تتبع التشويهات الأنسجة التخلق في جنين الفرخ المبكر
Summary
توضح هذه المقالة السطحية ووضع العلامات<em> البيضة السابقين</em> زراعة الأنسجة في جنين الفرخ المبكر. وتعرض تقنيات قابلة للمرور الوقت حقل مشرق ، ومضان ، التصوير المقطعي البصري والتماسك. التسميات السطحية تتبع للقرار spatiotemporal كميات عالية تمكن الحركية مثل سلالات التخلق (التشوهات) يتم حسابها في البعدين وثلاثة على حد سواء.
Abstract
التشوهات الجنينية ظهائر الخضوع المعقدة (مثل الانحناء والبرم ، وقابلة للطي ، وتمتد) لتشكيل أجهزة بدائية للجنين في وقت مبكر. تتبع علامات إيمانية على أسطح هذه الأوراق الخليوي هي طريقة راسخة لتقدير كميات تخلقية مثل انكماش النمو والقص. ومع ذلك ، وليس وضع العلامات السطحية جميع التقنيات قابلة للتكيف بسهولة إلى طرائق التصوير التقليدية ، وتمتلك مزايا مختلفة والقيود. هنا ، نحن تصف طرق وضع العلامات اثنين وتوضيح فائدة كل أسلوب. في الأسلوب الأول ، يتم تطبيق المئات من التسميات الفلورية في الوقت نفسه إلى الجنين باستخدام جزيئات الحديد المغناطيسي. ثم يتم استخدام هذه التسميات لكمية تشوهات الأنسجة 2 – D أثناء التشكل. في الطريقة الثانية ، تستخدم المجهرية البوليسترين كعوامل التباين في غير الغازية التصوير الضوئي التماسك (أكتوبر) التصوير المقطعي لتتبع تشوهات الأنسجة 3 – D. وقد نجحت هذه التقنياتلاي تنفيذها في مختبرنا لstudythe الآليات المادية أضعاف رأس في وقت مبكر ، والقلب ، ونمو الدماغ ، وينبغي أن تكون قابلة للتكيف لعمليات واسعة النطاق التخلق.
Protocol
Discussion
وتعرض اثنين من التقنيات لوضع العلامات نسيج الثقافة البيضة السابقين لافراخ الدجاج في وقت مبكر. الأول يستخدم الأصباغ الفلورية محبة للدهون تسليمها عبر جزيئات الحديد المغناطيسي في وقت واحد لتسمية مئات من الخلايا. ومع ذلك ، هذا الأسلوب هو حاليا غير متوافق مع التصوي?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 R01 GM075200 وHL083393 (LAT). نعترف زمالات لدعم BAF من المعاهد الوطنية للصحة T90 DA022871 ومعهد مالينكرودت من الأشعة ، وللVDV من منحة 09PRE2060795 من رابطة القلب الاميركية
Materials
| Material / Reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM – high glucose | Sigma-Aldrich | D5796 | |
| Penicillin/Streptomycin/Neomycin | Sigma-Aldrich | P4083 | |
| Chicken Serum | Invitrogen | 16110-082 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D1408 | 10X |
| Whatman #2 Filter Paper | Whatman | 1002 090 | 90mm diameter |
| Glass Micropipettes | World Precision Instruments (WPI) | TW150-6 | 1.5mm inner diameter |
| DiI | Invitrogen | D-282 | |
| Iron Reduced | Mallinckrodt Baker Inc. | 5320 | |
| 10 μm Diameter Microspheres (black) | Polysciences Inc. | 24294 | |
| Delta T Dish (for time lapse culture) | Bioptechs | 04200415B | 0.17mm thick, black |
| Delta T4 Culture Dish Controller | Bioptechs | 0420-4-03 | |
| Mini-Pump Variable Flow Device | Fisher Scientific |
References
- Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of Morphology. 88, 49-92 (1951).
- Canfield, J. G. Dry beveling micropipettes using a computer hard drive. J. Neurosci. Methods. 158, 19-21 (2006).
- Voronov, D. A., Taber, L. A. Cardiac looping in experimental conditions: the effects of extraembryonic forces. Developmental Dynamics. 224, 413-421 (2002).
- Filas, B. A., Bayly, P. V., Taber, L. A. Mechanical stress as a regulator of cytoskeletal contractility and nuclear shape in embryonic epithelia. Ann. Biomed. Eng. 39, 443-454 (2011).
- Kozel, B. A. Elastic fiber formation: a dynamic view of extracellular matrix assembly using timer reporters. J. Cell. Physiol. 207, 87-96 (2006).
- Filas, B. A., Efimov, I. R., Taber, L. A. Optical coherence tomography as a tool for measuring morphogenetic deformation of the looping heart. Anat. Rec. 290, 1057-1068 (2007).
- Varner, V. D., Voronov, D. A., Taber, L. A. Mechanics of head fold formation: investigating tissue-level forces during early development. Development. 137, 3801-3811 (2010).
- Van Essen, D. C. An integrated software suite for surface-based analyses of cerebral cortex. J. Am. Med. Inform. Assoc. 8, 443-459 (2001).
- Filas, B. A., Knutsen, A. K., Bayly, P. V., Taber, L. A. A new method for measuring deformation of folding surfaces during morphogenesis. J. Biomech. Eng. 130, 061010-061010 (2008).
- Yuan, S. Co-registered optical coherence tomography and fluorescence molecular imaging for simultaneous morphological and molecular imaging. Phys. Med. Biol. 55, 191-206 (2010).
- Zamir, E. A., Czirok, A., Rongish, B. J., Little, C. D. A digital image-based method for computational tissue fate mapping during early avian morphogenesis. Ann. Biomed. Eng. 33, 854-865 (2005).
- Blanchard, G. B. Tissue tectonics: morphogenetic strain rates, cell shape change and intercalation. Nat. Methods. 6, 458-464 (2009).
