그들?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리의 연구는 NIH, 국립 안과 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
References
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
