En Optic Nerve krosskada Murine modell för att studera näthinnan Survival Ganglion Cell
Summary
Detta protokoll visar hur retrogradely att märka retinal ganglion celler, och hur man därefter gör en optisk skada synnerven krossa för att analysera näthinnan överlevnad ganglion celler och apoptos. Det är en experimentell sjukdom modell för olika typer av optikusneuropati, inklusive glaukom.
Abstract
Skador på synnerven kan leda till axonal degeneration, följt av en gradvis död retinala ganglion celler (RGC: er), vilket resulterar i oåterkallelig synnedsättning. Exempel på sådana sjukdomar hos människor inkluderar traumatisk optisk neuropati och synnerven degeneration i glaukom. Det kännetecknas av typiska förändringar i synnerven huvudet, progressiv synnerven degeneration och förlust av retinal ganglion celler, om okontrollerat, vilket leder till synnedsättning och blindhet.
Synnerven krossa (ONC) skada mus modell är en viktig experimentell sjukdom modell för traumatiska optikusneuropati, glaukom, etc. I denna modell krossa skada på synnerven leder till gradvis retinal ganglion celler apoptos. Denna sjukdom modellen kan användas för att studera generella processer och mekanismer för neuronal död och överlevnad, vilket är nödvändigt för utveckling av terapeutiska åtgärder. Dessutom kan farmakologiska och molekylära metoder kan användas i denna modell för att identifiera och testa potentiella terapeutiska reagenser för att behandla olika typer av optikusneuropati.
Här ger vi en steg för steg demonstration av (I) Baseline retrograd märkning av retinal ganglion celler (RGC: er) på dag 1, (II) synnerven krosskada på dag 4, (III) Samla in retinae och analysera RGC överlevnad vid dag 11, och (iv) representativt resultat.
Protocol
Discussion
Synnerven krosskada mus modell är användbar för att studera processen RGC död och överlevnad. Denna modell är också ofta används för att undersöka effekterna av olika reagenser och gener RGC apoptos och överlevnad. En fördel med denna modell är att den har en hög grad av reproducerbarhet med minimala variationer.
Det är dock särskild försiktighet krävs i flera steg i denna modell. Först när du gör synnerven skada synnerven krossa, är det viktigt att inte använda för m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vår forskning stöds av Interna forskningsprogram NIH, National Eye Institute.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
References
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
