アーリーステージのニワトリ胚に成長因子コートビーズの配置
Summary
成長因子や様々なタンパク質は、開発中に別の細胞の運命を引き受ける細胞を誘導するために相互作用する。ここでは、E2.5のニワトリ胚にビーズを配置することにより、開発の異なるタンパク質間の相互作用の可能性に対処するためにOVO準備での使用を示します。
Abstract
神経管は、開発中に特定の時空間パターンで多くのタンパク質を発現する。これらのタンパク質は、細胞の運命決定、細胞移動、および神経回路の形成に重要であることが示されている。神経誘導とパターン形成は、骨形成タンパク質（BMP）、ソニックヘッジホッグ（SHH）、特に線維芽細胞増殖因子（FGF）を、含む。特に、FGF8の発現パターンは、BMP4およびSHHを発現している地域に近接している。この発現パターンは、終脳のパターン形成を促進する発達の相互作用と一致している。
ここでは、OVOの準備の前脳形成におけるFGFの効果をテストするために使用可能なメソッドの視覚的なデモンストレーションを提供しています。ビーズは、タンパク質でコーティングし、持続的な露出を提供するために開発し、神経管に配置されます。プロシージャが小さい、慎重に配置されたビーズを使用しているので、それは低侵襲であり、いくつかのビーズは、単一の神経管の中に配置することができます。また、この方法は、胚が解剖学および神経パターン形成の変化を検出するために、より成熟した段階で分析できるように継続的な開発が可能になります。この単純だが有用なプロトコルは、リアルタイムイメージングが可能になります。それは、内因性のタンパク質レベルに空間的かつ時間的に限られた変更を行う手段を提供します。
Protocol
Discussion
使用したい蛋白質に応じて、ビーズを準備する方法の別のプロトコルがあります。これらの実験では、我々はヘパリン – アクリルビーズを使用しますが、アフィ – ゲルのビーズを使用することもできます。我々はヘパリン – アクリルビーズは、卵アルブミンの水溶液環境での操作が容易であることを見出した。ビーズは4℃で一晩タンパク質の5リットルに浸漬されていますコントロールビーズを配置するま?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
References
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscience. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
