سمل العيون الماوس لPhenotyping عالي الإنتاجية عن بعد
Summary
تقنية تشريح يوضح قلع العين الماوس لتثبيت الأنسجة لأداء phenotyping في شاشات عالية الإنتاجية.
Abstract
العين الماوس نموذجا هاما لدراسة وراثية للمرض العيون متعدية الإنسان. وقد لخص الأمراض المسببة للعمى في البشر، مثل التنكس البقعي، تنكس مبصرة، والساد، الزرق، والشبكية، واعتلال الشبكية السكري في الفئران المعدلة وراثيا، وقد تم إنشاؤها 1-5 الفئران المعدلة وراثيا ومعظم خروج المغلوب من قبل مختبرات لدراسة طب العيون الأمراض غير، ولكن حفظ الوراثية بين نظم الجهاز تشير إلى أن العديد من نفس الجينات قد تلعب أيضا دورا في تطوير العين والمرض. وبالتالي، فإن هذه الفئران تمثل موردا هاما لاكتشاف الجديد الوراثي، النمط الظاهري الارتباطات في العين. لأن تنتشر هذه الفئران في جميع أنحاء العالم، فإنه من الصعب الحصول على، والحفاظ على، والنمط الظاهري لهم بطريقة فعالة من حيث التكلفة الفعالة. وهكذا، وتقتصر معظم phenotyping العيون عالية الإنتاجية شاشات لبعض المواقع التي تتطلب في الموقع والخبرة لدراسة طب العيون في عيون الفئران الحية. 6-9 وثمة نهج بديل وضعتها مختبرنا هو وسيلة لاكتساب النائية الأنسجة التي يمكن استخدامها في عمليات المسح كبيرة أو صغيرة الحجم من العيون الماوس المعدلة وراثيا. إجراءات موحدة للفيديو المستندة إلى نقل المهارات الجراحية، تثبيت الأنسجة، والشحن تسمح لأي مختبر لجمع العيون كلها من الحيوانات متحولة وإرسالها لphenotyping الجزيئية والمورفولوجية. في هذه المقالة الفيديو، نقدم التقنيات لنقل كل من استأصل وغير المثبتة ونضح عيون الماوس الثابتة لتحاليل phenotyping البعيد.
Protocol
Discussion
الفئران المعدلة وراثيا أكثر توجد في المختبرات التي لا تفحص العينين. أسلوبنا الفيديو يوضح بسيطة، طريقة موحدة لنقل المهارات الجراحية عن بعد لتحسين اكتساب الأنسجة من المختبرات مع خبرة قليلة مع العينين. هذه التقنية تساعد في التغلب على الفيديو شرك كبير في الإنتاجية العا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
البحث للوقاية من العمى؛ Bartly J. Mondino MD، مدير معهد جول شتاين العين، UCLA، وراميرو راميريز سوليس، جاكي الأبيض، وجين Estabel في معهد سانجر، ويلكوم ترست الجينوم الحرم الجامعي. هذا البحث يتفق مع بيان أرفو لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث البصرية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
References
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).
- Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. . In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice. Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).
- Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus. Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).
- Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology. Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).
- Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase. Science. 272, 1026-1029 (1996).
- Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness. Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).
