עצב הראייה קראש פגיעה דגם Murine לחקר הישרדות רשתית תא גנגליון
Summary
פרוטוקול זה מראה כיצד retrogradely תווית בתאי הגנגליון ברשתית, וכיצד לאחר מכן לבצע פגיעה בעצב הראייה לרסק על מנת לנתח הגנגליון ברשתית בתא הישרדות אפופטוזיס. זהו מודל מחלה ניסויית עבור סוגים שונים של נוירופתיה אופטית, כולל גלאוקומה.
Abstract
פגיעה בעצב הראייה עלולה להוביל לניוון axonal, ואחריו מוות הדרגתי של תאים ברשתית הגנגליון (RGCs), שתוצאתה אובדן ראייה בלתי הפיך. דוגמאות של מחלות כאלה האדם כוללות נוירופתיה אופטית טראומטית ניוון עצב הראייה של גלאוקומה. הוא מאופיין על ידי שינויים טיפוסי בראש עצב הראייה, ניוון עצבי פרוגרסיבי אופטיים, ואובדן של תאים הגנגליון ברשתית, אם לא מבוקרת, מה שמוביל לאובדן ראייה ועיוורון.
עצב הראייה למחוץ (ONC) פגיעה במודל עכבר הוא מודל חשוב מחלה ניסויית עבור נוירופתיה אופטית טראומטי, גלאוקומה, וכו 'במודל זה, למחוץ את הפגיעה בעצב הראייה מוביל הדרגתי אפופטוזיס בתאי הגנגליון ברשתית. מודל זה המחלה יכול לשמש כדי לחקור את התהליכים הכלליים מנגנוני מוות עצבי והישרדות, שהוא חיוני לפיתוח אמצעים טיפוליים. בנוסף, גישות תרופתי מולקולרית ניתן להשתמש במודל זה כדי לזהות ולבדוק ריאגנטים טיפולית פוטנציאל לטפל בסוגים שונים של נוירופתיה אופטית.
כאן, אנו מספקים צעד אחר צעד הפגנה של (אני) תיוג Baseline מדרדר התאים הגנגליון ברשתית (RGCs) ביום 1, (II) עצב הראייה למחוץ פגיעה בכל יום 4, (III) קציר רשתיות ולנתח הישרדות RGC ביום 11, ו – (IV) תוצאה נציג.
Protocol
Discussion
עצב הראייה למחוץ פציעה מודל Murine שימושי ללמוד את התהליך של מוות הישרדות RGC ו. מודל זה הוא גם משמש לעתים קרובות כדי לחקור את ההשפעות של ריאגנטים גנים שונים על אפופטוזיס הישרדות RGC ו. אחד היתרונות של המודל הזה היא כי יש רמה גבוהה של שחזור עם שינויים מינימליים.
<p class="jove_conte…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחקר שלנו הוא נתמך על ידי תוכנית המחקר עירונית של, NIH National Eye Institute.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
References
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
