Зрительный нерв размозжение мышиной моделью для изучения сетчатки выживания клеток ганглия
Summary
Этот протокол показывает, как ретроградно этикетке ганглиозных клеток сетчатки, и как впоследствии сделать оптический травмы сокрушить силы, чтобы проанализировать сетчатки выживания клеток ганглия и апоптоза. Это экспериментальная модель болезни для различных типов невропатия зрительного нерва, в том числе глаукомы.
Abstract
Повреждение зрительного нерва может привести к дегенерации аксонального, а затем постепенное смерти ганглиозных клеток сетчатки (РГК), что приводит к необратимой потере зрения. Примерами таких заболеваний человека включают травматического невропатия зрительного нерва и зрительного нерва дегенерации при глаукоме. Для него характерны типичные изменения в головке зрительного нерва, прогрессивная оптическая дегенерации нерва, и потеря ганглиозных клеток сетчатки, если бесконтрольно, что приводит к потере зрения и слепоте.
Зрительный нерв раздавить (ОНК) в случае травмы мышиной модели является важной экспериментальной модели болезни травматического невропатия зрительного нерва, глаукома и др. В этой модели, размозжение зрительного нерва приводит к постепенному сетчатки апоптоза ганглиозных клеток. Это заболевание модель может быть использована для изучения общих процессов и механизмов гибели нейронов и выживания, который необходим для развития терапевтических мер. Кроме того, фармакологических и молекулярных подходы могут быть использованы в этой модели для идентификации и тестирования потенциальных терапевтических реагентов для лечения различных видов оптической невропатии.
Здесь мы предоставляем шаг за шагом демонстрацию (я) Базовый ретроградной маркировки ганглиозных клеток сетчатки (РГК) в день 1, (II), оптический нерв раздавить травм на 4 день, (III) Harvest сетчатки и анализировать РГК выживания на день 11, и (IV), представитель результат.
Protocol
Discussion
Зрительный нерв размозжение мышиной модели полезно изучить процесс РГК смертью и выживанием. Эта модель также часто используется для исследования влияния различных реагентов и генов апоптоза РГК и выживания. Одно из преимуществ этой модели является то, что он имеет высокую степень во…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Наше исследование опирается на Внутренние программы исследований NIH, Национального Института глаза.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
References
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
