Diagnostische autopsie en Selected Tissue en Sample Collection bij ratten en muizen
Summary
Dit artikel beschrijft de procedures voor het uitvoeren van een elementaire post-mortem onderzoek van een muis of rat, en de verzameling van fundamentele organen, maar ook meer uitdagend soorten monsters uit voor histologische, microbiologische en PCR evaluatie.
Abstract
Er zijn meerdere soorten monsters die kunnen worden verzameld uit een ingeslapen dier om te helpen bij de diagnose of besmettelijke stoffen te ontdekken in een dier kolonie. Correcte inning van weefsels voor de verdere histologische verwerking kan invloed hebben op de kwaliteit van de testresultaten. Dit artikel beschrijft het gedrag van een vaste bruto onderzoek inbegrip van de identificatie van het hart, de lever, longen, nieren en milt, maar ook hoe je die organen te verzamelen. Bovendien vier van de moeilijkere weefsel / monsterneming technieken worden gedemonstreerd. Long-collectie en perfusie kan bijzonder uitdagend als het weefsel moet goed worden opgeblazen met een fixeermiddel, zodat de binnenkant van het weefsel goed te repareren en om een grondige histologische evaluatie mogelijk te maken. Dit artikel toont de stap voor stap techniek om de longen te verwijderen en het opblazen met een fixatief om een optimale fixatie van het weefsel te bereiken binnen 24 uur. Brain collectie kan al net zo uitdagend als het weefsel is zacht en gemakkelijk beschadigd. Dit artikel toont de stap voor stap techniek om bloot te leggen en de hersenen uit de schedel met minimale schade aan het weefsel. De mesenteriale lymfeklieren is een goed voorbeeld het type om in te veel voorkomende ziekteverwekkers te detecteren als enterische virussen langer blijven in de lymfklier dan ze zijn schuur in ontlasting. Dit artikel toont de stap voor stap procedure voor het lokaliseren en aseptisch het verwijderen van de mesenteriale lymfeklieren. Tenslotte kan de identificatie van besmettelijke agenten van de luchtwegen worden uitgevoerd door bacteriële cultuur of PCR-test van de neus-en / of bronchiale vloeistof zuigt genomen op autopsie. Deze procedure beschrijft het verkrijgen en het voorbereiden van de luchtwegen aspireren steekproef voor bacteriële cultuur en PCR-test.
Protocol
Discussion
Het verzamelen van gegevens op het einde van een studie kan een post mortem onderzoek van dieren. Beschrijf goed wat is gezien en vergeet niet om alle weefsels te onderzoeken. Deze procedures zijn vooral gericht op autopsie en monstername te optimaliseren voor infectieziekten surveillance, maar de meeste zijn gemakkelijk aangepast aan de gerichte onderzoeken van vermoedelijke ziekte incidenten of uitbraken in die misschien slechts een subset van de procedures zou worden gebruikt. Veel van de procedures zijn ook relevant…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalog number | Comments |
|---|---|---|---|
| Cutting board | Thermo Electron Corp Cat #36114 | Cat #36114 | |
| Small scissors | ROBOZ | RS-5910, G204 | 23mm blades, 3.5″ length, straight |
| Medium scissors | ROBOZ | RS-6808, G207 | 5″ |
| Large scissors | ROBOZ | RS-6826, G65″ | 6.25″ |
| Forceps-Curved | ROBOZ | RS-8254 (M1/21004) | 4.5″, serrated, slight curve |
| Forceps-Microdissecting | ROBOZ | RS-5238 | Hudson-(EWALD) |
| Forceps-Tissue Forceps | ROBOZ | RS–8160 | Rat tooth |
| Flame sterilizer | Oxford Labware Products | Bacti-Cinerator #5889-001007 | |
| Scalpel | Cancer Diagnostics, Inc. | Finger Scalpels #60, Cat#FS0060 | |
| Pipettes | VWR | Pasteur Pipet 5 3/4″, Cat#14672-400 | |
| Autoclave bags | Propper Manufacturing Company | Sterilizer Bag Paper Pouches Cat#021002(3100923)E09110 | For Pasteur pipettes |
| Pipette bulb | VWR | Cat#56310-240 | |
| Eppendorf tubes | Sarstedt | SafeSeal microtube 2mL, Ref#72.695 | |
| Eppendorf tubes | Argos | 5mL microtube Cat#T20765-C | |
| Syringe | BD (Beckton Dickenson) | 1ml-309602 3 ml-300910 5ml-309603 10mL Cat#309604 20mL Cat#309661 | |
| Needles | BD | 26G-309625 18G-305195 | |
| Neutral buffered formalin | VWR | 20L 10% NBF, Cat#16004-128 | |
| Saline | ThermoScientific | Buffered Blood Bank Saline, Cat#23-309-178 | |
| Trypticase soy broth | Becton Dickenson | TSB: Dehydrated, Cat#211825 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | HA Buffer, Cat#P3813-10PAK | |
| Formalin cups | VWR | 4oz Cat#36318-852 8oz Cat#36318-860 16oz Cat#36318-858 | |
| Large formalin cups | OakRidge Products | 32oz container Cat#0432-1100 | |
| Extra large formalin cup | VWR | HDPE Multipurpose 160oz container Cat#89038-282 | |
| Suture material | Henry Schein | Braided silk surgical suture, Ref#100-5000, M766750 | For mouse lung inflation |
| Twine | Staples | Cat#QUA-46173 | For rat lung inflation |
References
- AVMA. . AVMA Guidelines on Euthanasia. , (2007).
- Feldman, D. B., Seely, J. C. . Necropsy Guide: Rodents and the rabbit. , (1988).
- King, J. M., Dodd, D. C., Roth, L. . The Necropsy Book. , (2006).
- Kittel, B. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).
- Komarek, V., Fox, J. G. Chapter 1. The Mouse in Biomedical Research. , 1-22 (2007).
- Morawietz, G. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–Part 3. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).
- Popesko, P., Raijtová, V., Horák, J. . Colour Atlas of Anatomy of Small Laboratory Animals. 2, 91-106 (2002).
- Ruehl-Fehlert, C. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
