La colocación de crecimiento recubierto Factor-bolas en los embriones tempranos de la etapa de pollo
Summary
Una variedad de factores de crecimiento y proteínas interactúan para inducir a las células para asumir los destinos diferentes de células durante el desarrollo. Aquí se demuestra el uso de una preparación para hacer frente a ovo las posibles interacciones entre diferentes proteínas en el desarrollo mediante la colocación de las cuentas de E2.5 embriones de pollo.
Abstract
El tubo neural se expresa muchas proteínas específicas en los patrones espacio-temporales durante el desarrollo. Estas proteínas se han demostrado ser fundamental para la determinación del destino celular, la migración celular y la formación de circuitos neuronales. Inducción neuronal y los patrones implican la proteína morfogenética ósea (BMP), Sonic hedgehog (SHH), factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), entre otros. En particular, el patrón de expresión de Fgf8 se encuentra muy cerca de las regiones que expresan BMP4 y SHH. Este patrón de expresión es consistente con las interacciones que facilitan el desarrollo de patrones en el telencéfalo.
A continuación presentamos una demostración visual de un método en el que una preparación ovo puede ser utilizado para probar los efectos de la FCF en la formación del cerebro anterior. Cuentas están recubiertas con proteínas y se coloca en el tubo neural en desarrollo para proporcionar una exposición sostenida. Debido a que el procedimiento se utiliza cuentas pequeñas, cuidadosamente colocados, que es mínimamente invasiva y permite varias cuentas para ser colocado dentro de un único tubo neural. Además, el método permite el desarrollo continuado de modo que los embriones pueden ser analizados en una etapa más madura para detectar cambios en la anatomía y en los patrones neuronales. Este protocolo simple pero útil permite obtener imágenes en tiempo real. Proporciona un medio para hacer los cambios espaciales y temporales se limita a los niveles de proteína endógena.
Protocol
Discussion
En función de la proteína que desea utilizar, hay diferentes protocolos sobre cómo preparar las cuentas. En estos experimentos, el uso de heparina-acrílico cuentas, pero afi-gel cuentas también se pueden utilizar. Hemos encontrado que las cuentas de la heparina de acrílico son más fáciles de manipular en el medio acuoso de la albúmina de huevo. Cuentas se sumergen en 5 l de proteínas durante la noche a 4 ° C. Cuentas de control se colocan en PBS estéril hasta el momento de la colocación. La ventaja de utilizar una preparación …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
References
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscience. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
