La necropsia de diagnóstico y selecta colección de tejidos y muestras en ratas y ratones
Summary
En este artículo se describen los procedimientos para la realización de un examen post-mortem básicos de un ratón o una rata, y el conjunto de órganos de base, así como más tipos de muestras reto de la evaluación histológica, microbiológicos y PCR.
Abstract
Hay varios tipos de muestras que pueden ser recogidos a partir de un animal sacrificado con el fin de ayudar a diagnosticar o descubrir los agentes infecciosos en una colonia de animales. Recolección adecuada de los tejidos para su procesamiento histológico más puede afectar la calidad de los resultados de las pruebas. Este artículo describe la realización de un examen básico bruto incluyendo la identificación de corazón, hígado, pulmones, riñones y bazo, así como la forma de recoger esos órganos. Además cuatro de las técnicas de recolección más difícil del tejido / muestra se demuestran. Colección de pulmón y de la perfusión puede ser particularmente difícil ya que el tejido tiene que ser debidamente infladas con un fijador para que el interior de los tejidos para fijar correctamente y para permitir la evaluación histológica completa. En este artículo se demuestra el paso a paso la técnica para extirpar el pulmón y se inflan con el fijador con el fin de lograr una fijación óptima del tejido dentro de las 24 horas. Colección del cerebro puede ser igualmente un reto ya que el tejido es suave y se dañan fácilmente. En este artículo se demuestra el paso a paso la técnica para exponer y extraer el cerebro del cráneo con el mínimo daño a los tejidos. El ganglio linfático mesentérico es un tipo buena muestra de que muchos de detectar agentes infecciosos comunes como los virus entéricos persisten por más tiempo en los ganglios linfáticos de lo que se eliminan en las heces. En este artículo se demuestra el procedimiento paso a paso para localizar y aséptica retirar los nódulos linfáticos mesentéricos. Finalmente, la identificación de agentes infecciosos de las vías respiratorias se puede realizar por cultivo bacteriano o la prueba de PCR de la nariz y / o bronquial líquido aspirado tomadas en la necropsia. Este procedimiento describe la obtención y preparación de la muestra de aspirado de las vías respiratorias para cultivo bacteriano y PCR.
Protocol
Discussion
La recolección de datos al final de un estudio puede requerir un examen post-mortem de los animales. Describen bien lo que se ve y recordar a examinar todos los tejidos. Estos procedimientos están diseñados principalmente para optimizar la necropsia y toma de muestras para la vigilancia de las enfermedades infecciosas, pero la mayoría se adaptan fácilmente a las investigaciones se centraron de los incidentes de sospecha de enfermedad o de brotes en los que sería tal vez sólo un subconjunto de los procedimientos e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalog number | Comments |
|---|---|---|---|
| Cutting board | Thermo Electron Corp Cat #36114 | Cat #36114 | |
| Small scissors | ROBOZ | RS-5910, G204 | 23mm blades, 3.5″ length, straight |
| Medium scissors | ROBOZ | RS-6808, G207 | 5″ |
| Large scissors | ROBOZ | RS-6826, G65″ | 6.25″ |
| Forceps-Curved | ROBOZ | RS-8254 (M1/21004) | 4.5″, serrated, slight curve |
| Forceps-Microdissecting | ROBOZ | RS-5238 | Hudson-(EWALD) |
| Forceps-Tissue Forceps | ROBOZ | RS–8160 | Rat tooth |
| Flame sterilizer | Oxford Labware Products | Bacti-Cinerator #5889-001007 | |
| Scalpel | Cancer Diagnostics, Inc. | Finger Scalpels #60, Cat#FS0060 | |
| Pipettes | VWR | Pasteur Pipet 5 3/4″, Cat#14672-400 | |
| Autoclave bags | Propper Manufacturing Company | Sterilizer Bag Paper Pouches Cat#021002(3100923)E09110 | For Pasteur pipettes |
| Pipette bulb | VWR | Cat#56310-240 | |
| Eppendorf tubes | Sarstedt | SafeSeal microtube 2mL, Ref#72.695 | |
| Eppendorf tubes | Argos | 5mL microtube Cat#T20765-C | |
| Syringe | BD (Beckton Dickenson) | 1ml-309602 3 ml-300910 5ml-309603 10mL Cat#309604 20mL Cat#309661 | |
| Needles | BD | 26G-309625 18G-305195 | |
| Neutral buffered formalin | VWR | 20L 10% NBF, Cat#16004-128 | |
| Saline | ThermoScientific | Buffered Blood Bank Saline, Cat#23-309-178 | |
| Trypticase soy broth | Becton Dickenson | TSB: Dehydrated, Cat#211825 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | HA Buffer, Cat#P3813-10PAK | |
| Formalin cups | VWR | 4oz Cat#36318-852 8oz Cat#36318-860 16oz Cat#36318-858 | |
| Large formalin cups | OakRidge Products | 32oz container Cat#0432-1100 | |
| Extra large formalin cup | VWR | HDPE Multipurpose 160oz container Cat#89038-282 | |
| Suture material | Henry Schein | Braided silk surgical suture, Ref#100-5000, M766750 | For mouse lung inflation |
| Twine | Staples | Cat#QUA-46173 | For rat lung inflation |
References
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